如何實(shí)施對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰Φ拇_認(rèn)

文/倪敏 喻雨琴

實(shí)驗(yàn)室是用于在科學(xué)上為闡明某一現(xiàn)象而創(chuàng)造特定的條件以便觀察其變化和結(jié)果的機(jī)構(gòu)。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室則是用于完成檢測(cè)工作的實(shí)驗(yàn)室，向社會(huì)提供準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)和結(jié)果，它在技術(shù)經(jīng)濟(jì)活動(dòng)和社會(huì)發(fā)展過程中都占有重要的地位。檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室終產(chǎn)品的體現(xiàn)是檢測(cè)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)室要向社會(huì)出具高質(zhì)量的報(bào)告，并得到社會(huì)各界的信賴和認(rèn)可，所以其檢測(cè)數(shù)據(jù)的可靠性至關(guān)重要。

實(shí)驗(yàn)室是否通過檢查并提供客觀證據(jù)，證實(shí)某一特定預(yù)期用途的特定要求得到滿足？實(shí)驗(yàn)室是否對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以證實(shí)該方法適合于預(yù)期的用途?CNAS-CL01《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》提出了方法的確認(rèn)。

確認(rèn)的定義：通過檢查并提供客觀證據(jù)以證實(shí)某一特定的預(yù)期用途的特殊要求或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。確認(rèn)應(yīng)盡可能的廣泛全面，以滿足預(yù)定用途或應(yīng)用領(lǐng)域的需要，證實(shí)實(shí)驗(yàn)室能夠正確地執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)方法。實(shí)驗(yàn)室是否記錄所獲得的結(jié)果、使用的確認(rèn)程序以及該方法是否適于預(yù)期用途的聲明？這就要求檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在開始檢測(cè)之前應(yīng)確認(rèn)能夠正確地運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)方法；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)的方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)，以證實(shí)實(shí)驗(yàn)室能夠正確地執(zhí)行變化了的標(biāo)準(zhǔn)方法。

一般實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)4種檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)，以證實(shí)這些方法適用于預(yù)期用途，包括：標(biāo)準(zhǔn)方法應(yīng)用實(shí)施前；非標(biāo)準(zhǔn)方法；自己新設(shè)計(jì)開發(fā)；超過預(yù)期范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法/擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法。方法確認(rèn)的前提是驗(yàn)證，驗(yàn)證則是一個(gè)持續(xù)的過程。

確認(rèn)是運(yùn)行前和變化后實(shí)施的評(píng)定，目的在于證明各檢測(cè)/驗(yàn)方法能力能夠達(dá)到預(yù)期的控制水平（或滿足可接受水平）；驗(yàn)證是在運(yùn)行中和運(yùn)行后進(jìn)行的評(píng)定，目的在于證明確實(shí)達(dá)到了預(yù)期的控制水平（和/或滿足了可接受水平）。

一、檢測(cè)方法確認(rèn)的技術(shù)要求說明

目前對(duì)檢測(cè)方法在使用前或變更后的確認(rèn)可依據(jù)GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》附錄F對(duì)技術(shù)要素進(jìn)行驗(yàn)證。

1.回收率

回收率是向試樣中加入已知量被測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，最后看加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否能定量回收，以判斷分析過程是否存在系統(tǒng)誤差。在樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測(cè)定其回收率，可以檢驗(yàn)分析方法的準(zhǔn)確程度和樣品所引起的干擾誤差。

對(duì)于食品中的禁用物質(zhì)，回收率應(yīng)在方法測(cè)定低限、2倍方法測(cè)定低限和10倍方法測(cè)定低限進(jìn)行三水平試驗(yàn)；對(duì)于已制定最高殘留限量（MRL）的，回收率應(yīng)在方法測(cè)定低限、MRL、選一合適點(diǎn)進(jìn)行三水平試驗(yàn)；對(duì)于未制定MRL的，回收率應(yīng)在方法測(cè)定低限、常見限量指標(biāo)、選一合適點(diǎn)進(jìn)行三水平試驗(yàn)?；厥章实膮⒖挤秶姳?：

表1 回收率范圍

回收率公式：

回收率（%）=（添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的試樣實(shí)測(cè)量-試樣中被測(cè)物量）/加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量×100%---（1）

