有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)C57BL/6小鼠骨骼肌肌漿網(wǎng)鈣釋放相關(guān)基因表達(dá)的影響

劉效磊 牛燕媚 袁海瑞 劉素娟 傅力2，

1天津體育學(xué)院健康與運(yùn)動(dòng)科學(xué)系（天津 300381） 2天津醫(yī)科大學(xué)康復(fù)與運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)系

運(yùn)動(dòng)可以引起機(jī)體產(chǎn)生一系列的適應(yīng)性改變。單次運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體組織細(xì)胞內(nèi)多個(gè)信號(hào)通路的變化，并能持續(xù)數(shù)個(gè)小時(shí)。這些信號(hào)的變化最終導(dǎo)致基因表達(dá)譜的改變，而后基因表達(dá)逐漸恢復(fù)到運(yùn)動(dòng)前水平。而長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)則可能來(lái)自于多次運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的疊加效應(yīng)并穩(wěn)定改變了特定基因的表達(dá)水平，進(jìn)而最終引起機(jī)體某些功能的改變［1］。骨骼肌組織具有很高的可塑性，在環(huán)境因素、營(yíng)養(yǎng)狀況以及收縮活動(dòng)等改變的刺激下其結(jié)構(gòu)及功能可以發(fā)生適應(yīng)性改變［2］，并且這些結(jié)構(gòu)及功能的改變均以基因表達(dá)譜的變化為基礎(chǔ)?；蛐酒夹g(shù)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來(lái)的前沿生物技術(shù)，在基因表達(dá)分析、基因突變與多態(tài)性分析、疾病診斷與治療以及藥物研發(fā)中有著廣泛的應(yīng)用，可同時(shí)以大規(guī)模、高通量的方式分析成千上萬(wàn)個(gè)基因在不同狀態(tài)下的表達(dá)情況。目前已有大量研究利用基因芯片技術(shù)研究運(yùn)動(dòng)對(duì)機(jī)體骨骼肌基因表達(dá)的影響［3-5］，而運(yùn)用基因芯片研究長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)引起的骨骼肌基因表達(dá)譜改變的報(bào)道尚不多見(jiàn)。本研究通過(guò)對(duì)安靜對(duì)照組及6周有氧運(yùn)動(dòng)組C57BL/6小鼠骨骼肌基因芯片表達(dá)譜進(jìn)行分析，篩選差異基因，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌鈣信號(hào)通路，特別是肌漿網(wǎng)（sarcoplasmic reticulum，SR）鈣釋放相關(guān)基因的表達(dá)有較大影響，為研究長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌SR鈣循環(huán)的影響機(jī)制提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的建立

選用20只C57BL/6小鼠（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），清潔級(jí)、雄性、4周齡，隨機(jī)分為安靜對(duì)照組（C）和有氧運(yùn)動(dòng)組（E）。小鼠體重約 14.8±0.39克，兩組間無(wú)顯著性差異。運(yùn)動(dòng)組采用有氧跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，首次運(yùn)動(dòng)跑臺(tái)坡度為0，速度為10米/分，隔天遞增速度直至12米/分（強(qiáng)度相當(dāng)于75%VO2max），適應(yīng)性訓(xùn)練1周，之后連續(xù)進(jìn)行，1 次/天，60 分/次，5 次/周，為期 6 周［6］。

1.2 取材及指標(biāo)檢測(cè)

分別稱(chēng)量?jī)山M動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后體重。運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練結(jié)束24小時(shí)后，兩組動(dòng)物禁食16小時(shí)，摘眼球取血留取小鼠血液樣本，靜置30分鐘后，4℃，3000g/分鐘離心15分鐘，提取血清，置于－80℃保存?zhèn)溆?。然后分離小鼠股四頭肌，并迅速置于液氮中速凍，后保存于－80℃冰箱。每組隨機(jī)選取4只小鼠骨骼肌標(biāo)本進(jìn)行基因芯片分析，分別標(biāo)號(hào)為 C1、C2、C3、C6，E4、E6、E7、E8。并運(yùn)用酶法測(cè)定血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）含量，血清游離脂肪酸（FFAs）水平采用比色法測(cè)定。

