復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠子宮、卵巢重量影響及作用機(jī)制的研究

趙文靜，趙向上，旺建偉，剛宏林，姜虹，王艷宏，張曉琳

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2.哈爾濱市第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150056;3.哈爾濱市食品藥品監(jiān)督管理局，黑龍江 哈爾濱 150028)

乳腺增生病(Hyperplasia of Mammary Gland，HMG)又稱乳腺結(jié)構(gòu)不良，是女性常見(jiàn)、多發(fā)疾病，病變是以乳腺固有組織增生為主的非炎癥性、非腫瘤性病變，主要包括乳腺囊性增生病、小葉增生、腺病、纖維性?。?］。近年來(lái)其癌變率有逐年升高的趨勢(shì)。子宮、卵巢是調(diào)節(jié)性激素的重要器官，它們重量的輕微變化會(huì)影響性激素對(duì)乳房刺激的敏感性及持續(xù)的時(shí)間，而FSH含量的變化是子宮、卵巢的功能正常與否的客觀指標(biāo)。鹿花盤(pán)是梅花鹿 (Cerrus nippon Temminck)每年春季長(zhǎng)新茸時(shí)自然脫落的部分，《神農(nóng)本草經(jīng)》認(rèn)為，該品有溫補(bǔ)肝腎、活血消腫之功效，能治療陰證瘡瘍，乳癰初起，瘀血腫痛等疾患［2］。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用鹿花盤(pán)與其他中藥配伍，制成復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊，觀察其對(duì)乳腺增生小鼠子宮、卵巢重量及重量指數(shù)和對(duì)FSH含量的影響，進(jìn)而判斷乳腺增生的療效及預(yù)后。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材及制劑

中藥鹿花盤(pán)取材于黑龍江省祿寶益生鹿業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司，柴胡、白芍、三棱、莪術(shù)、浙貝母、淫羊藿等中藥由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院提供。復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊濃縮后用蒸餾水配制成濃度分別為217g·L－1、434g·L－1、868g·L－1的低、中、高三種溶液備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小白鼠，體重18～22g，雌性，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):黑動(dòng)字第09－2－2號(hào)。

1.3 藥品及試劑

苯甲酸雌二醇注射液(Estradiol Benzoate Injection，上海通用藥業(yè)股份有限公司);促卵泡生成素(FSH)放免試劑盒(北京市福瑞生物工程公司);他莫昔芬(Tamoxifen，上海華聯(lián)制藥有限公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

電子天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司);低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備、分組與灌胃劑量

實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水16h，空白對(duì)照組10只常規(guī)飼養(yǎng)，不施加任何藥物，其他小鼠在同等條件下，腹腔注射苯甲酸雌二醇，每2日1次，每次0.5mg·kg－1，共注射15次，在注射苯甲酸雌二醇后第4d小白鼠均出現(xiàn)不同程度的乳腺隆起外觀。取模型制備成功小鼠，按體重隨機(jī)分模型組、他莫昔芬組、鹿低劑量組、鹿中劑量組、鹿高劑量組五組，每組各10只。于造模第5d開(kāi)始分別用藥灌胃治療，空白對(duì)照組不用任何藥物，模型組生理鹽水 15mL·kg－1，他莫昔芬組3.9mg·kg－1，復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊低、中、高劑量組分別是3.25、6.5、13g·kg－1，連續(xù)灌胃 30d［3］。

2.2 標(biāo)本取材

連續(xù)灌胃30d后，分離子宮、卵巢，剔除周?chē)闹窘M織等，迅速稱重，測(cè)定子宮、卵巢指數(shù)［4，5］。

將各組小鼠稱重后摘除眼球各取血3mL，室溫靜置2h后于3000r·min－1離心3min，吸取上部取血清，－20℃保存待測(cè)。依照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。采用放免分析法測(cè)定血清中FSH的含量［6］。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 12.0軟件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間差異顯著性用t檢驗(yàn)比較。

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠FSH含量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，他莫昔芬、鹿中、高劑量組均能升高模型組FSH含量，且有非常顯著性差異(P<0.01)，鹿低劑量組與模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且鹿花盤(pán)三劑量組彼此無(wú)顯著性差別。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠FSH含量的影響(±s)

表1 復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠FSH含量的影響(±s)

注:與模型組相比較，**P<0.01;與空白對(duì)照組比較，▲▲P<0.01。

3.48±0.29模型組 15mL 2.57±0.31▲▲他莫昔芬組 3.9mg 3.37±0.22**鹿低劑量組 3.25 2.90±0.48鹿中劑量組 6.5 3.22±0.35**鹿高劑量組 13 3.36±0.36空白對(duì)照組－**