2.校準(zhǔn)曲線

①被測(cè)組分濃度的選擇

應(yīng)描述校準(zhǔn)曲線的數(shù)學(xué)方程以及校準(zhǔn)曲線的工作范圍，濃度范圍盡可能覆蓋一個(gè)數(shù)量級(jí)（如0.1～1.0），至少作5個(gè)點(diǎn)（不包括空白），在不同濃度水平上畫出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)于篩選方法，線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98；對(duì)于確證方法，相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。測(cè)試溶液中被測(cè)組分濃度應(yīng)該在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。

對(duì)于給出良好線性度方法，用測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)在5個(gè)不同濃度水平上畫出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線即可。當(dāng)線性度差時(shí)，需要更多個(gè)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)。定量分析方法的線性都是通過分析具有覆蓋方法所要求濃度范圍的分析物樣品來確定，應(yīng)用最小二乘法將其結(jié)果用于計(jì)算回歸線。如果某一檢測(cè)方法在一特定范圍內(nèi)是線性的（但不是絕對(duì)要求），這就比較理想。

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：

y=a+bx -------------------------（2）

相關(guān)系數(shù)R=0.9999

式（2）中：a——截距；

b——斜率。

在分析測(cè)試中常會(huì)遇到處理兩個(gè)變量之間的關(guān)系，如在建立校準(zhǔn)曲線時(shí)需要了解被測(cè)組分的濃度和響應(yīng)值之間的關(guān)系。兩個(gè)變量x與y之間的關(guān)系存在著函數(shù)關(guān)系，y值隨著x值按照確定的規(guī)律變化，由一個(gè)xi值可以精確地求出yi值。

（x,y）的散布圖 y=f(x)------------（3）

回歸函數(shù)是一個(gè)線性函數(shù)，則稱變量間是線性相關(guān)的。一元線性回歸方程：y=a+bx

由于存在測(cè)定誤差，x與y不是函數(shù)關(guān)系，而是相關(guān)關(guān)系（相關(guān)關(guān)系是統(tǒng)計(jì)關(guān)系）。

②校準(zhǔn)曲線的繪制注意事項(xiàng)

每種應(yīng)用校準(zhǔn)曲線的分析方法在初次使用時(shí)，可通過繪制校準(zhǔn)曲線以確定它的檢測(cè)上限，并結(jié)合檢測(cè)下限確定其檢測(cè)范圍。繪制校準(zhǔn)曲線應(yīng)注意：

a校準(zhǔn)曲線一般可根據(jù)4～6個(gè)濃度及其測(cè)量信號(hào)響應(yīng)值繪制；

b測(cè)量信號(hào)值的最小分度應(yīng)與縱坐標(biāo)的最小分格相適應(yīng)；

c濃度的整數(shù)值應(yīng)落在橫坐標(biāo)的中格或大格的粗線上，以便于分小格查閱，并盡量使校準(zhǔn)曲線的幾何斜率接近于1（與橫坐標(biāo)約成45°角），以使在兩個(gè)軸上的讀數(shù)誤差相近。

d校準(zhǔn)曲線的斜率常因溫度、試劑批號(hào)等條件的變化而變化。在測(cè)定未知樣品的同時(shí)測(cè)繪校準(zhǔn)曲線是最理想的。否則，應(yīng)在測(cè)定未知樣品的同時(shí)，平行測(cè)定線性范圍內(nèi)的中等濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白溶液各2份，取均值相減后，與以前繪制的校準(zhǔn)曲線上相同點(diǎn)進(jìn)行核對(duì)，二者的相對(duì)差值根據(jù)方法精密度要求小于5%或小于10%，否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線。

③校準(zhǔn)曲線的相關(guān)因素

繪制校準(zhǔn)曲線所依據(jù)兩個(gè)變量的線性關(guān)系，決定著校準(zhǔn)曲線的質(zhì)量和樣品測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度。影響校準(zhǔn)曲線線性關(guān)系的因素：

a分析方法本身的精密度；

b分析儀器的精密度；

c量取標(biāo)準(zhǔn)溶液所用量器的準(zhǔn)確度；

d易揮發(fā)溶劑（如萃取反應(yīng)顯色物的有機(jī)溶劑）揮發(fā)所造成比色液體體積的變動(dòng)幅度；

e分析人員的操作水平。

由于存在測(cè)定誤差，可用“相關(guān)系數(shù)”來判斷校準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系。如用4～6個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液及其測(cè)量響應(yīng)值繪制的校準(zhǔn)曲線，根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)應(yīng)力求其相關(guān)系數(shù)的絕對(duì)值IrI≥0.999。否則可參照上述影響線性關(guān)系的諸因素，找出原因并盡可能加以糾正，重新測(cè)定和繪制新的校準(zhǔn)曲線。

