APBD致膽管疾病患兒膽管組織中survivin、Ki-67的表達(dá)變化及意義

韓新峰

(邯鄲市中心醫(yī)院,河北邯鄲 056000)

先天性膽管擴(kuò)張癥(CBD)由Vater在1723年首次報(bào)道。國(guó)內(nèi)外報(bào)道和研究表明本病有癌變傾向。目前認(rèn)為膽胰管合流異常(APBD)是CBD的病因[1]。2002～2008年,我們對(duì) 37例 APBD所致CBD患兒的肝外膽管黏膜中Ki-67、survivin進(jìn)行檢測(cè),探討APBD所致CBD患兒膽管癌變機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 37例APBD所致CBD患兒中男11例,女 26例;年齡 4個(gè)月 ～16歲,平均 8.7歲。病史5 d～11 a。均行術(shù)中膽管造影檢查后行手術(shù)治療(行膽總管囊腫切除、膽囊切除、肝總管空腸Roux-en-Y吻合術(shù)),其中膽管囊狀擴(kuò)張25例、梭狀擴(kuò)張 12例。全組無(wú)死亡病例。

1.2 Ki-67、survivin標(biāo)記指數(shù)(LI)的檢算方法 將標(biāo)本(膽管、膽囊)用10%甲醛固定,石蠟包埋。4～6μm厚連續(xù)切片。另取膽腸吻合時(shí)正常小腸黏膜為正常對(duì)照。所有標(biāo)本行免疫組織化學(xué) ABC法染色,按試劑盒說(shuō)明書操作。PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。細(xì)胞核呈黃色或棕褐色為 Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有黃色或棕黃色顆粒者為survivin陽(yáng)性細(xì)胞。采用盲法標(biāo)記染色良好區(qū)域,在 400倍顯微鏡下任選 10個(gè)高倍視野,各計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞。Ki-67 LI、survivin LI=陽(yáng)性細(xì)胞/計(jì)數(shù)細(xì)胞×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用q檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CBD患兒膽管黏膜中Ki-67 LI為37.43%± 16.58%、膽囊黏膜中為19.86%±10.49%,均顯著高于小腸黏膜的2.85%±1.28%(P＜0.05)。囊狀膽管擴(kuò)張者膽管、膽囊黏膜的 Ki-67 LI分別為45.6%±20.43%、14.17%±6.76%,梭狀擴(kuò)張者分別為21.67%±10.57%、25.8%±12.07%;囊狀膽管擴(kuò)張者膽管黏膜中Ki-67 LI高于梭狀擴(kuò)張者(P＜0.05),膽囊黏膜中Ki-67 LI囊狀擴(kuò)張與梭狀擴(kuò)張者近似(P＞0.05)。

CBD患兒膽管、膽囊、小腸黏膜中survivin LI分別為9.64%±4.13%、7.54%±3.21%、6.29%± 2.36%(P均 ＞0.05)。膽管囊狀擴(kuò)張者膽管、膽囊黏膜的survivin LI分別為9.64%±3.87%、10.41% ±3.56%,梭狀擴(kuò)張者分別為 11.42%±5.48%、6.29%±2.36%(P均＞0.05)。

3 討論

APBD是指解剖學(xué)上膽管和胰管在十二脂腸壁外提前合流,共同通道過(guò)長(zhǎng)致使胰液和膽汁過(guò)早混合而引起的胰酶在壓力更低的膽管內(nèi)被激活,在各種胰酶主要是磷脂酶 A2的作用下造成膽管壁的損傷。膽管損傷包括在形態(tài)學(xué)上的變化和膽管組織學(xué)的變化。形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為膽管形狀的變化,膽管擴(kuò)張。膽管黏膜的反復(fù)破壞和修復(fù),在病理學(xué)表現(xiàn)為膽管組織的壞死、增生、化生和癌變[2～5]。Ki-67抗原是在增殖細(xì)胞中表達(dá)的一種核抗原,也是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志性基因,存在于細(xì)胞周期中除 G0期以外的所有階段。它開(kāi)始表達(dá)于細(xì)胞周期的G1期,在 S期及G2期表達(dá)增加,至 M期達(dá)高峰,在分裂晚期很快消失。由于其半衰期短,脫離細(xì)胞周期后迅速降解,故已成為目前檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性最可靠的指標(biāo)[6,7]。本組研究結(jié)果顯示,CBD患兒的膽管黏膜Ki-67 LI明顯高于與正常小腸黏膜,囊狀擴(kuò)張者膽管黏膜中Ki-67 LI明顯高于梭狀擴(kuò)張者,提示CBD患兒的膽管黏膜處于高增殖狀態(tài),囊狀擴(kuò)張者的膽管黏膜增殖程度更高。說(shuō)明囊狀擴(kuò)張患者膽管擴(kuò)張癥癌變率高于梭狀擴(kuò)張者,臨床上應(yīng)更加關(guān)注 CBD囊性病變患者的早期治療。

survivin是細(xì)胞抑制凋亡蛋白(IAP)家族成員,特異性表達(dá)于人和鼠的胚胎抗凋亡蛋白,其基因位于 17p25,蛋白中含有一個(gè)桿狀病毒抑制凋亡蛋白重復(fù)序列BIR分子,該分子的trp67、pro33和cys84殘基可與Caspase3和Caspase7結(jié)合,直接抑制Caspase活性,在細(xì)胞凋亡中起重要作用。survivin在胚胎組織和多種腫瘤組織中呈高表達(dá),具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分裂和抗凋亡細(xì)胞作用,促進(jìn)細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化[8～10]。本研究結(jié)果顯示,survivin在CBD患兒膽管、膽囊、小腸黏膜中的表達(dá)近似,膽管囊狀擴(kuò)張與梭狀擴(kuò)張者survivin LI亦無(wú)顯著性差異(P均＞0.05),證實(shí)APBD導(dǎo)致患兒肝外膽管組織存在高增殖現(xiàn)象,有明顯的癌變傾向。survivin未明顯表達(dá)可能與本組病例年齡低和病變分化程度有關(guān),本組無(wú)癌變病例,所以survivin在各組間表達(dá)無(wú)顯著性差異。本研究結(jié)果說(shuō)明臨床治療APBD導(dǎo)致CBD的原則應(yīng)為早發(fā)現(xiàn)、早治療和完整切除肝外膽管組織。

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