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    細(xì)葉桉葉超臨界CO2萃取揮發(fā)油的GC-MS分析Δ

    2010-05-22 03:07:40周燕園朱小勇鐘振國(guó)賀海東廣西中醫(yī)學(xué)院南寧市530001
    中國(guó)藥房 2010年7期
    關(guān)鍵詞:細(xì)葉揮發(fā)油超臨界

    周燕園,朱小勇,鐘振國(guó),賀海東(廣西中醫(yī)學(xué)院,南寧市 530001)

    細(xì)葉桉又名小葉桉、柳葉桉[1]、褐桉樹(shù)[2]、羊草果樹(shù)[3]。細(xì)葉桉葉為桃金娘科桉屬植物細(xì)葉桉Eucalyptus tereticornis Smith.的葉。原產(chǎn)澳大利亞,我國(guó)福建、廣東、廣西有栽培[4,5]。細(xì)葉桉葉味辛,微苦,性平,具有宣肺發(fā)表、理氣活血、解毒殺蟲(chóng)之功效,用于治療感冒發(fā)熱、咳喘痰嗽、脘腹脹痛、瀉痢、鉤端螺旋體病、跌打損傷、瘡瘍、丹毒、乳癰、疥瘡、癬癢等病[3]?,F(xiàn)代研究表明細(xì)葉桉葉揮發(fā)油具有較強(qiáng)的抑菌活性[6]。超臨界流體萃?。⊿upercritical fluid extraction,SFE)技術(shù)是近年來(lái)迅速發(fā)展被人們所認(rèn)知的一種新型“綠色分離”技術(shù)。超臨界流體兼有液體和氣體雙重特性,密度與液體相近,滲透性好,擴(kuò)散系數(shù)為液體的10~100倍,故能對(duì)多種物質(zhì)進(jìn)行溶解和浸取,減壓后溶解能力又大大降低,整個(gè)過(guò)程兼具提取和蒸餾雙重作用。因此,SFE技術(shù)應(yīng)用于天然產(chǎn)物方面的研究日趨活躍[7,8]。目前,國(guó)內(nèi)、外對(duì)SFE-CO2法提取細(xì)葉桉葉揮發(fā)油成分的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)利用SFE-CO2技術(shù)提取廣西細(xì)葉桉葉中揮發(fā)油成分,應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)分析提取物成分,為細(xì)葉桉葉的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料

    1.1 儀器

    5973N-6890型GC-MS聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent公司);HL-(5+1)/50MPa-ⅡAQ型SFE-CO2儀(杭州華黎公司);LG16-W型高速微量離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)。

    1.2 試藥

    乙醚(分析純,北京化工廠);無(wú)水硫酸鈉(分析純,上海化學(xué)試劑公司);CO2(純度≥99.5%,廣西南寧藍(lán)天醫(yī)用氣體有限責(zé)任公司)。細(xì)葉桉葉采自廣西南寧市高峰林場(chǎng),經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院劉壽養(yǎng)副教授鑒定為桃金娘科植物細(xì)葉桉E.tereticornis Smith.的葉,樣品經(jīng)自然陰干后備用,標(biāo)本存于廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 細(xì)葉桉葉萃取方法及條件

    取細(xì)葉桉葉適量,粉碎,過(guò)10目篩,取120 g,采用SFECO2技術(shù)萃取揮發(fā)油等成分。本試驗(yàn)以揮發(fā)油得率為指標(biāo),考察不同萃取釜、分離釜1、分離釜2的壓力和溫度,萃取時(shí)間,CO2流量對(duì)揮發(fā)油得率的影響,比較最佳萃取條件。最終篩選并確定SFE-CO2法萃取細(xì)葉桉葉揮發(fā)油的最優(yōu)化工藝條件:萃取釜壓力28 MPa(溫度51℃),分離釜1壓力5.5 MPa(溫度40 ℃),分離釜2壓力7 MPa(溫度30 ℃),CO2流量9.0 kg·h-1,萃取時(shí)間100 min。從分離釜收集得棕黃色萃取物共0.69 g,得率0.58%。取適量萃取物,加重蒸乙醚溶解并稀釋10倍,用無(wú)水硫酸鈉除去水分,離心后取上清液1 μL注入GC-MS聯(lián)用儀進(jìn)行分析。

    2.2 細(xì)葉桉葉萃取物GC-MS分析

    2.2.1 GC條件 色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm);程序升溫:初始溫度70℃保持3 min,以3 ℃·min-1升至85℃,保持5 min,再以3℃·min-1升至135℃,保持5 min,以5℃·min-1升至160℃,保持1 min,最后升溫至260℃,溶劑延遲3.0 min;進(jìn)樣口溫度:250℃;載氣:高純氦;載氣流量:1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量:1 μL;無(wú)分流比。

    2.2.2 MS條件 接口溫度:280℃;電離方式:EI;電子能量:70 eV;離子源溫度:230℃;四極桿溫度:150℃;倍增器電壓:1247 V;掃描范圍:45~550 amu;掃描間歇:2.94 次·s-1。

    2.2.3 細(xì)葉桉葉萃取物分析 經(jīng)GC-MS分析后得到總離子流圖,見(jiàn)圖1。

    圖1 細(xì)葉桉葉揮發(fā)油總離子流圖Fig 1 Total ions current chromatogram of E.tereticornis

    對(duì)總離子流圖中的各峰經(jīng)MS掃描后得MS圖,經(jīng)NIST02/WILEY275標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)進(jìn)行檢索,人工譜圖解析,并查對(duì)有關(guān)資料,從基峰相對(duì)豐度等幾個(gè)方面進(jìn)行比較,從而確定出細(xì)葉桉葉揮發(fā)油中的化學(xué)成分;再按照峰面積歸一化法計(jì)算各成分的相對(duì)含量。結(jié)果,共鑒定出28個(gè)化合物,占色譜峰總面積的88.13%,其中以桉油精(33.99%)、冰片(8.88%)、α-蒎烯(5.39%)、石竹烯(4.51%)、(+)-4-蒈烯(4.19%)為主。SFE-CO2法萃取細(xì)葉桉葉揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果見(jiàn)表1。

    3 討論

    在本文試驗(yàn)條件下,采用SFE-CO2技術(shù)所得萃取物主要為單萜和倍半萜類(lèi)化合物及其衍生物。這些萜類(lèi)化合物具有止血、抗炎、止痛、消腫、健胃、清熱、解毒等多種功效,這與細(xì)葉桉葉的藥效基本一致;而且其多數(shù)具有較強(qiáng)的香氣和生物活性,是醫(yī)藥、食品、化妝品工業(yè)的重要原料。尤其是單環(huán)單萜類(lèi)化合物桉油精(33.99%),含量高,且萃取時(shí)間短。可見(jiàn),SFE技術(shù)適合廣西細(xì)葉桉葉中桉油精的提取,該法具有提取率高、產(chǎn)品純度好、流程簡(jiǎn)單、工藝穩(wěn)定、耗能低、無(wú)有機(jī)溶劑殘留的特點(diǎn)。

    表1 SFE-CO2萃取細(xì)葉桉葉揮發(fā)油的化學(xué)成分分析結(jié)果Tab 1 Component analysis of essential oil extracted with supercritical CO2from E.tereticornis

    [1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草(第五冊(cè))[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:638.

    [2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊(cè))[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1977:1482.

    [3]《全國(guó)中草藥匯編》編寫(xiě)組.全國(guó)中草藥匯編(下)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1978:753.

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