1.3 RNA提取及基因芯片的制備

小鼠骨骼肌組織標(biāo)本檢測(cè)芯片采用北京博奧生物芯片有限公司32k Mouse Genome Array?？俁NA的提取采用 Trizol（Invitrogen，Gaithersburg，MD，USA）一步法，通過(guò)異丙醇沉淀RNA，并采用NucleoSpin誖RNA clean-up試劑盒（MACHEREY-NAGEL，Germany）純化總 RNA，最后用分光光度計(jì)定量，甲醛變性凝膠電泳觀察RNA質(zhì)量。

該芯片共有約32256條70bp長(zhǎng)度的Oligo DNA，來(lái)自于 Operon公司的小鼠全基因組Oligo庫(kù)http：//www.Operon.com。芯片的質(zhì)量控制采用一段固定化的陽(yáng)性對(duì)照序列及四個(gè)看家基因作為陽(yáng)性對(duì)照，并在芯片上點(diǎn)有50%DMSO作為陰性對(duì)照。

1.4 芯片圖像采集和數(shù)據(jù)分析

采用博奧公司LuxScan 10 KA雙通道激光掃描儀掃描芯片。掃描結(jié)果采用LuxScan 3.0圖像分析軟件分析，并把圖像信號(hào)轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)。然后運(yùn)用Lowess方法對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化。將基因臨界表達(dá)信號(hào)值定位800，刪除熒光信號(hào)弱的基因以及芯片上的陰性對(duì)照、內(nèi)標(biāo)、外標(biāo)等冗余的數(shù)據(jù)。然后用SAM軟件（Significance Analysis of Microarrays Software）進(jìn)行分析，錯(cuò)誤檢出率False Discovery Rate，F(xiàn)DR）控制在5%以?xún)?nèi)，再以 1.5倍標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)基因。對(duì)篩選得到的數(shù)據(jù)用Cluser 3.0軟件進(jìn)行層次聚類(lèi)分析，表示各實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)的相似程度。運(yùn)用博奧生物分子功能注釋系統(tǒng)V4.0（Capital Bio Molecule Annotation System V4.0），并采用 KEGG京都基因和基因組百科全書(shū)）數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因進(jìn)行通路（Pathway）分析。

2 結(jié)果

2.1 體重變化及血液生化指標(biāo)

圖1顯示。實(shí)驗(yàn)后兩組小鼠體重?zé)o顯著性差異。有氧運(yùn)動(dòng)組相對(duì)安靜對(duì)照組血液TG、TC、FFA水平有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而HDL水平則顯著性上升（如表 1）。

表1 實(shí)驗(yàn)后兩組小鼠血清TC、TG、HDL、FFA水平比較

2.2 RNA提取結(jié)果

各組RNA OD260/OD280均大于1.8，甲醛變性凝膠電泳顯示28S和18S兩條主帶，兩條主帶的亮度28S∶18S 為 2∶1，符合實(shí)驗(yàn)要求（如圖 2）。

2.3 基因表達(dá)譜及數(shù)據(jù)分析結(jié)果

運(yùn)用SAM軟件對(duì)安靜組與運(yùn)動(dòng)組表達(dá)差異基因進(jìn)行篩選，篩選條件FDR設(shè)定為5%以?xún)?nèi)，差異倍數(shù)（Fold Change）為1.5倍，得到兩組動(dòng)物差異表達(dá)基因共723個(gè)，其中表達(dá)上調(diào)基因510個(gè)，表達(dá)下調(diào)基因213個(gè)。用Cluster3.0軟件對(duì)篩選的表達(dá)基因進(jìn)行層次聚類(lèi)分析（如圖3），非監(jiān)督層次聚類(lèi)結(jié)果顯示，8樣本各自聚集，準(zhǔn)確分為安靜和運(yùn)動(dòng)兩組。