對(duì)于成熟的分析方法和熟練的分析人員若能細(xì)心并嚴(yán)格按規(guī)范操作，則校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值IrI≥0.999，在實(shí)驗(yàn)條件不變情況下校準(zhǔn)曲線的斜率一般很穩(wěn)定，其截距等于零。

④相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)法檢驗(yàn)

方程y=a+bx中因變量y與自變量x之間是否確實(shí)存在相關(guān)關(guān)系，在求線性回歸方程的過程中也可用最小二乘法求得“回歸方程”，畫出一條直線，這可用相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)法檢驗(yàn)。相關(guān)系數(shù)的顯著檢驗(yàn)具體步驟如下：

a按照公式（4）由樣本值計(jì)算相關(guān)系數(shù)r

b給定顯著性水平α，按照樣本容量n，由“相關(guān)系數(shù)臨界值表”（見“回歸分析”中的“相關(guān)系數(shù)臨界值表”）中查出臨界值rα,n。

c 比較IrI與rα,n的大小，若IrI≥rα,n，則認(rèn)為x與y之間存在線性相關(guān)關(guān)系；若IrI

例：用原子吸收分光光度法測(cè)定微量鈷，得到下列一組數(shù)據(jù)（見表2）：

表2 用原子吸收分光光度法測(cè)定微量鈷

試由上述數(shù)據(jù)確定A與c的線性回歸方程式，該關(guān)系式是否有意義？

解：分別求出斜率b和截距a

按下式計(jì)算出相關(guān)系數(shù)：r=Sxy/（SxxXSyy）1/2=1.000

查相關(guān)系數(shù)臨界值表，r0.05,5=0.878，r>r0.05,5，說明確立的回歸方程是有意義的。

3.精密度

精密度就是幾次平行測(cè)定（分析）結(jié)果相互接近的程度。精密度的高低用偏差來衡量。其中偏差是指單次測(cè)定結(jié)果值與幾次測(cè)定結(jié)果平均值之間的差別。

①偏差的計(jì)算

對(duì)于食品中的禁用物質(zhì)，精密度實(shí)驗(yàn)應(yīng)在方法測(cè)定低限、2倍方法測(cè)定低限和10倍方法測(cè)定低限三個(gè)水平進(jìn)行；

對(duì)于已制定MRL（最高殘留限量）的，精密度實(shí)驗(yàn)應(yīng)在方法測(cè)定低限、MRL、選一合適點(diǎn)三個(gè)水平進(jìn)行；對(duì)于未制定MRL的，精密度實(shí)驗(yàn)應(yīng)在方法測(cè)定低限、常見限量指標(biāo)、選一合適點(diǎn)三個(gè)水平進(jìn)行。

復(fù)測(cè)定次數(shù)至少為6。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的變異系數(shù)參考范圍見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)

絕對(duì)偏差=單次測(cè)得值-測(cè)得結(jié)果平均值

相對(duì)偏差=絕對(duì)偏差/測(cè)得平均值×100%

平均偏差：各次測(cè)量值偏差的絕對(duì)值之和被測(cè)量次數(shù)除的平均值。

相對(duì)平均偏差：平均偏差/平均結(jié)果x 100%

極差：也稱全距R，是一組數(shù)據(jù)極大值與極小值之差。

目前普遍采用標(biāo)準(zhǔn)差的相對(duì)值來反映數(shù)據(jù)的相對(duì)波動(dòng)度，標(biāo)準(zhǔn)差的相對(duì)值稱為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RD。

單次測(cè)量結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差又稱變異系數(shù)CV。

例：測(cè)定試樣中的氟化物含量，重復(fù)測(cè)定5次，其數(shù)據(jù)為：

0.45；0.39；0.47；0.40；0.43 mg/L，試求極差？平均偏差？標(biāo)準(zhǔn)差？變異系數(shù)？

計(jì)算結(jié)果：極差R=0.47-0.39=0.08 mg/L

平均偏差d=I0.13I/5=0.026 mg/L

標(biāo)準(zhǔn)差S=0.00451/2/(5-1)=0.033 mg/L

變異系數(shù)CV=0.033/0.43x100%=7.7%

②標(biāo)準(zhǔn)差的作用

a表示觀察值分布的離散程度（由偶然誤差決定）。當(dāng)兩組觀察值在單位相同、兩均數(shù)相近的條件下，標(biāo)準(zhǔn)差較大，說明觀察值的變異程度較大，即觀察值圍繞均數(shù)的分布較離散，均數(shù)的代表性較差；反之均數(shù)的代表性就較好。

