女貞子多糖的超聲波提取工藝研究

郭留城

（漯河醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，河南漯河 462002）

女貞子是我國(guó)傳統(tǒng)的扶正固本藥物，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載。女貞子多糖是女貞子具有多重功效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，現(xiàn)代藥理研究表明多糖具有抗氧化、抗衰老、增強(qiáng)免疫等功效。利用溶劑法進(jìn)行女貞子多糖的提取分離已有文獻(xiàn)報(bào)道[1]，但存在提取時(shí)間長(zhǎng)，效率低、溶劑用量大等缺點(diǎn)，而超聲波提取具有設(shè)備簡(jiǎn)單、提取方便、效率高、節(jié)能環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于中草藥有效成分的提取[2]。本文利用超聲波對(duì)女貞子進(jìn)行有效成分提取，用分光光度法測(cè)定多糖的含量，并對(duì)提取條件進(jìn)行了正交試驗(yàn)的研究。

1 儀器與試藥

KQ5OODE型醫(yī)用超聲波 (昆山市超聲儀器有限公司)；752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；RE3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-6020型真空干燥箱 （上?；|試驗(yàn)儀器有限公司）；LDZ4-0.8型醫(yī)用離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；女貞子(藥用，購(gòu)于漯河市廣惠和醫(yī)藥有限公司)，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 多糖含量測(cè)定

采用硫酸-蒽酮法[3]測(cè)定所提取的女貞子多糖中多糖含量，經(jīng)驗(yàn)證葡聚糖的線(xiàn)性范圍為0.5～90.0 mg/L。然后根據(jù)所用女貞子的質(zhì)量（2 g）計(jì)算出女貞子中多糖得率。

2.2 回收率試驗(yàn)

精密量取上述已知含量的女貞子提取液，準(zhǔn)確加入葡聚糖對(duì)照品1.00 mg，后按樣品含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，得到葡聚糖的回收率為97.9%。

2.3 提取工藝流程及方法

女貞子 (40目)→稱(chēng)量→加雙蒸水調(diào)配→超聲提取多糖→離心除去雜質(zhì)→濃縮→乙醇沉淀→干燥→粗多糖。

2.4 超聲波樣品提取液的制備

2.4.1 工藝設(shè)計(jì) 利用四因素三水平正交設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，選取超聲功率(A)、溶媒用量 (B)、提取時(shí)間(C)和提取次數(shù)(D)四因素，以多糖含量為測(cè)定指標(biāo)。設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素和水平見(jiàn)表1。

表1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.4.2 制備工藝 取女貞子2.0 g，精密稱(chēng)定9份，分別按正交實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用雙蒸水浸泡30 min后，超聲提取，合并提取液，離心除雜，濃縮，醇沉，濾過(guò)，真空干燥，得到1～9號(hào)超聲樣品。

2.5 樣品含量測(cè)定

將超聲波提取液按“2.1”項(xiàng)下含量測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

取女貞子2.0 g，精密稱(chēng)定6份，分別用溶劑提取法和優(yōu)化后的超聲提取法，提取女貞子中的多糖。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

由表2可知，超聲波的功率和溶媒的用量是影響超聲提取的主要因素，而超聲提取時(shí)間和超聲提取次數(shù)的影響較小。方案最佳：A2B2C2D1，即在功率80%條件下，用5倍的溶媒，超聲25 min，提取1次為最佳工藝條件。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 不同提取方法提取結(jié)果

由表3可知，采用優(yōu)化后的超聲提取法提取女貞子中的多糖與傳統(tǒng)的溶劑提取法比較，提取效率提高了約1.4倍，耗時(shí)短，且實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單易行，操作穩(wěn)定性好。

女貞子主要含有多糖、萜類(lèi)、黃酮等化合物。女貞子多糖的成分為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖及巖藻糖等[4]。由于雙蒸水能廣泛地溶解多糖，故本試驗(yàn)以雙蒸水為溶媒，采用超聲提取和溶劑提取兩種方法，通過(guò)對(duì)多糖提取含量的比較得出，超聲提取多糖含量明顯高于溶劑提取法，這可能是聲波破壞了女貞子細(xì)胞結(jié)構(gòu)的緣故，而且超聲提取法操作簡(jiǎn)易，無(wú)污染，成本低，是一種理想的多糖提取方法。

目前報(bào)道的測(cè)定中草藥中多糖含量的方法中，苯酚-濃硫酸法和蒽酮-濃硫酸兩種方法應(yīng)用最廣[5]，用其測(cè)定女貞子多糖含量的方法亦有報(bào)道[1]。苯酚-濃硫酸比色法的顯色不穩(wěn)定，測(cè)定誤差較大；而蒽酮-濃硫酸比色法的顯色穩(wěn)定，線(xiàn)性關(guān)系比較好。因此，蒽酮-濃硫酸比色法為檢測(cè)女貞子多糖的一種理想方法[6]。

[1]邱榮麗,李璘.女貞子多糖的提取工藝[J].中成藥,2008,30(4):612-614.

[2]董嘉德.超聲波在中藥提取中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥業(yè),2002,11(11):55.

[3]李淑梅,揚(yáng)帆,湯波,等.太行山黃芪多糖的提取工藝[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2008,25(3):335-337.

[4]張振明,葛斌,許愛(ài)霞,等.女貞子多糖的抗衰老作用[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2006,20(2):108.

[5]黃瑞松.中草藥多糖含量測(cè)定方法概述[J].中國(guó)藥師,2005,8(1):68.

[6]楊莉,王志華,陶健生.黃芪中黃芪多糖含量測(cè)定方法的比較[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2005,36(9):562-563.