HPLC法測定不同生長期女貞子中紅景天苷的含量Δ

戚志華，王慶偉，王四旺，張俊，劉新友，劉琳娜，張琰#（.第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院藥劑科，西安市 7008；.第四軍醫(yī)大學藥物研究所，西安市 700；.第四軍醫(yī)大學化學教研室，西安市 700）

藥理學研究表明，紅景天苷具有抗衰老、抗寒冷、抗微波輻射等作用[1～3]。紅景天苷是“高原人參”紅景天的主要活性成分之一，但紅景天植物大多生長在高寒山區(qū)，天然資源逐漸匱乏，有的已經滅絕，這成為紅景天苷進一步開發(fā)利用的瓶頸。女貞子是木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit.的干燥成熟果實，在我國藥材資源豐富、價格低廉，其中的紅景天苷含量可觀[4]，可望成為紅景天苷的另一個有效的天然來源。本試驗測定西安市區(qū)不同生長期女貞子中紅景天苷的含量，為更有效地開發(fā)利用女貞子中的紅景天苷提供依據。

1 材料

1.1 儀器

LC-10型高效液相色譜（HPLC）儀、SPD-10型紫外檢測器、CLASS-VP型工作站（日本島津公司）；CP225D型分析天平（德國賽多利斯公司）；250LH型超聲波清洗器（上?？茖С晝x器有限公司）。

1.2 試藥

紅景天苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110818-200404）；女貞子藥材為每月同一天采自西安市區(qū)第四軍醫(yī)大學校園內，經陜西省藥品檢驗所鑒定該藥材系木犀科植物女貞L.lucidumAit.的果實；乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；超純水（美國Millipore純水系統）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3 C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-水（13∶87）；流速 1 mL·min-1；檢測波長：222 nm；柱溫：室溫；進樣量：20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取紅景天苷對照品5.95 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.238 mg紅景天苷的溶液，搖勻，即得對照品貯備液，低溫避光貯藏，備用。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取過80目篩的女貞子干燥粉末0.25 g，加水50 mL，稱重，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱重，用水補足失重，搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 線性關系考察

精密吸取“2.2”項下對照品貯備液 0.5、1、2.5、5、8.5 mL，分別置于10 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻，與對照品貯備液構成6個不同濃度的對照品溶液。分別精密吸取20μL，按上述色譜條件進樣分析。以進樣濃度（C）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為A＝32946.50C+23308.35（r＝0.9999，n＝6）。結果表明，紅景天苷檢測濃度在11.9～238μg·mL-1范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液20μL，按上述色譜條件重復進樣5次。結果，紅景天苷峰面積的RSD＝2.33%，表明儀器精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、8 h 精密吸取20 μL進樣。結果，紅景天苷峰面積的RSD＝1.25%，表明供試品溶液在8 h內穩(wěn)定性較好。

2.7 重復性試驗

精密稱取同一批樣品5份，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結果，紅景天苷含量的RSD＝1.87%，表明方法重復性較好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量紅景天苷對照品，照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測定

取不同生長期的女貞子樣品各0.25 g，分別按“2.3”項下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積并用外標法計算樣品中紅景天苷的含量。色譜見圖1；樣品含量測定結果見表2。

3 討論

紅景天苷的水溶性高于它的脂溶性，故樣品以水超聲處理。試驗最終選擇乙腈-水（13∶87）為流動相，所得圖譜基線平穩(wěn)，紅景天苷達到了較好的分離。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品1.紅景天苷Fig1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.salidroside

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

女貞子在我國屬資源豐富的林副產品，華東、華南、西南、華中等地區(qū)均有分布，既有野生也有人工栽培，在山區(qū)、平原甚至庭園都有栽種。女貞子每年成熟一次，資源豐富，可保證長期大規(guī)模開發(fā)利用。

女貞子中的化學成分在整個果實生長過程中變化復雜。文獻[5，6]對女貞子中紅景天苷的提純工藝及含量測定作了報道，但未見對紅景天苷在女貞子生長期中含量動態(tài)變化的研究報道。

由表2可見，8月份女貞子幼果中紅景天苷的含量高達1.02%，而文獻[7]報道人工栽培的大花紅景天中紅景天苷的含量最高為1.109%?？梢?，來源廣泛、價格低廉的女貞子可作為紅景天苷的有效天然來源。但是，女貞子中紅景天苷的含量隨生長期逐漸降低，12月份采集的女貞子中紅景天苷的含量僅為0.3%。因此，提取女貞子中的紅景天苷，女貞子幼果為比較經濟的原料。

[1]黃 婉，楊耀芳.女貞子及其有效成分的藥理及臨床研究進展[J].現代中西醫(yī)結合雜志，2003，7（12）：772.

[2]李 陽，孫文基.女貞子的藥理作用研究[J].陜西中醫(yī)學院學報，2004，29（5）：58.

[3]張 奕，劉永剛.紅景天苷抗肝纖維化的實驗研究[J].中國藥房，2006，17（11）：813.

[4]趙繼霄，楊 瑾，董根玲，等.女貞子研究進展[J].中華醫(yī)學寫作雜志，2004，11（18）：1599.

[5]王 丹，石力夫，胡晉紅.柱層析預處理RP-HPLC法測定女貞子中紅景天苷的含量[J].藥學服務與研究，2006，6（2）：118.

[6]張立海，宋友華，孫春華，等.反相高效液相色譜法測定女貞子中紅景天苷的含量[J].中國藥學雜志，2001，36（11）：760.

[7]馬 瀟，宋玉成，謝 楠，等.HPLC法測定大花紅景天中紅景天苷及沒食子酸的含量[J].藥物分析雜志，2005，25（1）：58.