在理化檢驗(yàn)工作中，例如摸索某一檢驗(yàn)方法的實(shí)驗(yàn)條件或比較兩種檢測(cè)方法時(shí)，都常用到標(biāo)準(zhǔn)差。

b用標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算變異系數(shù)。當(dāng)兩組觀察值單位不同，或兩均數(shù)相差較大時(shí)，不能直接用標(biāo)準(zhǔn)差比較其變異程度的大小，這時(shí)可用變異系數(shù)（CV）進(jìn)行比較。

同標(biāo)準(zhǔn)差一樣，變異系數(shù)愈小，說明觀察值的變異程度愈小；變異系數(shù)愈大，說明觀察值的變異程度愈大。理化檢驗(yàn)方法的精密度就是用變異系數(shù)28 ssm ／2010／5（或稱相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差）表示的。

重復(fù)性試驗(yàn)：目的是為了預(yù)測(cè)精密度。

平行測(cè)定的次數(shù)愈多，其平均值愈接近真實(shí)值。合理的反映實(shí)驗(yàn)室對(duì)一個(gè)分析方法的精密度應(yīng)該通過在一個(gè)時(shí)間階段（1～2周）內(nèi)若干批的試驗(yàn)中得到，這樣可以區(qū)分出批內(nèi)和批間的變異而指出產(chǎn)生隨機(jī)誤差的重要來源。另一方面從所有批的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差合并值可以指出常規(guī)分析中隨機(jī)誤差的規(guī)律。

在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中必須選擇合適的批數(shù)m和重復(fù)測(cè)量次數(shù)n，一般情況下n=2～4次，m=5～10次為最合適。

4.測(cè)定低限

①測(cè)定方法

方法的測(cè)定低限按公式（9）計(jì)算：

式中：CL－方法的測(cè)定低限；

Sb－空白值標(biāo)準(zhǔn)偏差（一般平行測(cè)定20次得到）；

b－方法校準(zhǔn)曲線的斜率。

對(duì)于已制定MRL（最高殘留限量）的物質(zhì)，方法測(cè)定低限加上樣品在MRL處標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍，不應(yīng)超過MRL值。對(duì)于禁用物質(zhì)，方法測(cè)定低限應(yīng)盡可能低。

測(cè)定低限又稱檢出限或檢測(cè)限：把3倍空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差（測(cè)定次數(shù)n≥20）相對(duì)應(yīng)的質(zhì)量或濃度稱為測(cè)定低限（檢出限）。如色譜法：設(shè)色譜儀最低響應(yīng)值和檢出限分別按公式（10）和（11）計(jì)算：

式中：N為儀器噪音水平。

式中：b-標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程中的斜率；

響應(yīng)值 /μg或響應(yīng)值 /ng；

S-儀器噪音的3倍，即儀器能辨認(rèn)的最小物質(zhì)信號(hào)。

②測(cè)定低限（又稱檢出限或檢測(cè)下限）分類

測(cè)定低限可分為三類：

a儀器檢測(cè)下限：即相當(dāng)于背景，儀器檢測(cè)的可靠最小信號(hào)，通常用信號(hào)噪聲比表示，當(dāng)N/S≥3時(shí)，定義為儀器檢測(cè)下限；

b方法檢測(cè)下限:即某方法可檢測(cè)的最小濃度。

方法的測(cè)定低限（檢測(cè)下限）按公式（9）計(jì)算；標(biāo)準(zhǔn)偏差按公式（12）計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程按公式（2）計(jì)算。

c樣品檢測(cè)下限:即相對(duì)于空白可檢測(cè)的最小樣品的含量。定義樣品檢測(cè)下限為3倍空白標(biāo)準(zhǔn)偏差即3S空白，故而只有空白含量為零時(shí)，樣品檢測(cè)下限才等于方法檢測(cè)下限，然而空白含量往往不等于零。

5.準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度——表示分析結(jié)果與真實(shí)值接近的程度。

