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    OPN和BMP15基因與大長雜交一代母豬產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系

    2010-05-09 07:12:50孫敬禮李大全劉賢俠
    豬業(yè)科學(xué) 2010年4期
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)活仔數(shù)大長產(chǎn)仔數(shù)

    孫敬禮,武 磊,黃 濤,李大全,劉賢俠

    (1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆??石河子??832003;2.新疆克拉瑪依瑞恒畜牧開發(fā)有限責(zé)任公司,新疆??克拉瑪依??834000)

    母豬的產(chǎn)仔數(shù)是一個重要的經(jīng)濟(jì)性狀,產(chǎn)仔數(shù)的高低直接影響到豬場的經(jīng)濟(jì)效益。因此,有效地提高豬的產(chǎn)仔數(shù),特別是提高豬的產(chǎn)活仔數(shù),一直是科學(xué)研究和養(yǎng)豬生產(chǎn)的主要任務(wù)之一。近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代繁育理論的不斷發(fā)展,從基因水平對豬高繁殖力機制進(jìn)行探討已成為一研究主題。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是一種含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的分泌型糖基化磷蛋白,廣泛存在于乳汁、子宮、胎盤等組織和體液中,具有多種生物學(xué)活性。鑒于其在動物繁殖中的重要功能。,近年來,它成為在豬繁殖性狀的重要候選基因之一[1]。骨形成蛋白 15(bone?morphogenetic?protein-15,BMP15)是由卵母細(xì)胞分泌的一種生長因子,對早期卵泡的生長、分化和排卵起重要作用;許多研究表明BMP15可能具有促進(jìn)卵泡發(fā)育,防止黃體早熟的生物學(xué)功能[2]。目前,許多學(xué)者都將其作為控制產(chǎn)仔數(shù)的候選基因加以研究。本文主要分析大長雜交一代母豬OPN和BMP15不同基因型以及合并基因型對經(jīng)產(chǎn)母豬的產(chǎn)仔數(shù)差異,為利用DNA標(biāo)記輔助選擇方法提高母豬綜合繁殖性能提供理論依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 試驗動物

    產(chǎn)仔2胎以上且記錄完備的大長雜交一代母豬樣本119頭,采自瑞恒公司豬場。前腔靜脈采血,EDTA抗凝。

    1.2 DNA提取

    采用苯酚-氯仿-異戊醇抽提方法提取DNA,置于-20?℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3 引物設(shè)計

    本研究所用引物分別參照Knoll等[3]、候振平等[4]所發(fā)表的引物序列由上海生工生物技術(shù)公司合成引物。OPN-F:5?-TCACCGATTTCCCCACCGACAC-3?;OPN-R :5?-TGGCTGCGGGTTTCCACACTG-3?。BMP15-F :5?-GATGCGTCTGCCACCTACAT?-3?;BMP15-R :5?-?CCGGAACTCAAGAATCTCAC?-3?。

    1.4 PCR擴(kuò)增

    OPN、FSHβ和ESR基因采用相同的反應(yīng)體系:10×Buffer?2.5,μL,dNTP2μL,上、 下 游 引 物 各0.5?μL(10μmol/L),50?ng/μL 模 板 DNA?1μL,Taq 酶?1U,Mgcl2?2?μL,加雙蒸水至 25?μL。

    OPN基因的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件:94?℃變性4?min,35 次循環(huán)(94?℃,40?s;60?℃,1?min;72?℃,1.1?min),72?℃延伸 10?min。

    BMP15基因的PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件:94℃變性4?min,?35 次 循 環(huán)(94?℃,30?s;58?℃,30?s;72?℃,30s),72?℃延伸 10?min。

    1.5 多態(tài)性檢測

    OPN基因由片段插入造成,瓊脂糖電泳檢測PCR產(chǎn)物即可見多態(tài)性,PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測,在凝膠上顯示為 3種帶型 :1295?bp、1295/990?bp和 990?bp, 分 別 為 AA、AB和 BB型。BMP15基 因采 用?PCR-RFLP 進(jìn) 行 分 析 :8.5μL?PCR?產(chǎn) 物 加 入0.5?μL?Spe Ⅰ及 1.5?μL?10×Buffer,37℃水浴 4?h,酶切產(chǎn)物用2%的瓊脂糖電泳檢測分型:顯示1條帶(503??bp)的為 AA 型,顯示 2 條帶(277?bp、226?bp)的為 BB 基因型,顯示 3 條帶(503?bp、277?bp、226?bp)為 AB 基因型。

