乳腺癌骨轉(zhuǎn)移與耐藥基因蛋白表達(dá)的關(guān)系及臨床病理意義

張志強(qiáng) 陳剛 李揚(yáng)揚(yáng) 韓玉貞

乳腺癌是女性最常見惡性腫瘤之一，并且其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重危害廣大婦女的身體健康。應(yīng)用99mTc-MDP對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行全身骨掃描可以早期發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移病灶，并且有很高的靈敏度，對(duì)指導(dǎo)患者的治療以及判斷預(yù)后有很重要的意義。耐藥基因蛋白檢測(cè)對(duì)指導(dǎo)臨床化療有重要意義。關(guān)于骨掃描與耐藥基因蛋白的關(guān)系國(guó)內(nèi)未見報(bào)道。本文通過對(duì)乳腺癌骨掃描和耐藥基因蛋白的檢測(cè)，以期探明乳腺癌骨轉(zhuǎn)移與耐藥基因蛋白之間關(guān)系及臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集濱州醫(yī)學(xué)院附院2006年1月～2008年12月乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌61例，并同期進(jìn)行99m锝-亞甲基二磷酸鹽(99mTc-MDP)全身骨掃描檢查，患者均為女性，行乳腺癌改良根治術(shù)，術(shù)前均未進(jìn)行過放療、化療及免疫治療。所有標(biāo)本均用10%的中性甲醛溶液固定，石蠟制片，4μm連續(xù)切片，行HE及免疫組化染色。

1.2 方法

99mTc-MDP全身骨掃描檢查所用儀器為德國(guó)西門子公司生產(chǎn)的單光子發(fā)射型計(jì)算機(jī)斷層顯像儀(Siemens,e.Com SPECT)，靜脈注射99mTc-MDP20～25mci，注射后囑患者飲水500～1000ml，2～3h后進(jìn)行顯像。檢查前排盡尿液，減少膀胱干擾；檢查過程中防止病人體位移動(dòng)?；颊呷⊙雠P位，進(jìn)行前位和后位兩個(gè)體位的顯像。

免疫組化采用Envision二步法，TopoⅡ、LRP和GST-π抗體均購(gòu)自福州邁新公司。切片常規(guī)脫蠟至水，用微波修復(fù)抗原，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 骨轉(zhuǎn)移判斷標(biāo)準(zhǔn) 骨顯像結(jié)果由兩位有經(jīng)驗(yàn)的ECT診斷醫(yī)師閱片。正常骨骼顯像清晰，頭顱、脊柱、骨盆呈均勻放射性分布，雙側(cè)肢體、肋骨呈對(duì)稱、均勻放射性分布；與正常放射區(qū)相比，特別是與對(duì)側(cè)或四周骨比較，當(dāng)出現(xiàn)彌漫性、隨機(jī)性或者局限性的單發(fā)或多發(fā)的異常放射性濃聚或稀疏區(qū)時(shí)，結(jié)合臨床，排除外傷和其它骨骼病變，判斷為骨轉(zhuǎn)移。

1.3.2 免疫組化染色 TopoⅡ以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)；LRP和GST-π以細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)癌細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)等級(jí)，將結(jié)果分為：陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)＜10%為陰性，10%～25%(+)，＞25%～50%(++)，＞50%(+++)；(+)～(+++)均為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用Visual FoxPro 6.0數(shù)據(jù)庫(kù)管理軟件調(diào)用患者原始數(shù)據(jù)，查詢出相應(yīng)的頻數(shù)資料；用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件導(dǎo)入數(shù)據(jù)進(jìn)行Pearsonx2檢驗(yàn)及關(guān)聯(lián)分析。

2 結(jié)果

2.1 全身骨掃描轉(zhuǎn)移率與臨床病理特征的關(guān)系

61例乳腺癌患者的全身骨掃描檢查骨轉(zhuǎn)移率為52.46%(32/61)；骨轉(zhuǎn)移與腫瘤的大小、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)(均P＜0.01)，而與年齡大小無(wú)顯著關(guān)系(P＞0.05)。全身骨掃描轉(zhuǎn)移率與臨床病理特征的關(guān)系見表1。

