209例兒童血清HBV標(biāo)志物與HBV DNA檢測分析

馮艷梅

（山西省呂梁市離石區(qū)中醫(yī)院，山西呂梁033000）

乙型肝炎病毒感染是世界最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一，我國是乙型病毒性肝炎的流行大國，乙型肝炎病毒表面抗原攜帶者實(shí)際人數(shù)超過1.2億，病毒性肝炎及相關(guān)性肝病如肝硬化(LC)、肝癌(HCC)，是嚴(yán)重危害我國人民健康的常見病[1]。兒童時(shí)期感染HBV者，大多數(shù)轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿腥綶2]，并在以后可能發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌，對(duì)其今后生長發(fā)育和身心健康都會(huì)帶來很大的影響，因此HBV感染的快速、敏感的診斷方法，將顯著影響慢性HBV感染的流行及其不良后果的發(fā)生。為此，筆者檢測了呂梁市209名感染兒童HBV血清學(xué)模式和HBV DNA含量，以評(píng)價(jià)血清標(biāo)志物和DNA檢測在兒童HBV感染中的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

209例血清標(biāo)本采自呂梁市離石區(qū)中醫(yī)院和地區(qū)醫(yī)院兒科2007年1月～2009年10月住院及門診HBV感染者，其中，男 132 例，女 77 例，年齡為 0.5～12 歲，平均(7.3±2.6)歲。無菌收集患者血清標(biāo)本并置-80℃冰箱中貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 血清標(biāo)志物檢測 使用上?？迫A生物工程公司試劑盒（酶聯(lián)吸附免疫法）檢測所有血清標(biāo)本 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和 HBcAb。

1.2.2 HBV DNA檢測 HBV DNA定量檢測試劑來自深圳匹基生物工程股份有限公司，采用BIO-RAD i-Cycler熒光定量PCR檢測儀進(jìn)行檢測。熒光PCR循環(huán)程序設(shè)置如下：37℃，5 min；94 ℃，1 min；95 ℃，5 s；60 ℃，30 s；42 個(gè)循環(huán)；40 μl反應(yīng)體系；60℃收集熒光信號(hào)，熒光信號(hào)收集時(shí)設(shè)定為Fam熒光素。檢測理論極限：125 copies/ml，實(shí)驗(yàn)采用陽性截止值為≥500 copies/ml。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS12.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方(χ2)檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)為 P＜0.05。

2 結(jié)果

209份標(biāo)本根據(jù)HBV血清標(biāo)志物（HBV M）陽性模式可分為四組，其中模式 1（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）85 例，模式 2(HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)71 例，模式 3(HBsAg+、HB-cAb+)46 例， 模式 4 （HBsAb+、HBeAb+/- 、HBcAb+）7 例。HBV DNA陽性率在模式1、模式2、模式3、模式4分別為96.5%、35.2%、45.7%、14.3%。 各組比較，有顯著性差異（χ2=88.556，P=0.000），見表 1。

表1 HBV M感染模式與HBV DNA陽性率的關(guān)系

3 討論

乙肝血清標(biāo)志物(HBV-M)的檢測是臨床診斷乙型肝炎病毒感染及病程發(fā)展的準(zhǔn)確而可靠的依據(jù)，也是診斷乙型肝炎的重要指標(biāo)，但主要反映人體對(duì)HBV感染的免疫狀態(tài)，沒有直接反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況，更不能作為判斷患者是否具有傳染性的直接證據(jù)；而PCR則可以準(zhǔn)確反映出HBV-DNA的復(fù)制水平、病程變化和治療恢復(fù)情況等。PCR法檢測HBV-DNA直接反映病毒存在、活動(dòng)性復(fù)制及具有傳染性的可靠指標(biāo)，使得臨床醫(yī)生對(duì)于乙肝患者體內(nèi)的HBV的復(fù)制以及傳染性有了更直接的了解，從而也更有利于臨床HBV感染的診斷、治療方案選擇及療效的判斷。本研究 HBV DNA 陽性率在模式 1 （HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、模式 2(HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+)、模式 3(HBsAg+、HB-cAb+)、 模式 4 （HBsAb+、HBeAb+/- 、HBcAb+） 中分別為96.5%、35.2%、45.7%、14.3%，與文獻(xiàn)[3-4]檢測 HBV DNA 的結(jié)果基本相符。同時(shí)本研究結(jié)果說明HBsAg的存在特別是HBeAg的出現(xiàn)，乙肝病毒的復(fù)制非常活躍，HBsAg和HBeAg可作為臨床HBV感染和強(qiáng)傳染性的重要指標(biāo)；但隨著HBeAg/HBeAb的陽性轉(zhuǎn)換，并不是所有的感染者HBV-DNA都隨著轉(zhuǎn)陰，相當(dāng)一部分HBeAb陽性的所謂小三陽患者HBV-DNA持續(xù)陽性。

綜上所述，HBV-M與HBV DNA二者之間互有聯(lián)系但又有所不同。筆者建議采用熒光PCR方法對(duì)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物陽性的兒童進(jìn)一步作HBV DNA檢測，以判定疾病的嚴(yán)重程度及傳染性高低，以指導(dǎo)醫(yī)務(wù)人員盡早采取積極合理的防治方案，防止患兒病情惡化或慢性化及個(gè)體間的傳播。

[1]姚集魯,高志良,彭曉謀,等.病毒性肝炎臨床診治的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究[J].中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1999,20(1):169.

[2]謝新寶,朱啟镕.乙型肝炎病毒母嬰傳播和阻斷的研究進(jìn)展[J].傳染病信息,2006,19(3):101-102.

[3]王曉東,李秀全,李鳳煥,等.慢性乙肝血清標(biāo)志物與HBV DNA水平的關(guān)系[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,27(12):1070-1072.

[4]許鐵軍,曹遠(yuǎn)陸,喬春格,等.乙型肝炎血清標(biāo)志物與HBV DNA含量的相關(guān)性分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2006,3(6):247-248.