    1.6 數(shù)據(jù)處理

    整理基因型數(shù)據(jù),計算所測豬群體OPN和BMP15基因不同基因型的基因型頻率、基因頻率,用SPSS13.0分析產(chǎn)仔數(shù)在各基因型間的差異顯著性,數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 基因型頻率和基因頻率

    根據(jù)OPN、BMP15基因型檢出個數(shù),計算基因型頻率和基因頻率,見表1。OPN基因AA型頻率最大,BB型頻率最小,AB在兩者之間,且A等位基因占優(yōu)勢,分別為0.673和0.327;BMP15基因BB型較少,AA型最多,A基因頻率為0.613,為優(yōu)勢等位基因。

    2.2 OPN和BMP15基因與產(chǎn)仔數(shù)關(guān)系

    根據(jù)大長雜交一代豬群中OPN基因和BMP15基因各基因型及其合并基因型檢出個數(shù)和對應(yīng)的經(jīng)產(chǎn)產(chǎn)仔數(shù)資料,計算OPN基因和BMP15基因與產(chǎn)仔數(shù)關(guān)系。

    從表2可以看出,BB型產(chǎn)仔數(shù)比AA型高1.717頭,產(chǎn)活仔數(shù)比AA型高1.223頭;不同基因型間產(chǎn)仔數(shù)表現(xiàn)出BB>AB>AA的趨勢。AA型與BB型對豬的產(chǎn)仔數(shù)差異極顯著(P<0.01),但對豬的產(chǎn)活仔數(shù)差異顯著(0.01<P<0.05)。

    由表3可以看出,AA和AB型個體對豬的產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)均高于BB型個體,AA型與AB型、BB型對豬的產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)差異顯著(0.01<P<0.05),AB型與BB型差異不顯著(P>0.05)。

    從表4可以看出,BMP15和OPN合并基因型中BBBB合并基因型對豬的產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)最高,分別為12.750和11.500;BBAA合并基因型產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)最低,產(chǎn)仔數(shù)只和BBAA、ABAA合并基因型差異不顯著(P>0.05),和其他合并基因型差異極顯著(P<0.01)。

    表1 OPN和BMP15基因的基因型分布和頻率

    表2 OPN基因與產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系

    表3 BMP15基因與產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系

    表4 BMP15和OPN合并基因型與產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系

    3 討論

    OPN基因的多態(tài)性非常豐富,有研究表明,骨調(diào)素基因啟動子區(qū)存在9個(TG)n雙核苷酸的交替重復(fù)序列,是骨調(diào)素基因轉(zhuǎn)錄速率的主要區(qū)域[5]。Liaw[6]在約克夏、杜洛克、盤克夏和藍(lán)瑞斯母豬群體中共發(fā)現(xiàn)27種基因型;Southwood發(fā)現(xiàn)了13個等位基因。此外,在OPN基因的內(nèi)含子上也存在多態(tài),Knoll[3]研究發(fā)現(xiàn)豬OPN基因的第6內(nèi)含子上有305?bp的缺失,并發(fā)現(xiàn)長白豬、皮特蘭豬上A等位基因占優(yōu)勢(0.57和0.82),而大白豬和杜洛克豬的B等位基因占優(yōu)勢(0.74和0.84)。而本實驗結(jié)果表明A和B兩個等位基因在大長雜交一代母豬群體中均有分布,且A等位基因占優(yōu)勢;就基因型分布而言,AA基因型頻率最大,BB基因型頻率最小,AB在兩者之間;從表2可以看出,BB和AB型個體對豬的產(chǎn)仔數(shù)高于AA型個體。這與羅仍卓么等[5]的研究指出的在長白和大白豬種中,OPN優(yōu)良基因型為BB型是一致的。

