陳早慶 張濤 邢發(fā)樞
解脲支原體是一種無細(xì)胞壁、結(jié)構(gòu)簡單的原核微生物。大小0.3~0.5μm,菌落小,直徑15~30μm。國內(nèi)外對(duì)支原體感染是否會(huì)影響精液質(zhì)量,以及精液檢查支原體陽性者應(yīng)否抗感染治療存在截然不同的觀點(diǎn)。臨床中見有支原體感染,但精液質(zhì)量正常,且生育沒有受到影響的病人。亦可見有病例在支原體殺滅后,精液質(zhì)量明顯改善。我們研究支原體感染濃度與精液活動(dòng)力是否存在相關(guān)性,以指導(dǎo)臨床治療。
2008年5月~2010年1月男科門診育前檢查,177例精液培養(yǎng)法解脲支原體陽性的自愿者,年齡22~33歲,平均26歲。外生殖器體檢無異常,抗精子抗體陰性。精液淋球菌培養(yǎng)陰性。
手淫取精液,注意無操作。取精后立即接種。
1.3.1 精液分析 將精液置于37℃孵育10m in,液化后檢測精液量、精子密度、存活率、活動(dòng)力形態(tài)等。
1.3.2 PCR法 由中山大學(xué)達(dá)安基因股分有限公司提供的解脲支原體PCR熒光定量檢測試劑盒。
1.3.3 DNA提取 標(biāo)本處理:取0.1m l精液加入1m l滅菌生理鹽水,充分震蕩搖勻,吸取全部液體轉(zhuǎn)至1.5m l離心管中,12000rpm離心5m in。去上清,沉淀加滅菌生理鹽水1m l混勻,12000rpm離心5m in。去上清,沉淀中加入50μl DNA提取液充分混勻,100℃恒溫處理(10±1)m in。12000rpm離心5m in,備用。將陰性質(zhì)控品、臨界陽性質(zhì)控品、強(qiáng)陽性質(zhì)控品、陽性定量參考品分別離心備用。
1.3.4 PCR擴(kuò)增 于PE Gene Am p5700操作。取PCR反應(yīng)管若干,分別加入處理后的樣品上清液2μl,8000rpm離心數(shù)秒,放入儀器樣品 。反應(yīng)溫度及時(shí)間分別為93℃預(yù)變性2m in,93℃變性45s,55℃復(fù)性60s,10個(gè)循環(huán);93℃變性30s,55℃復(fù)性45s,30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后,儀器自動(dòng)分析標(biāo)本支原體數(shù)值。
精液PCR法檢測支原體濃度與精液活動(dòng)力分析見表1。精液活動(dòng)力具有向前運(yùn)動(dòng)的精子(a+b級(jí))>50%或a級(jí)>25%為正常;小于此值為異常。
兩組支原體感染后精子活動(dòng)力使用x2檢驗(yàn),P<0.05,有顯著性差異。檢測結(jié)果顯示,支原體感染濃度>105拷貝組,精子活動(dòng)力正常的僅占8.3%,支原體感染濃度<105拷貝組,精子活動(dòng)力正常的占54.3%。隨著感染的支原體濃度增高,精子的活動(dòng)力明顯降低。<103拷貝的病例,精子活動(dòng)力未見異常。
表1 兩組精液活動(dòng)力比較(例)
解脲支原體是泌尿生殖系感染常見的病原體。其可感染副性腺,引起精漿異常;亦可感染睪丸,引起精子形態(tài)、發(fā)育異常。其對(duì)精子的活動(dòng)力的影響,可通過多方面機(jī)制起作用。
支原體性前列腺炎/精囊炎對(duì)精子活動(dòng)力的影響。作為副性腺,前列腺、精囊分泌的前列腺液、精囊液對(duì)精子起營養(yǎng)、活化作用。前列腺炎/精囊感染支原體后,前列腺、精囊分泌減少,尤其使精液液化的蛋白水解酶的減少[1],精子的活動(dòng)力降低。臨床上可表現(xiàn)有尿頻、尿急、會(huì)陰脹痛、精液量少等。支原體帶菌者,由于感染的病原體少,前列腺及精囊的炎癥反應(yīng)輕,前列腺液和精囊液沒有改變,精子的活動(dòng)力沒有受到影響。
有研究認(rèn)為,支原體感染后可吸附在精子頭尾部,造成精子膜的結(jié)構(gòu)損傷。精子變得臃腫、形態(tài)異常,尾部發(fā)生折角卷曲。有些精子發(fā)生凝集現(xiàn)象。支原體感染后精子畸形率上升,尖頭、大頭、雙頭、無尾等異常形態(tài)增多,經(jīng)洗滌分離后精子與支原體共孵育過夜后,精子運(yùn)動(dòng)速度、運(yùn)動(dòng)軌跡等參數(shù)和精子形態(tài)較對(duì)照組改變明顯,精子膜完整性及功能異常[2]。
我們的研究發(fā)現(xiàn),并非所有的支原體感染會(huì)影響精子活動(dòng)力。當(dāng)?shù)蜐舛鹊闹гw感染時(shí)(<105拷貝),泌尿生殖系癥狀和體征不明顯,精液質(zhì)量亦沒有明顯的降低,或降低比例小。<103拷貝,精液活動(dòng)力基本無影響,我們稱之為支原體帶菌者。當(dāng)濃度達(dá)到>105拷貝時(shí),病人有尿頻、尿急、會(huì)陰脹等不適,精子的活動(dòng)力明顯降低。我們稱之為有意義的支原體感染者。這類感染有較強(qiáng)的致病力。
并非所有的支原體病原學(xué)檢查陽性,就需要抗生素治療。對(duì)于精液中支原體>105拷貝,提示為高濃度支原體感染,給予積極、有效的抗感染治療是必須的;而對(duì)于精液支原體濃度<103拷貝,提示為支原體帶菌者,可無需治療;濃度介于兩者之間的病例,若無泌尿生殖系感染癥狀,精液檢查提示質(zhì)量沒有受到影響,亦可無需治療。在我們研究的病例中,有意義的支原體感染病人,經(jīng)有效的抗感染治療后,復(fù)查精子的活動(dòng)力得到明顯改善,a+b級(jí)精子數(shù)占比大部恢復(fù)正常。而對(duì)于極個(gè)別精液活動(dòng)力低下的支原體帶菌者,即使給予足夠療程的抗生素治療,復(fù)查精液活動(dòng)力亦無進(jìn)一步改善。
臨床工作中,對(duì)懷疑有支原體感染者,應(yīng)常規(guī)行支原體PCR濃度測定。嚴(yán)格把握支原體感染的治療標(biāo)準(zhǔn),避免濫用抗生素,防止過度治療,減少耐藥菌株的形成。
[1]錢憲明,王益鑫,江峰,等.男性生殖道非特異性感染性不育的精液變化[J].中國男性學(xué)雜志,1991,5(3):153.
[2]武蓉珍,金帆,潘永苗.解脲支原體與男性不育之間的關(guān)系及其機(jī)制[J].國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志,2008,27(4):230-232.