2.2 耐藥基因蛋白與臨床病理特征的關(guān)系

TopoⅡ的陽(yáng)性率與腫瘤的大小呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P＜0.01)，而與年齡大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)顯著相關(guān)(均P＞0.05)。LRP和GST-π與年齡、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)顯著相關(guān)(P＞0.05)。耐藥基因蛋白與臨床病理特征的關(guān)系見表2。

2.3 全身骨掃描與TopoⅡ、LRP、GST-π之間的關(guān)系

61例乳腺癌組織中的TopoⅡ、LRP和 GST-π的表達(dá)率分別為78.69%(48/61)、77.05%(47/61)和75.41%(46/61)。乳腺癌中骨轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率與TopoⅡ的陽(yáng)性表達(dá)率呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.423，P＜0.01)，而與LRP，GST-π無(wú)顯著相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)，全身骨轉(zhuǎn)移與TopoⅡ、LRP和GST-π的關(guān)系見表3。

表1 全身骨掃描轉(zhuǎn)移率與臨床病理特征的關(guān)系

表2 耐藥基因蛋白與臨床病理特征的關(guān)系

表3 全身骨轉(zhuǎn)移與TopoⅡ、LRP和GST-π的關(guān)系

3 討論

有研究表明，應(yīng)用99mTc-MDP進(jìn)行全身骨掃描可以早期發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移病灶，并且有很高的靈敏度[1-2]，同時(shí)對(duì)指導(dǎo)患者的治療以及判斷預(yù)后有很重要的意義[3-4]。本研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌中全身骨掃描陽(yáng)性率與腫塊大小呈正相關(guān)，說明乳腺癌腫塊大者腫瘤細(xì)胞的侵襲性較強(qiáng)，與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附、穿過血管內(nèi)皮和基底膜的能力增強(qiáng)，進(jìn)而較易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5-6]；同時(shí)觀察到全身骨掃描檢查的骨轉(zhuǎn)移與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，說明乳腺癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，腫瘤細(xì)胞通過血道轉(zhuǎn)移進(jìn)而發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的能力亦增強(qiáng)，與有關(guān)研究結(jié)果相符[2,7-8]，提示隨著腫瘤不斷浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，其發(fā)生淋巴道和血道轉(zhuǎn)移的幾率不斷增加。

乳腺癌是一種對(duì)化療比較敏感的實(shí)體瘤。目前化療仍是乳腺癌術(shù)后主要的治療手段之一，在乳腺癌的綜合治療中占有很重要的地位。但是腫瘤的多藥耐藥是導(dǎo)致化療失敗的主要原因，臨床上如何合理選擇化療藥物并減少或避免多藥耐藥一直是研究的熱點(diǎn)。腫瘤多藥耐藥的機(jī)制尚不完全明了，其與TopoⅡ、LRP和GST－π的表達(dá)關(guān)系密切。本研究觀察到腫塊直徑≥3cm的乳腺癌中TopoⅡ的陽(yáng)性表達(dá)率高于腫塊直徑＜3cm的乳腺癌(P＜0.01)；TopoⅡ的陽(yáng)性表達(dá)與腫塊的大小呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[9-11]，提示TopoⅡ的表達(dá)可以作為評(píng)價(jià)乳腺癌患者預(yù)后的指標(biāo)[12-14]；有學(xué)者研究TopoⅡ之所以可以作為評(píng)價(jià)預(yù)后的指標(biāo)，與TopoⅡ的表達(dá)能夠反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性有關(guān)[14-15]。有關(guān)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移與耐藥基因蛋白表達(dá)的關(guān)系，國(guó)內(nèi)未見報(bào)道。本研究結(jié)果表明：全身骨掃描骨轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率與TopoⅡ的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.423,P＜0.01)，而與LRP和GST－π的表達(dá)無(wú)相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)，提示乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的患者有較高的TopoⅡ基因蛋白的表達(dá)，在臨床化療時(shí)可以選擇針對(duì)TopoⅡ作為靶目標(biāo)的相關(guān)治療藥物，通過干擾TopoⅡ的功能發(fā)揮其殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，具體的作用機(jī)制及其臨床療效尚有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中，腫塊的大小、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TopoⅡ陽(yáng)性表達(dá)可以作為評(píng)價(jià)患者預(yù)后的指標(biāo)。乳腺癌患者進(jìn)行全身骨掃描檢查，對(duì)骨轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者檢測(cè)TopoⅡ的表達(dá)，可針對(duì)性選擇化療藥物，提高療效。