    關(guān)于BMP15基因位點對繁殖性能的影響已有相關(guān)報道,許多研究表明在綿羊中BMP15基因突變雜合體能引起排卵數(shù)的增加。儲明星等[7]研究表明BMP15FecXG突變雜合基因型小尾寒羊平均產(chǎn)羔數(shù)比野生純合基因型多0.62只或0.55只。侯振平等[4]研究發(fā)現(xiàn),AA型母豬群體中,二花臉、梅山豬的產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)極顯著高于BB型母豬群體;AB型梅山豬群,頭胎產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)極顯著高于AA型和BB型母豬群體。本研究中,BMP15基因的3種基因型個體都檢測到了。另外,本研究表明,大長雜交一代豬的不同基因型母豬的總產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)間差異顯著,從表3可以看出,AA產(chǎn)活仔數(shù)比BB高1.335頭;不同基因型間產(chǎn)仔數(shù)表現(xiàn)出AA>AB>BB的趨勢。這與侯振平等[4]和吳井生等[6]的研究指出的在梅山和大白豬種中,AA型母豬的產(chǎn)仔數(shù)和產(chǎn)活仔數(shù)顯著高于BB型母豬群體是一致的。

    從表4可以看出,BMP15和OPN合并基因型中AABB和BBBB合并基因型產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)均高于其它合并基因型,BBBB合并基因型最高,理論上應(yīng)是AABB合并基因型的最高,在本次研究中卻是BBBB合并基因型最高,這可能因為BBBB合并基因型的樣本量太少有關(guān),頭數(shù)只有4個,其與產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系需進(jìn)一步加大樣本量。BBAA合并基因型產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)活仔數(shù)最低;這與理論上是一致的。因此,對于OPN基因而言,B等位基因均可視為增加產(chǎn)仔數(shù)的優(yōu)勢基因。這和單獨應(yīng)用OPN基因型的分析結(jié)果[8]一致。對于BMP15基因而言,A等位基因可視為增加產(chǎn)仔數(shù)的優(yōu)勢基因。

    從本次檢測結(jié)果來看,被檢測的大長雜交一代豬BMP15基因的有利基因A頻率較高,為0.613;但是OPN基因的有利基因B頻率較低,僅為0.327;在隨后的育種生產(chǎn)實踐中,我們將根據(jù)基因檢測結(jié)果,結(jié)合產(chǎn)仔記錄和生產(chǎn)性能,選擇OPN為BB基因型和BMP15為AA基因型的母豬和后備豬,改善生產(chǎn)母豬繁殖力的遺傳基礎(chǔ),加快繁殖力性狀的遺傳進(jìn)展,增加母豬的窩產(chǎn)仔數(shù),以提高生產(chǎn)水平和經(jīng)濟(jì)效益。

    [1]?Yin?Li,?He?Z?Q?and?Zhong?G.Osteopontin,?it′ s?receptor?and?the?reproduction?(J).?Progressin?Obstetrics?and?Gynecology,?2005,14(3):239 ~ 240

    [2]?吳井生,朱孟玲.骨形成蛋白15基因BcuI多態(tài)性對豬產(chǎn)仔性能的影響[J].畜牧與獸醫(yī),2009,41(3):19.

    [3]?Knoll? A,? Stratil? A,? Cepica? S? and? Dvorak? J.?Lengthpolymorphism?in?an?intron?of?the?porcine?osteopontin?(SPP1)gene?is?caused?by?the?presence?or?absence?of?a?SINE?(PRE-1)element?(J).?Animal?Genetics,?1999,?30:466

    [4]?候振平,印玉龍,等.豬骨形成蛋白15基因編碼區(qū)序列的克隆及測序研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,25(2):91.

    [5]?羅仍卓么,王立賢,孫世鐸.豬OPN基因與繁殖性狀的關(guān)聯(lián)分析[J].農(nóng)業(yè)生物科技學(xué)報,2008,16(3):412-416.

    [6]?Liaw?R?B,?Chang?H?L,?Lai?Y?Y,?Liu?C?T?and?Wu?M?C.? Influence? of? sows'? osteopontin? alleles? to? their? litter?performance?(J).Journal?Chinese?Society?of?Animal?Science,?2000,?29(Suppl.):?131

    [7]?儲明星,桑林華,王金玉,等.小尾寒羊高繁殖力候選基因BMP15和GDF9的研究[J].遺傳學(xué)報,2005,32(1):38-45.

    [8]?孟慶利,劉鐵錚.豬骨調(diào)素基因多態(tài)性對產(chǎn)仔性狀的影響[J].家畜生態(tài)學(xué)報,2005,26(3):13-16.

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