乳腺癌淋巴管密度的臨床意義

李光明 段百蕓

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。乳腺癌的淋巴結轉移發(fā)生較早,同時又是決定乳腺癌分期和選擇治療方案最關鍵的因素之一。新近發(fā)現(xiàn)的 LYVE-1被認為是目前特異性最強的淋巴管內皮細胞標記物之一,尤為引人注目。本研究采用免疫組化方法檢測 LYVE-1在乳腺腫瘤中的表達,計數(shù)淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD),并對 LVD與臨床病理參數(shù)作相關性分析,進一步探討淋巴管生成與乳腺癌淋巴結轉移的關系,為治療乳腺腫瘤及判斷預后提供新思路。

1 資料與方法

1.1 資料

收集 2006年 1月 ～2007年 10月手術切除并經病理檢查證實為原發(fā)性乳腺癌的石蠟包埋標本 100例,所有患者均為女性,術前未作過放、化療及內分泌治療?；颊吣挲g 30～79歲,中位年齡 51歲。參照 2003年 WHO乳腺癌病理診斷標準進行組織學分型,100例乳腺癌中浸潤性導管癌 70例,導管內癌 11例,混合型8例,小葉癌 6例,髓樣癌 3例,Paget病 2例;伴淋巴結轉移 48例,無轉移者 52例。參照 1997年 UICC腫瘤TMN標準進行臨床分期Ⅰ期 23例,Ⅱ期 49例,Ⅲ期28例。

1.2 方法

石蠟標本 4μm厚連續(xù)切片,采用 Envision二步法免疫組化染色,實驗步驟按試劑盒說明進行。所用一抗 LYVE-1為鼠抗人單克隆抗體,購自 R＆D公司,工作濃度為 1∶40,PV9000試劑盒,購自北京中杉金橋生物技術有限公司。以 PBS液代替一抗為陰性對照,已知陽性的結腸癌組織切片為陽性對照(隨試劑附帶)。

1.3 結果判讀

1.3.1 LYVE-1陽性的判讀 淋巴管內皮細胞胞質呈現(xiàn)棕褐色或黃褐色為 LYVE-1染色陽性表達。

1.3.2 LVD計數(shù) 參照 Schoppmann[1]的方法進行計數(shù),先于低倍鏡(×40倍)下掃描腫瘤周邊部 LYVE-1陽性淋巴管密集區(qū),即“熱區(qū)”。然后在高倍鏡(×200倍)視野下計數(shù) 5個熱區(qū)中 LYVE-1陽性淋巴管數(shù),取平均值,即為淋巴管密度。著棕黃色、不含紅細胞、無肌性或纖維性管壁、可有內皮細胞的不整形管腔視為LYVE-1陽性微淋巴管。管腔明顯管壁完整不論有無內皮細胞、管壁不完整但有內皮細胞,或成叢的內皮細胞形成多個迂回相連的管腔均計數(shù)為 1個微淋巴管。用盲法判定結果,每張切片由兩名高年資病理科醫(yī)師計數(shù),計數(shù)差 10%以上則重新計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計分析

結果用 SSPS11.5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理,LYVE-1所標記淋巴管的密度各組數(shù)據(jù)均用均數(shù) ±標準差±s)表示,各組及組間LVD比較及其與臨床病理參數(shù)的相關性,采用 t檢驗、Student-Newman-Keuls檢驗或方差分析。

2 結果

2.1 乳腺癌和乳腺纖維腺瘤組織中的 LVD

LYVE-1陽性產物為棕黃色顆粒,絕大多數(shù)表達在淋巴管內皮細胞上,且多位于腫瘤間質。乳腺癌癌旁組織淋巴管管壁呈棕褐色,數(shù)量多,管腔開放,形態(tài)不規(guī)則,管壁較薄。LYVE-1所標記的乳腺癌癌旁組織淋巴管的平均密度為(9.52±3.47),乳腺纖維瘤組織中淋巴管的平均密度為(1.31±1.02),兩者比較,P＜0.01,差異有統(tǒng)計學意義,說明乳腺惡性腫瘤中淋巴管的密度高于乳腺纖維腺瘤。

2.2 LVD與乳腺癌各臨床病理參數(shù)的關系

LVD與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、組織學類型、雌激素受體(estrogen receptor,ER)、孕激素受體(progesterone receptor,PR)和 c-erbB2無顯著相關(P＞0.05),但與淋巴結轉移、臨床病理分期顯著相關(P＜0.01)。特別是,乳腺癌淋巴結轉移患者 LVD顯著高于無淋巴結轉移者(P＜0.01),提示乳腺癌 LVD與淋巴結轉移有關,見表 1。

表1 乳腺癌LVD與臨床病理參數(shù)的相關性

3 討論

侵襲和轉移是惡性腫瘤的基本特征,也是腫瘤患者致死的主要原因之一。大量臨床及病理觀察表明,淋巴道轉移是腫瘤轉移的最常見及最基本的途徑;在腫瘤侵襲和轉移的過程中,腫瘤的血管和淋巴管生成是腫瘤生長和轉移的必要條件。但長期以來由于缺乏淋巴管內皮細胞特異性標記物,腫瘤淋巴管生成的研究相對滯后于腫瘤血管生成。近年來,LYVE-1淋巴管內皮細胞特異性標志物的發(fā)現(xiàn),研究人員利用淋巴管的特異性標志物來計算單位面積中淋巴管的數(shù)目,即腫瘤組織中的淋巴管密度(LVD),通過了解腫瘤內部和周圍是否有 LVD升高,及 LVD升高是否與腫瘤轉移有關,作為判斷腫瘤轉移與預后的 1個指標[1]。