重復(fù)分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（實(shí)物標(biāo)樣）或水平測(cè)試樣品，測(cè)定含量（經(jīng)回收率校準(zhǔn)后）平均值與真實(shí)值的偏差指導(dǎo)范圍（見表3）。

表3 測(cè)定值與真實(shí)值的偏差指導(dǎo)范圍

分析結(jié)果和真實(shí)值之間的差值稱為誤差，誤差越小分析結(jié)果的準(zhǔn)確度越高；誤差越大分析結(jié)果的準(zhǔn)確度越低。

準(zhǔn)確度的高低用誤差來衡量。

誤差分為：

絕對(duì)誤差——測(cè)定值與真實(shí)值之間的差值；

相對(duì)誤差——測(cè)定值與真實(shí)值之間的差值對(duì)真實(shí)值的百分?jǐn)?shù)。

例如：某物質(zhì)的真實(shí)值為1.0000g，測(cè)定值為0.9980g，

其絕對(duì)誤差為-0.0020g；

其相對(duì)誤差=（-0.0020/1.0000）×100%=-0.2%。

將測(cè)得的組分的百分含量與公認(rèn)的“真實(shí)值”之差，作為定量分析的誤差，以衡量某一分析方法或某一實(shí)驗(yàn)室的分析水平，或衡量某一分析者的技術(shù)熟練程度。

相對(duì)誤差是誤差在真實(shí)值中所占的百分率：

相對(duì)誤差=（絕對(duì)誤差/被測(cè)量真實(shí)值）×100%。

6.提取效率

提取效率可用以下方法進(jìn)行試驗(yàn)：

① 用陽性的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或水平測(cè)試的陽性樣品進(jìn)行試驗(yàn)；

②陽性樣品用同一溶劑反復(fù)提取，觀察被分析物的濃度變化；

③用不同提取技術(shù)或不同提取溶劑進(jìn)行比較。

提取效率與樣品的前處理、選擇的溶劑、提取技術(shù)有關(guān)：由于食品本身（如蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等）對(duì)分析測(cè)定常產(chǎn)生干擾，因此在定性定量分析測(cè)定之前必須對(duì)樣品進(jìn)行前處理。樣品在處理過程中，既要排除干擾的因素，又不致于使被測(cè)物受到損失，而且還應(yīng)能使被測(cè)物達(dá)到一定濃度，從而使測(cè)定得到理想結(jié)果。所以在分析過程中，樣品的前處理、選擇的溶劑、提取技術(shù)是分析測(cè)定的重要步驟。在分析化學(xué)中，常用的分離方法有沉淀分離法、液-液萃取分離法、離子交換分離法、色譜分離法、蒸餾和揮發(fā)分離法等。

如液-液萃取分離又叫溶劑萃取分離，一般簡稱萃取分離。這種方法是利用與水不相混的有機(jī)溶劑同試液一起震蕩，這時(shí)，一些組分進(jìn)入有機(jī)相中，另一些組分仍留在水相中，從而達(dá)到分離的目的。提取效率直接影響到檢測(cè)回收率、精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍和最低檢出限。

7.特異性（定性要求）

對(duì)于檢測(cè)篩選方法和確證方法特異性必應(yīng)予以規(guī)定，尤其對(duì)于確證方法必應(yīng)盡可能清楚地提供待測(cè)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息，特別是一些化學(xué)官能團(tuán)、分子結(jié)構(gòu)僅基于色譜分析而沒有使用分子光譜測(cè)定的方法，不能用于確證方法。確證方法可采用：

①氣相色譜-質(zhì)譜；

②液相色譜-質(zhì)譜；

③免疫親和色譜或氣相色譜-質(zhì)譜；

④氣相色譜-紅外光譜；

⑤液相色譜-免疫層析。

筆者曾見一檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在驗(yàn)證確認(rèn)其新研究的檢測(cè)方法時(shí)僅用分光光度法，當(dāng)介紹到分光光度計(jì)在兩個(gè)不同波長處分別出現(xiàn)有兩個(gè)峰時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員以“峰形漂亮對(duì)稱”為理由認(rèn)為這就是要確定選擇的具特異性化合物的峰，但該實(shí)驗(yàn)室并未采用其他的方法作佐證進(jìn)行定性，這是沒有科學(xué)依據(jù)的確證方法。因此策劃采用不同的儀器作為確證方法，可以清楚地提供待測(cè)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息，特別是一些化學(xué)官能團(tuán)、分子結(jié)構(gòu)，可確保有效地進(jìn)行定性。