2.4 差異基因的Pathway分析

運(yùn)用博奧生物分子功能注釋系統(tǒng)V4.0（CapitalBio Molecule Annotation System V4.0）并采用 KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因進(jìn)行Pathway分類(lèi)（如表2）。其中鈣信號(hào)通路有氧運(yùn)動(dòng)與對(duì)照組相比共有6個(gè)基因表達(dá)具有顯著性差異，表達(dá)上調(diào)基因2個(gè)，分別為鳥(niǎo)嘌呤結(jié)合蛋白-α11（Phosphorylase Kinase alpha 11，Gna11）和血小板衍生生長(zhǎng)因子 α （Platelet Derived Growth Factor Receptor α，Pdgfra），表達(dá)下調(diào)基因 4個(gè)，分別為磷酸化酶激酶 -α1（Phosphorylase Kinase α 1，Phka1）、磷脂酶 C-δ4（Phos pholipase C delta 4，Plcd4）、Ryanodine 受體 1（Ryanodine Receptor 1，RYR1）和肽酰脯氨酸異構(gòu)酶D（Peptidylprolyl Isomerase D，Ppid）（如表 3）。

表2 安靜對(duì)照組和有氧運(yùn)動(dòng)組差異表達(dá)基因KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)Pathway分類(lèi)

續(xù)表2

續(xù)表2

續(xù)表2

表3 鈣信號(hào)通路差異表達(dá)基因

3 討論

有氧運(yùn)動(dòng)能夠增強(qiáng)機(jī)體的糖、脂代謝能力，提高能量代謝相關(guān)細(xì)胞核因子活性以及機(jī)體組織對(duì)胰島素的敏感性［7］，因而被廣泛應(yīng)用于肥胖、胰島素抵抗（insulin resisance，IR）以及 2型糖尿?。╰ype 2 diabetes，T2DM）等代謝性疾病的預(yù)防和臨床治療，但其具體的分子機(jī)制尚不完全明了。本實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)6周有氧跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)組小鼠血液TG、TC、FFA水平與對(duì)照組相比有下降趨勢(shì)，但差異不顯著，而HDL水平則顯著上升（P<0.05），表明長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)于脂代謝有明顯改善作用。

目前已有大量研究運(yùn)用基因芯片探索運(yùn)動(dòng)對(duì)機(jī)體基因表達(dá)譜的影響。Mahoney等人運(yùn)用基因芯片研究單次有氧運(yùn)動(dòng)后基因表達(dá)譜的變化，差異表達(dá)基因涉及代謝及線粒體生物合成、氧化應(yīng)激、離子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)等［3］。Schmutz等對(duì)比了6周有氧訓(xùn)練及對(duì)照組在單次有氧運(yùn)動(dòng)后股外側(cè)肌基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)表達(dá)差異基因多為氧化代謝及糖酵解相關(guān)基因［5］。本研究結(jié)果顯示，有氧運(yùn)動(dòng)組小鼠與對(duì)照組相比，共有36條代謝通路相關(guān)基因表達(dá)具有顯著性差異（表1），提示有氧運(yùn)動(dòng)可以引起骨骼肌細(xì)胞代謝機(jī)能的適應(yīng)性改變，而且目前利用基因芯片發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)引起的差異表達(dá)基因多為代謝相關(guān)基因。通過(guò)分析本次實(shí)驗(yàn)芯片數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)引起了Ca2+信號(hào)通路的適應(yīng)性改變。有氧運(yùn)動(dòng)組與對(duì)照組相比，共有6個(gè)Ca2+信號(hào)通路（Calcium Signaling Pathway）基因表達(dá)具有顯著性差異（Q value=5.34E-4，如表3），其中RYR1和Plcd4與骨骼肌SR Ca2+釋放過(guò)程關(guān)系密切。SR是肌肉組織中調(diào)節(jié)細(xì)胞Ca2+濃度的重要結(jié)構(gòu)。SR Ca2+攝取及釋放對(duì)維持骨骼肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義，與骨骼肌興奮－收縮偶聯(lián)密切相關(guān)，直接影響骨骼肌運(yùn)動(dòng)機(jī)能［8-10］。細(xì)胞內(nèi)SR主要的Ca2+釋放通道有兩條，即RYRs敏感性通道和 1，4，5-三磷酸肌醇受體（IP3R）敏感性通道。RYR介導(dǎo)的胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放Ca2+對(duì)維持胞內(nèi)鈣平衡起著重要作用。RYR以同源四聚體形式存在，有三種亞型，分別為RYR1、RYR2、RYR3，其中RYR1主要在骨骼肌細(xì)胞表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)使C57BL/6小鼠骨骼肌RYR1表達(dá)顯著降低（Fold Change=0.07，如表3）。