3.2 復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠子宮、卵巢的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示，模型組與空白對(duì)照組比較，子宮重量增加，且有顯著性差異(P<0.05)，鹿高劑量組能明顯降低模型組子宮重量，兩組有顯著性差異(P<0.05)，并且鹿高劑量組與空白對(duì)照組子宮重量實(shí)際數(shù)據(jù)非常接近;同時(shí)，西藥他莫昔芬組與空白對(duì)照組比較，子宮重量低于空白對(duì)照組，且有顯著性差異(P<0.05)，從實(shí)際數(shù)據(jù)也反映出西藥組過(guò)度降低乳腺增生小鼠子宮重量(P<0.05)，導(dǎo)致低于正常子宮的重量范圍;在對(duì)乳腺增生小鼠卵巢方面的影響實(shí)驗(yàn)中，鹿低、中、高劑量組與模型組均無(wú)顯著性差別，在這點(diǎn)上，鹿低、中、高三劑量組均不如西藥他莫昔芬組作用更明顯。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠子宮卵巢的影響(±s，n=10)

表2 復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊對(duì)乳腺增生小鼠子宮卵巢的影響(±s，n=10)

注:與模型組相比較，*P<0.05，**P<0.01;與空白對(duì)照組比較，▲P<0.05。

空白對(duì)照組－ 118.51±43.78 0.372±0.119 20.63±7.00 0.067±0.026模型組 15mL 166.39±41.08▲ 0.562±0.127▲ 20.05±8.380 069±0.032他莫昔芬組 3.9mg 78.16±25.55▲** 0.268±0.072▲** 12.62±2.73* 0.044±0.011*鹿低劑量組 3.25 125.94±51.52 0.425±0.180 14.52±5.68 0.049±0.021鹿中劑量組 6.5 161.43±186.35 0.563±0.653 16.34±4.23 0.058±0.014鹿高劑量組 13 118.94±29.26* 0.389±0.090*14.30±6.24 0.047±0.021

4 討論

乳房為性激素作用的靶器官，其生長(zhǎng)發(fā)育到衰退均受到下丘腦－垂體－卵巢軸的調(diào)控，子宮內(nèi)膜也受該系統(tǒng)的控制，所以卵巢、子宮、乳房三者在發(fā)生乳腺增生病的時(shí)候關(guān)系最為密切、直接。而子宮、卵巢起著調(diào)節(jié)和平衡雌、孕激素的重要作用，它們?cè)谛螒B(tài)重量上的輕微變化常常會(huì)引起女性性激素水平明顯的起落，一旦發(fā)生乳腺增生病，往往伴有子宮、卵巢在形態(tài)學(xué)上的異常變化，由此也可以初步推斷到其調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的功能也會(huì)有相應(yīng)的失調(diào);婦女的月經(jīng)周期基本可分為卵泡期、黃體期，這兩個(gè)期性激素水平會(huì)有其周期性的變化，而FSH含量變化可以影響及反應(yīng)子宮、卵巢調(diào)節(jié)性激素的功能，進(jìn)而間接影響性激素對(duì)乳房刺激的強(qiáng)度和持續(xù)的時(shí)間。

本課題是通過(guò)復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊的不同劑量組和西藥對(duì)照組相比較，來(lái)觀察該膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)性乳腺增生小鼠子宮、卵巢重量的變化，結(jié)果是鹿高劑量組能明顯降低乳腺增生模型組子宮重量，差異性顯著，且實(shí)際數(shù)據(jù)接近空白對(duì)照組子宮重量，提示該劑量有很好的恢復(fù)乳腺增生小鼠子宮形態(tài)作用，同時(shí)也優(yōu)于西藥組對(duì)子宮重量過(guò)度降低的作用，而鹿低、中劑量組在這方面與模型組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在對(duì)卵巢重量影響方面，鹿三個(gè)劑量組弱于西藥對(duì)照組;在對(duì)于FSH含量影響方面，鹿中、高劑量組療效較顯著。

由此可以推斷，復(fù)方鹿花盤(pán)膠囊一定劑量可以直接作用于子宮，恢復(fù)實(shí)驗(yàn)性乳腺增生小鼠子宮重量，并通過(guò)調(diào)節(jié)FSH含量間接的促進(jìn)子宮、卵巢功能，加強(qiáng)對(duì)下丘腦－垂體－卵巢軸的調(diào)控，從而平衡性激素的含量而使乳腺組織受到性激素良性、周期性的合理刺激，最終達(dá)到治療乳腺增生的目的。

［1］蔡國(guó)良，王友和.對(duì)乳腺增生的再認(rèn)識(shí)［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，25(1):24－25.

［2］王振玉.鹿花盤(pán)注射液研究［J］.生化藥物雜志，1987(2):10－12.

［3］李建國(guó)，朱建宙，張玉芝，等.“藥味乳康罩”抑制小白鼠乳腺小葉增生病理組織學(xué)觀察研究［J］.河南中醫(yī)，1993，13(3):111－112.

［4］張少卓，柳占彪.乳樂(lè)寧對(duì)小鼠雌激素活性的影響［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2004，23(4):41－42.

［5］鄒世潔，陳小野，蔣小麗，等.雌激素對(duì)大鼠性腺乳腺影響觀察［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24(1):52－54.

［6］戴麗軍，廖軍，黃月玲，等.Fmr1基因敲除小鼠血清雌性激素含量的比較研究［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2006，16(8):459－462.