8.耐用性

檢測(cè)方法應(yīng)具有對(duì)可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力，當(dāng)測(cè)定條件發(fā)生細(xì)小變動(dòng)時(shí)，方法應(yīng)具有一定的保持測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。

耐用性也稱抗變性或穩(wěn)健性。不同實(shí)驗(yàn)室在使用同一檢測(cè)方法時(shí)，他們不可避免地會(huì)在程序方法上引入一些小的變動(dòng)，這些變動(dòng)可能會(huì)也可能不會(huì)對(duì)方法的工作特點(diǎn)產(chǎn)生重大影響。一種方法的耐用性（抗變性或穩(wěn)健性）是通過慎重地對(duì)檢測(cè)方法引入某些小的改變并檢查其影響結(jié)果來測(cè)試的。用同一樣品由三個(gè)以上實(shí)驗(yàn)室按同樣檢測(cè)方法檢驗(yàn)，該檢測(cè)方法應(yīng)具有一定的保持測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。

再現(xiàn)性（復(fù)現(xiàn)性）—表示不同分析人員或不同實(shí)驗(yàn)室之間在各自實(shí)驗(yàn)條件下所得分析結(jié)果的精密度。一個(gè)數(shù)值R在再現(xiàn)性條件下，兩次測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過此數(shù)R的概率為一個(gè)指定值（一般為95%）。所謂再現(xiàn)性條件是指在兩個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室，不同操作人員，不同儀器設(shè)備，在不同或相同的時(shí)間內(nèi)，用同樣試驗(yàn)方法程序?qū)ν槐辉嚇悠匪玫膬蓚€(gè)獨(dú)立單次試驗(yàn)結(jié)果的再現(xiàn)試驗(yàn)條件。也可理解為在改變了的測(cè)量條件下，同一被測(cè)量結(jié)果之間的一致性。

確認(rèn)研究新的檢測(cè)方法，其研究必須要提供有按7特異性和8耐用性兩個(gè)技術(shù)要素指標(biāo)的數(shù)據(jù)。綜合了上述8個(gè)技術(shù)參數(shù)驗(yàn)證數(shù)據(jù)才能確認(rèn)該檢測(cè)方法預(yù)期目的有效性。

如：首次采用的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法在應(yīng)用于樣品檢測(cè)前，應(yīng)對(duì)檢測(cè)方法的技術(shù)要素進(jìn)行驗(yàn)證確認(rèn)。

二、實(shí)驗(yàn)室擬擴(kuò)項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法

首次采用的標(biāo)準(zhǔn)方法在應(yīng)用于樣品檢測(cè)前，應(yīng)對(duì)檢測(cè)方法的技術(shù)要素進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，再實(shí)施確認(rèn)。如某檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要擴(kuò)SC/T 3025-2006《水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定》檢測(cè)方法，該方法適用范圍：適用于水產(chǎn)品中甲醛含量的定量測(cè)定。

1.策劃

①立項(xiàng)申請(qǐng)：目的、人員、儀器設(shè)備及試劑、時(shí)間安排及進(jìn)度；

②計(jì)劃任務(wù)書：人員、時(shí)間安排及進(jìn)度、策劃驗(yàn)證項(xiàng)目、判定值、評(píng)價(jià)、確認(rèn)的方法；

③驗(yàn)證工作的實(shí)施；

④評(píng)價(jià)和確認(rèn)。

2.實(shí)驗(yàn)人員遵循技術(shù)要素開展

①回收率

“對(duì)于食品中的禁用物質(zhì)，回收率應(yīng)在方法測(cè)定低限、兩倍方法測(cè)定低限和十倍方法測(cè)定低限進(jìn)行三水平試驗(yàn)。”

根據(jù)NY 5172-2002《無公害食品水發(fā)水產(chǎn)品》規(guī)定，甲醛為食品中的禁用物質(zhì)，其最高殘留限量（MRL）≤10.0mg/kg。

由此三個(gè)添加回收率水平是

a.方法測(cè)定低限0.5mg/kg；

b.MRL 10.0mg/kg；

c.MRL與方法測(cè)定低限間合適點(diǎn)5.00mg/kg。

按SC/T 3025-2006《水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定》檢測(cè)方法4.1.5.1對(duì)甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的標(biāo)定，甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度是5.004mg/L；