單次急性運(yùn)動(dòng)可以使SR Ca2+攝取及釋放水平明顯降低而引起骨骼肌疲勞。Matsunaga等研究表明，大鼠單次高強(qiáng)度跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（100%VO2max）可導(dǎo)致 SR Ca2+攝取及釋放水平分別降低 24%和22%［11］。Stavrianeas等研究發(fā)現(xiàn)，單次中等強(qiáng)度長(zhǎng)時(shí)間跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)（Mean=81min）使腓腸肌 SR Ca2+攝取及釋放水平分別降低 37%和 28%［12］。而目前長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)SR Ca2+循環(huán)影響的報(bào)道尚不多見(jiàn)。Li等分別測(cè)試了對(duì)照組、耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組和抗阻運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組安靜狀態(tài)下股四頭肌SR Ca2+釋放水平，結(jié)果表明，耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組SR Ca2+釋放水平顯著低于安靜組和抗阻運(yùn)動(dòng)組（P<0.05）［13］。造成長(zhǎng)期耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后SR Ca2+釋放水平降低的機(jī)制尚不明確，其可能的原因是耐力訓(xùn)練導(dǎo)致骨骼肌中Ⅱ型肌纖維比例降低。研究表明，相對(duì)于Ⅰ型肌纖維細(xì)胞，Ⅱ型肌纖維細(xì)胞具有更高的RYR濃度，并且Ⅱ型肌纖維Ca2+釋放能力是Ⅰ型肌纖維的2倍，而Ca2+攝取能力及Ca2+ATPase活性則是Ⅰ型肌纖維的2～3倍［13］。長(zhǎng)期耐力訓(xùn)練使骨骼肌中Ⅱ型肌纖維比例降低，Ⅰ型肌纖維比例升高，從而整體上降低了骨骼肌基礎(chǔ)狀態(tài)下SR Ca2+釋放水平。本實(shí)驗(yàn)中，RYR1表達(dá)水平顯著降低也從側(cè)面證明了這一假設(shè)。另外，該研究還分別測(cè)試了對(duì)照組、耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組和抗阻運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組在進(jìn)行50次最大等張收縮（180°/s，0.5Hz）后股四頭肌Ca2+的釋放水平，結(jié)果表明，三組Ca2+釋放水平分別降低 42.1±3.8%、31.3±6.1%、43.4±3.9%，耐力運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組Ca2+釋放下降水平顯著低于安靜組和抗阻運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組（P<0.05），表明有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可以提高骨骼肌運(yùn)動(dòng)及抗疲勞能力。長(zhǎng)期的有氧運(yùn)動(dòng)使骨骼肌單次運(yùn)動(dòng)后SRCa2+釋放下降水平顯著降低，推測(cè)長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)后RYR1表達(dá)水平改變可能具有骨骼肌類(lèi)型特異性，即長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可能通過(guò)提高骨骼?、裥图±w維細(xì)胞RYR1的表達(dá)水平改善SR Ca2+循環(huán)，提高骨骼肌運(yùn)動(dòng)及抗疲勞能力。另外，關(guān)于長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)Ca2+循環(huán)及RYR1表達(dá)的影響，仍存在著不同的研究結(jié)果。Matsunaga等的研究發(fā)現(xiàn)，8周有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可以引起大鼠股外肌淺區(qū)肌肉SR Ca2+攝取提高12.4%，而Ca2+-ATPase活性及Ca2+釋放則沒(méi)有明顯變化［14］。另有研究報(bào)道，有氧訓(xùn)練顯著提高了骨骼肌RYR1的表達(dá)水平［15，16］。造成這種差異的可能原因是不同的運(yùn)動(dòng)方式及所取肌肉組織，因而對(duì)于這一問(wèn)題，仍需要進(jìn)一步深入研究。