[1]Savelli G,Maffioli L,Maccauro M,et al.Bone scintigraphy and the added value of SPECT (single photon emission tomography) in detecting skeletal lesions[J].Q J Nucl Med,2001,45(1):27-37.

[2]Campbell DJ,Banks AJ,Oates GD.The value of preliminary bone scanning in staging and assessing the prognosis of breast cancer[J].Br J Surg,1976,63(10):811-816.

[3]García JR,Simó M,Soler M,et al.Relative roles of bone scintigraphy and positron emission tomography in assessing the treatment response of bone metastases[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging,2005,32(10):1243-1244.

[4]Chavdarova L,Piperkova E,Tsonevska A,et al.Bone scintigraphy in the monitoring of treatment effect of bisphosphonates in bone metastatic breast cancer[J].J BUON,2006,11(4):499-504.

[5]Diel IJ.Prognostic factors for skeletal relapse in breast cancer[J].Cancer Treat Rev,2001,27(3):153-157.

[6]Rossing N,Munck O,Nielsen SP.What do early bone scans tell about breast cancer patients[J].Eur J Cancer Clin Oncol,1982,18(7):629-636.

[7]Wakasugi S,Tsukuma H,Inaji H,et al.Predictive value of bone marrow accumulation of Tc-99m tetrofosmin for subsequent development of distant metastases in breast cancer[J].Ann Nucl Med,2007,21(8):429-437.

[8]Gerber B,Seitz E,Müller H.Perioperative screening for metastatic disease is not indicated in patients with primary breast cancer and no clinical signs of tumor spread[J].Breast Cancer Res Treat,2003,82(1):29-37.

[9]Depowski PL,Rosenthal SI,Brien TP,et al.Topoisomerase IIalpha expression in breast cancer:correlation with outcome variables[J].Mod Pathol,2000,13(5):542-547.

[10]Oda Y,Ohishi Y,Saito T,et al.Nuclear expression of Y-box-binding protein-1 correlates with P-glycoprotein and topoisomerase II alpha expression,and with poor prognosis in synovial sarcoma[J].J Pathol,2003,199(2):251-258.

[11]Hellemans P,van Dam PA,Geyskens M,et al.Immunohistochemical study of topoisomerase II-alpha expression in primary ductal carcinoma of the breast[J].J Clin Pathol,1995,48(2):147-150.

[12]O'Connor JK,Hazard LJ,Avent JM,et al.Topoisomerase II alpha expression correlates with diminished disease-free survival in invasive breast cancer[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys,2006,65(5):1411-1415.

[13]Fritz P,Cabrera CM,Dippon J,et al.c-erbB2 and topoisomerase IIalpha protein expression independently predict poor survival in primary human breast cancer:a retrospective study[J].Breast Cancer Res,2005,7(3):R374-384.

[14]Rudolph P,MacGrogan G,Bonichon F,et al.Prognostic significance of Ki-67 and topoisomerase IIalpha expression in infiltrating ductal carcinoma of the breast.A multivariate analysis of 863 cases[J].Breast Cancer Res Treat,1999,55(1):61-71.

[15]Rudolph P,Olsson H,Bonatz G,et al.Correlation between p53,cerbB-2,and topoisomerase II alpha expression,DNA ploidy, hormonal receptor status and proliferation in 356 node-negative breast carcinomas: prognostic implications[J].J Pathol,1999,187(2):207-216.