計(jì)算得：a XL1-1=0.450mg/kg；XL1-2=0.456mg/kg；

按照標(biāo)準(zhǔn)GB 27404-2008附錄F.1回收率規(guī)定：被測(cè)組分含量在0.1mg/kg～1mg/kg，其回收率范圍80%～110%；1.0mg/kg～100mg/kg其回收率范圍90%～110%。故本項(xiàng)目回收率符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

②校準(zhǔn)曲線

曲線Y=0.0171X-0.0018 R=0.9999

按照標(biāo)準(zhǔn)GB 27404-2008附錄F.2校正曲線要求，相關(guān)系數(shù)R>0.98，故本項(xiàng)目能滿足標(biāo)準(zhǔn)的要求。

③精密度

同回收率部分進(jìn)行三水平試驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)6次，對(duì)變異系數(shù)進(jìn)行考查。

三水平試驗(yàn) L1 L2 L3 0.450 4.56 9.450.456 4.55 9.330.444 4.60 9.260.474 4.49 9.240.468 4.54 9.430.456 4.60 9.42 CV（%） 2.44 0.91 0.84樣品（mg/kg）

按GB 27404-2008附錄F.3精密度的要求：

被測(cè)組分含量范圍在 1mg/kg 10mg/kg 10mg/kg

變異系數(shù)應(yīng) <11%<7.5% <7.5%

故本項(xiàng)目能滿足標(biāo)準(zhǔn)的要求。

④測(cè)定低限

方法的測(cè)定低限按公式（9）計(jì)算：

CL＝3Sb/b

對(duì)于已制定MRL的物質(zhì)，方法測(cè)定低限加上樣品在MRL處，標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍，不應(yīng)超過MRL值。對(duì)于禁用物質(zhì)，方法測(cè)定低限應(yīng)盡可能低。

平均測(cè)定20次空白，其吸光度為：0.0010，0.0012，0.0012，0.0008，0.0009，0.0011，0.0010，0.0012，0.0008， 0.0012， 0.0014， 0.0008， 0.0011， 0.0013，0.0012，0.0010，0.0009，0.0007，0.0010，0.0009

標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=20） Sb=0.000190，標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率=0.0171

CL=3Sb/b=3×0.000190/0.0171=0.0333mg/kg

當(dāng)取樣量為10g，稀釋倍數(shù)為10，標(biāo)樣與樣品比色體積都為10mL時(shí)，CL=0.0333×10=0.333mg/kg，

低于SC/T 3025-2006《水產(chǎn)品中甲醛的測(cè)定》中（4.1）檢出限0.50mg/kg的要求，故能滿足最低檢出限的要求。

⑤準(zhǔn)確度

取陰性樣品添加甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加量為10.008mg/kg；

取平均樣測(cè)定： m1=10.00g m2=10.00g

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 5.004mg/L

A1=0.0151、A2=0.0152

測(cè)定值與真實(shí)值之間的差值對(duì)真實(shí)值的百分?jǐn)?shù)

（|9.91-10.008|/10.008）×100%=0.98% <15%

按照標(biāo)準(zhǔn)GB 27404-2008附錄F.5準(zhǔn)確度的要求，故本項(xiàng)目能滿足標(biāo)準(zhǔn)的要求。

⑥提取效率

取甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液按照標(biāo)準(zhǔn)方法處理，收集蒸餾液，取10.0mL進(jìn)行比色反應(yīng)，上儀器讀吸光度；另取甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00mL，稀釋至10.0mL進(jìn)行比色反應(yīng)，上儀器讀吸光度，得：未經(jīng)蒸餾提取甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度:

A 0.1688 X 9.93mg/kg

經(jīng)蒸餾提取甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度：

A 0.0151 X 9.88mg/kg

經(jīng)蒸餾提取后的殘液，再次蒸餾提取甲醛測(cè)得吸光度：

A 0.0003 X 1.2mg/kg

在蒸餾提取處理過程中第一次收集了約99.5%，約0.5%的甲醛在第二次蒸餾提取處理中收集到。該方法提取效率本實(shí)驗(yàn)?zāi)軡M足要求。

三、結(jié)論

通過對(duì)以上技術(shù)要素的驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室可以確認(rèn)該檢測(cè)方法能達(dá)到預(yù)期使用的效果。由實(shí)驗(yàn)室技術(shù)負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)該檢測(cè)方法列入實(shí)驗(yàn)室的擴(kuò)項(xiàng)申請(qǐng)。