目前，一般認(rèn)為運(yùn)動(dòng)影響SR Ca2+釋放的機(jī)制包括：細(xì)胞外K+聚集導(dǎo)致動(dòng)作電位減弱；運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ATP濃度降低，Mg2+濃度升高抑制了SR Ca2+釋放通道的開(kāi)啟；運(yùn)動(dòng)后磷酸肌酸降解產(chǎn)生的無(wú)機(jī)磷進(jìn)入SR與Ca2+形成沉淀，導(dǎo)致SR游離Ca2+濃度降低等［10］。而通過(guò)改變骨骼肌各類(lèi)型肌肉RYR1的表達(dá)而影響SR Ca2+的釋放則未見(jiàn)報(bào)道，因而RYR1可以作為長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)引起骨骼肌運(yùn)動(dòng)機(jī)能改變以及骨骼肌疲勞機(jī)制研究的重要靶點(diǎn)。

SR的另一條Ca2+釋放通道即 IP3R通道。1，4，5-三磷酸肌醇（IP3）作為第二信使是IP3Rs的主要興奮劑，可以直接誘導(dǎo)Ca2+的釋放。外界刺激信號(hào)作用Ca2+釋放通道于細(xì)胞膜相應(yīng)受體，通過(guò)膜上的磷脂酶C（Phospholipase C，PLC）催化磷脂酰肌醇 4，5-二磷酸（PIP2）水解產(chǎn)生IP3和甘油二酯（DAG），其中水溶性小分子物質(zhì)IP3由細(xì)胞膜擴(kuò)散至細(xì)胞質(zhì)后與IP3R結(jié)合，引起Ca2+釋放通道開(kāi)放［17］?？梢?jiàn)PLC在激活I(lǐng)P3R Ca2+釋放通道中發(fā)揮著重要作用。到目前為止，在哺乳動(dòng)物中已鑒定出的PLCs同工酶共有15種，按其氨基酸序列及活化機(jī)制的不同可以將其分為 6 類(lèi)，即 PLCβ、PLCγ、PLCδ、PLCε、PLCζ及PLCη，其中 PLCδ又分為 1～4四個(gè)亞型，目前研究較為透徹的為PLCδ1，而PLCδ4（Plcd4）則研究較少。一般認(rèn)為，Plcd4在精卵融合、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)及調(diào)節(jié)細(xì)胞PIP2水平方面發(fā)揮重要作用，并且溶血磷脂酸（lysophosphatidic，LPA）、緩激肽（bradykinin）以及血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、胰島素樣生長(zhǎng)因子（insulin-like growth factor，IGF-I）等都可以促進(jìn)Plcd4的表達(dá)。Fukami研究認(rèn)為，生長(zhǎng)因子通過(guò)提高胞漿內(nèi)Ca2+濃度而促進(jìn)Plcd4的表達(dá)［18］。而對(duì)Hela細(xì)胞給予鈣離子螯合劑BAPTA或EGTA后，LPA等對(duì)Plcd4的促進(jìn)表達(dá)作用受到顯著抑制［18］。因而，胞漿Ca2+濃度與Plcd4表達(dá)水平密切相關(guān)并且胞漿Ca2+濃度的不足可能會(huì)影響Plcd4的表達(dá)。芯片結(jié)果表明，有氧運(yùn)動(dòng)組與安靜對(duì)照組相比，Plcd4表達(dá)量顯著性下降（Fold Change=0.11，如表3）。而本實(shí)驗(yàn)由于沒(méi)有測(cè)定小鼠骨骼肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平，因而無(wú)法得到長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)通過(guò)改變胞漿Ca2+濃度引起Plcd4表達(dá)水平改變的結(jié)論。但是Plcd4在PIP2水解及IP3R Ca2+釋放通道開(kāi)放過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度與Plcd4表達(dá)水平密切相關(guān)，這為我們提供了一個(gè)新的視角，即從Plcd4角度研究長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)SR Ca2+釋放的影響，而相關(guān)研究尚屬空白，有待于進(jìn)一步研究。