LYVE-1,是 Banerji于 1999年發(fā)現(xiàn)的 CD44糖蛋白的同系化合物,其均勻分布于淋巴管內外腔面,具有從組織攝取透明質酸鹽并轉運至淋巴液的作用,是被發(fā)現(xiàn)的第 1個淋巴道透明質酸鹽受體,幾乎只特異性地表達在淋巴管內皮細胞上,而在血管內皮細胞上沒有表達[2]。后來研究表明 LYVE-1還表達于炎癥組織中巨噬細胞的 1個亞群和肝臟、脾臟血管竇內皮細胞,很快有學者通過研究提出這種現(xiàn)象可能與腫瘤細胞和白細胞歸巢有關[3]。LYVE-1的出現(xiàn),使簡單而準確地識別淋巴管成為可能,從而在技術上使我們得以研究淋巴管生成。現(xiàn)已有大量的研究以 LYVE-1為標記物證實腫瘤有淋巴管生成,且與腫瘤淋巴道轉移具有一定的相關性[4～6]。

本研究對 100例乳腺癌標本癌旁 LVD檢測表明,LVD與乳腺癌淋巴結轉移、臨床病理分期顯著相關:臨床病理分期越晚,發(fā)生淋巴結轉移,乳腺癌癌旁LVD越高。但與患者的年齡、腫瘤大小、ER、PR和 cerbB2無顯著相關。特別是,乳腺癌淋巴結轉移者LVD顯著高于無淋巴結轉移者,提示乳腺癌癌旁 LVD與淋巴結轉移有關。這與 Coskun等[7]的研究結果一致。表明:LVD是反映乳腺癌淋巴結轉移的 1個相關指標,對患者預后判斷有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌癌旁組織淋巴管數(shù)量多,管腔開放,形態(tài)不規(guī)則,管壁較薄;乳腺纖維腺瘤組織雖見毛細淋巴管,但管腔較小,數(shù)量較少;乳腺癌癌旁組織LVD顯著高于乳腺纖維腺瘤組織,與文獻報道一致。另外,腫瘤和瘤周淋巴管的形態(tài)、結構與正常組織中的淋巴管相比,還存在如下特點:在大塊癌巢附件處淋巴管因受擠壓而呈閉塞狀態(tài),其它部位的淋巴管大部分則呈擴張或極度擴張狀態(tài),管腔擴大,突向管腔內外的內皮質膜突起大多消失;內皮細胞的連接方式逐漸由復雜型向簡單型轉變,大量的連接開放便形成較為寬大的內皮細胞通道,癌細胞可經這些通道進入淋巴管;隨著腫瘤的生長這種功能性淋巴管增多,同時淋巴管管壁結構也發(fā)生變化,在有腫瘤細胞靠攏的地方會出現(xiàn)明顯的間隙和缺口,這有利于腫瘤細胞進入淋巴管腔。腫瘤周圍存在的擴張淋巴管,與淋巴結轉移密切相關[8]。腫瘤周圍的淋巴管,可增加腫瘤邊緣淋巴管的表面積,后者使腫瘤細胞入侵機會增加。淋巴管數(shù)目的增加以及淋巴管的擴張,從而導致LVD的增加,這可能是腫瘤細胞淋巴轉移的形態(tài)學基礎及淋巴管密度的增加的機理。增生或擴張的淋巴管為腫瘤細胞向淋巴結轉移提供了途徑,因此研究 LVD及其臨床意義,對明確淋巴管生成的機制具有一定的意義,可以為乳腺癌的預后判斷及抗淋巴結轉移治療提供理論和試驗依據(jù)。

[1] Nathanson SD,Zarbo RJ,Wachna DL,etal.Microvessels that p redict axillay lym ph nodemetastases in patients with breast cancer〔J〕.Arch Surg,2000,135(5):586.

[2] BanerjiS,Ni J,Wang SX,etal.LYVE-1,a new homologue of the CD44 glycoprotein,is a lymph-specific recep tor for hyaluronan〔J〕.JCell Biol,1999,144(4):789.

[3] Jackson DG,Prevo R,Clasper S,et al.LYVE-1,the lymphatic system and tumor lymphangiogenesis〔J〕.Trends Immunol,2001,22(6):317.

[4] Florez-Vargas A,Vargas SO,Debelenko LV,et al.Comparative analysis of D 2-40 and LYVE-1 immunostaining in lymphatic malformations〔J〕.Lymphology,2008,41(3):103.

[5] Chen W,Shen W,Chen M,et al.Study on the relationship between lym phatic vessel density and distal intramural spread of rectal cancer〔J〕.Eur Surg Res,2007,39(6):332.

[6] Kato T,Prevo R,Steers G,et al.A quantitative analysis of lymphatic vessels in human breast cancer,based on LYVE-1 immunoreacity〔J〕.Br JCancer,2005,93(10):1168.

[7] Coskun U,Akyürek N,Dursun A,etal.Peritumoral lymphatic microvessel density associated with tumor progression and poor prognosis in gastric carcinoma〔J〕.JSurg Res,2009,21(3):690.

[8] Padera TP,Kadambi A,di Tomaso E,etal.Lymphatic metastasis in the absence of functional intratumor lymphatic〔J〕.Science,2002,296(5574):1883.