PCNA及 PTEN在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義

余繁榮,胡玉紅,陳鳳云,盧北燕,楊 微

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,黑龍江 佳木斯 154003)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMS)是婦科常見病和多發(fā)病,其發(fā)病率有逐漸上升的趨勢,其雖是良性病變,但具有惡性病變的生物學(xué)行為。近年來,細(xì)胞的增殖與凋亡失衡學(xué)說已成為人們研究的熱點。PCN A是一種細(xì)胞周期增生核抗原,能客觀的反映細(xì)胞的增殖能力,是目前應(yīng)用比較廣泛的細(xì)胞增殖標(biāo)記之一。PTEN是一種抑癌基因,在細(xì)胞增殖周期中,主要參與細(xì)胞周期的調(diào)控,發(fā)揮抑制細(xì)胞過度增殖和促進(jìn)凋亡的作用。本實驗通過檢測 PCN A及 PTEN在EM S組織中的表達(dá),探討 EM S的發(fā)病機(jī)制及二者在 EM S發(fā)展中的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2007— 12～ 2009— 11在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院行手術(shù)治療的 EMS患者的異位內(nèi)膜48例,EM S患者的在位內(nèi)膜36例,通過開腹手術(shù)取得異位病灶組織及其在位內(nèi)膜。取正常的子宮內(nèi)膜組織 30例作為對照內(nèi)膜。患者年齡 28～ 55歲,平均 (32.8±5.6)歲 ,月經(jīng)周期規(guī)律,無其他內(nèi)科疾病,術(shù)前半年均未使用激素類藥物治療。所有診斷均經(jīng)術(shù)后病理證實,內(nèi)膜分期依據(jù)月經(jīng)周期的時間結(jié)合病理切片確定。

1.2 試劑

鼠抗人 PCNA單克隆抗體、兔抗人 PTEN多克隆抗體、S-P試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 方法

采用免疫組化染色(SP法):標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定,石蠟包埋,5μm厚連續(xù)切片,實驗步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

光學(xué)顯微鏡下 PCN A和 PTEN的染色陽性信號均為細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒,在10× 40高倍視野下,隨機(jī)選10個視野,依陽性細(xì)胞數(shù)占觀察同類細(xì)胞數(shù)的百分比分為4級。無陽性細(xì)胞為陰性(-),陽性細(xì)胞數(shù)≤50%為弱陽性(+ ),陽性細(xì)胞數(shù)＞ 50%為陽性(++ ),陽性細(xì)胞數(shù)≥75%為強(qiáng)陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

SPSS13統(tǒng)計軟件分析 ,采用 i2檢驗、Fisher’s精確檢驗及 Spearman等級相關(guān)分析,P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCN A與 PTEN在異位子宮內(nèi)膜與正常內(nèi)膜中的表達(dá)

見表 1。PCNA、PTEN主要表達(dá)分別定位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的胞核與胞漿中。在子宮內(nèi)膜異位癥的異位內(nèi)膜,在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜的陽性表達(dá)依次減弱,分別為93.8%,63.9%,26.7%,兩兩之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P ＜0.05)。PTEN在異位內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率明顯降低為10.4%,在正常內(nèi)膜中的陽性表達(dá)率為76.7%,在位內(nèi)膜中的陽性表達(dá)介于兩者之間為47.2%,有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。

表1 PCNA與 PTEN在異位子宮內(nèi)膜與對照子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

2.2 PCNA與 PTEN子宮內(nèi)膜中增生期及分泌期的表達(dá)

見表2。PCN A在子宮內(nèi)膜的增生期的表達(dá)顯著高于分泌期的表達(dá),而 PTEN在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)分泌期高于增生期,兩者在 EMS患者的異位內(nèi)膜的增生期及分泌期中的表達(dá)均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞ 0.05)而在 EM S患者的在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜的增生期與分泌期中的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜ 0.05)。

表2 PCN A與 PTEN子宮內(nèi)膜中增生期及分泌期的表達(dá)

3 討論

細(xì)胞內(nèi)的增殖和凋亡過程幾乎涉及所有的病理生理過程,二者的失衡可導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖。EM S的異位內(nèi)膜的持續(xù)存在不僅與其內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡能力降低有關(guān),也與異位細(xì)胞增殖能力改變有關(guān)[1]。PCNA是 DNA復(fù)制時所必需的調(diào)節(jié)蛋白,其表達(dá)在 G1期開始增高,S期達(dá)到高峰,G2期和 M期明顯下降[2]。PCNA的陽性程度可直接反應(yīng)出 DNA復(fù)制的活躍程度,反映了細(xì)胞的增殖情況。本研究發(fā)現(xiàn),EMS在位內(nèi)膜 PCNA表達(dá)百分?jǐn)?shù)明顯高于正常內(nèi)膜,而異位內(nèi)膜PCN A表達(dá)百分?jǐn)?shù)又高于在位內(nèi)膜。說明 EM S的發(fā)生與細(xì)胞增殖活性增強(qiáng)有關(guān)。本實驗的結(jié)果與 Nakayama等[3]研究一致,顯示:EM S異位內(nèi)膜中 PCN A陽性細(xì)胞數(shù)量明顯高于在位內(nèi)膜。PCN A在 EMS中的異位內(nèi)膜的增生期和分泌期的陽性表達(dá)率分別為96.4%,90.0%,其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),在在位內(nèi)膜的增生期與分泌期的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (i2= 5.063,P＞ 0.05),PCN A在正常子宮內(nèi)膜組織中的增生期和分泌期的陽性表達(dá)率分別為44.4%,0%,其差別有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.01),此結(jié)果與 Fujishita A等[4]的研究相一致。表明 EM S患者內(nèi)膜細(xì)胞增殖數(shù)量增加,這些增殖能力升高的內(nèi)膜有利于在異位灶種植、生長。研究表明 PTEN通過作用于 PKB信號傳導(dǎo)通路的中心環(huán)節(jié),使細(xì)胞周期阻斷在 G1期或促使細(xì)胞凋亡[5],從而影響細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移。本試驗中 PTEN在 EM S異位內(nèi)膜的陽性表達(dá)率低為10.4%,而在正常內(nèi)膜中的表達(dá)較高為76.7%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05),本試驗結(jié)果與 Mutter等[6]試驗結(jié)果大致相同。PTEN在 EM S的異位內(nèi)膜的增生期與分泌期的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞ 0.05),但在在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜中的增生期與分泌期的表達(dá)均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05,P ＜0.05)。本研究結(jié)果同時顯示,PCN A與PTEN之間存在負(fù)相關(guān),提示二者之間可能以負(fù)反饋調(diào)節(jié)方式參與 EM S的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述,EM S中的 PCNA的上調(diào),使異位內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng) ,而 PTEN在 EM S中的缺失,促凋亡能力減弱從而使細(xì)胞增生和凋亡之間的平衡破壞,導(dǎo)致這些細(xì)胞的種植、生長,促發(fā) EMS。通過檢測 EM S患者中的 PCNA及PTEN的表達(dá)水平,為其診斷、治療及其預(yù)后提供一種新的思維方法。

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