6周有氧運(yùn)動(dòng)后，小鼠骨骼肌RYR1、Plcd4表達(dá)顯著下降，并與骨骼肌SR Ca2+釋放過(guò)程關(guān)系密切，因而可能是長(zhǎng)期有氧運(yùn)動(dòng)影響C57BL/6小鼠骨骼肌SR鈣釋放的重要介質(zhì)分子。目前運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌SR Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)的研究多集中于單次急性運(yùn)動(dòng)，而長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)對(duì)其影響的研究尚不系統(tǒng)，有待于進(jìn)一步深入研究。骨骼肌收縮是運(yùn)動(dòng)實(shí)現(xiàn)的必要條件，而SR Ca2+循環(huán)與骨骼肌運(yùn)動(dòng)機(jī)能密切相關(guān)，并直接影響肌肉收縮速度與力量，因而深入研究SR Ca2+攝取與釋放的機(jī)制，對(duì)于正確認(rèn)識(shí)運(yùn)動(dòng)對(duì)機(jī)體的影響規(guī)律，消除疲勞，提高骨骼肌運(yùn)動(dòng)能力具有重要意義。

［1］Mahoney DJ，Parise G，Melov S，et al.Analysis of global mRNA expression in human skeletal muscle during recovery from endurance exercise.FASEB J，2005，19（11）：1498-500.

［2］Booth FW，Thomason DB.Molecular and cellular adaptation of muscle in response to exercise：Perspectives of various models.Physiol Rev，1991，71（2）：541-85.

［3］Mahoney DJ，Parise G，Melov S，et al.Analysis of global mRNA expression in human skeletal muscle during recovery from endurance exercise.FASEB J，2005，19（11）：1498-500.

［4］Roth SM，F(xiàn)errell RE，Peters DG，et al.Influence of age，sex，and strength training on human muscle gene expression determined by microarray.Physiol Genomics，2002，10（3）：181-90.

［5］Schmutz S，Dapp C，Wittwer M，et al.Endurance training modulates the muscular transcriptome response to acute exercise.Pflugers Arch，2006，451（5）：678-87.

［6］Fernando P，Bonen A，Hoffman-Goetz L.Predicting submaximal oxygen consumption during treadmill running in mice.Can J Physiol Pharmacol，1993（10-11），71：854-857.

［7］Hawley JA，Lessard SJ.Exercise training-induced improvements in insulin action.Acta Physiol（Oxf），2008，192（1）：127-35.

［8］Lamb GD，Junankar PR，Stephenson DG.Raised intracellular［Ca2+］abolishes excitation-contraction coupling in skeletal muscle fibres of rat and toad.J Physiol，1995，489（Pt 2）：349-62.

［9］Williams JH.Contractile apparatus and sarcoplasmic reticulum function：Effects of fatigue，recovery，and elevated Ca2+.J Appl Physiol，1997，83（2）：444-50.

［10］Allen DG，Lamb GD，Westerblad H.Impaired calcium release during fatigue.J Appl Physiol，2008，104（1）：96-305.

［11］Matsunaga S，Inashima S，Tsuchimochi H，et al.Altered sarcoplasmic reticulum function in rat diaphragm after high-intensity exercise.Acta Physiol Scand，2002，176（3）：227-32.

［12］Stavrianeas S，Spangenburg E，Batts T，Williams JH，Klug GA.Prolonged exercise potentiates sarcoplasmic reticulum Ca2+uptake in rat diaphragm.Eur J Appl Physiol，2003，89（1）：63-8.

［13］Li JL，Wang XN，F(xiàn)raser SF，et al.Effects of fatigue and training on sarcoplasmic reticulum Ca（2+）regulation in human skeletal muscle.J Appl Physiol，2002，92（3）：912-22.

［14］Matsunaga S，Yamada T，Mishima T，et al.Effects of highintensity training and acute exercise on in vitro function of rat sarcoplasmic reticulum.Eur J Appl Physiol，2007，99（6）：641-9.

［15］Anttila K，Manttari S，Jarvilehto M.Effects of different training protocols on Ca2+handling and oxidative capacity in skeletal muscle of atlantic salmon（salmo salar L）.J Exp Biol，2006，209（Pt 15）：2971-8.

［16］Anttila K，Manttari S，Jarvilehto M.Testosterone and Ca2+regulation in skeletal muscle.Int J Sports Med，2008，29（10）：795-802.

［17］Taylor CW，da Fonseca PC，Morris EP.IP（3）receptors：The search for structure.Trends Biochem Sci，2004，29（4）：210-9.

［18］Fukami K，Takenaka K，Nagano K，et al.Growth factor-induced promoter activation of murine phospholipase C delta4 gene.Eur J Biochem，2000，267（1）：28-36.