副溶血弧菌的快速鑒定檢測(cè)方法研究進(jìn)展

楊芳 李秀娟 徐保紅

副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus,VP)是一種革蘭陰性嗜鹽桿菌,是引起食源性疾病的重要病原之一。該菌主要分布于沿岸海水、海河交界處及海產(chǎn)品中,是沿海地區(qū)引起食物中毒的重要病原菌。它在海產(chǎn)品上的帶菌率高達(dá)45.7%[1],其生長(zhǎng)速度是一般細(xì)菌(如大腸桿菌、沙門氏菌等)的 2倍,因而更易于引起食物中毒。常規(guī)的 VP的檢測(cè)方法包括增菌培養(yǎng)、選擇性培養(yǎng)、生化試驗(yàn)和血清學(xué)反應(yīng)等過程,耗時(shí)長(zhǎng)、操作繁瑣、檢出率低,不適應(yīng)實(shí)際檢驗(yàn)工作的需要。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,一些快速檢測(cè)方法以其特異性強(qiáng)、敏感性高、分辨率高、操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、耗時(shí)短的優(yōu)點(diǎn)逐漸取代常規(guī)的檢測(cè)方法,在病原菌檢測(cè)方面有著廣泛的應(yīng)用前景。本文就VP的快速檢測(cè)方法綜述如下。

1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)

由于 PCR技術(shù)具有敏感、快速、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn),在微生物的鑒定檢測(cè)方面展現(xiàn)了巨大的潛力。以常規(guī)的分離培養(yǎng)方法檢測(cè) VP耗時(shí)長(zhǎng),需要 4～5 d,而采用 PCR法進(jìn)行檢測(cè),只需要 10 h,不僅節(jié)省了時(shí)間,且可提高檢測(cè)通量,一次可檢測(cè)多達(dá) 96份樣品。Kim等[2]建立了以 toxR基因?yàn)榘谢虿捎?PCR方法檢測(cè)了 373株 VP和 290株其他菌株,結(jié)果表明373株VP都攜帶toxR基因而非 VP菌株結(jié)果均為陰性。Venkateswaran等[3]針對(duì) VP的 gyrB基因進(jìn)行 PCR引物設(shè)計(jì),擴(kuò)增片段大小為 285 bp,運(yùn)用該 PCR方法檢測(cè)來自環(huán)境、食品和臨床樣品中的 VP,共 117菌株,結(jié)果表明所有的菌株都能擴(kuò)增出258bp的基因片段。除了 toxR、gyrB基因外,也可采用 tl、tdh、tlh、trh、Fla基因和 pR72H片段等[4-8]來檢測(cè) VP。

1.1 多重 PCR技術(shù) Bej等[9]針對(duì) VP的 tlh基因、tdh基因、trh基因用多重 PCR方法檢測(cè)貝類中的 VP。檢測(cè)結(jié)果表明：從臨床、海產(chǎn)品、環(huán)境和牡蠣中分離得到的 111份 VP菌株,用該方法對(duì)所有的 VP菌株全部擴(kuò)增出tlh基因,60份 VP菌株擴(kuò)增出 tdh基因,43份VP菌株擴(kuò)增出trh基因。該方法的靈敏度較高,10 g牡蠣組織增菌肉湯的最低檢測(cè)量為 10～100 cfu[10]。吳彩云等[11]通過對(duì)反應(yīng)體系中各組分含量的優(yōu)化及循環(huán)參數(shù)的摸索,確立了同時(shí)檢測(cè) t1和tdh基因的多重 PCR技術(shù),結(jié)果與常規(guī) PCR的一致。該法不僅具有常規(guī) PCR的優(yōu)點(diǎn),而且還能節(jié)省時(shí)間及 Taq酶、dNTP等材料,還可盡量減少或避免因操作步驟過多因污染所帶來的假陽(yáng)性等問題[12]。

1.2 實(shí)時(shí) PCR方法 實(shí)時(shí) PCR由于擴(kuò)增與檢測(cè)在封閉單管內(nèi)進(jìn)行,因此能夠避免常規(guī)PCR方法易污染的缺點(diǎn),并且實(shí)現(xiàn)了 PCR從定性到定量的飛躍,具有很好的應(yīng)用前景。Kaufman等[13]針對(duì)tlh基因建立了檢測(cè)VP的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法,結(jié)果表明該方法可在 1 h之內(nèi)定量檢測(cè)出牡蠣中的VP。Takahashi等[14]針對(duì) VP的 toxR基因也建立了實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法檢測(cè)海水、貝類中的 VP,最低檢出限為 36 cells/m l。Blackstone等[15]建立的一種基于熒光探針的檢測(cè) VP的(針對(duì)其 tdh基因)實(shí)時(shí) PCR方法。結(jié)果表明,只有攜帶 tdh基因的 VP能產(chǎn)生熒光信號(hào),并且與攜帶tdh基因的陰性弧菌或者其他細(xì)菌無交叉反應(yīng)。該方法檢測(cè) VP的tdh基因特異性強(qiáng)(僅檢測(cè)攜帶tdh基因的陽(yáng)性 VP),靈敏度高(1 cfu/PCR反應(yīng)體系),快速(整個(gè)實(shí)驗(yàn) 24h內(nèi)就可以完成,檢測(cè)不到 1h就可完成)。Ward等[16]建立了基于TaqMan熒光探針的多重實(shí)時(shí) PCR方法檢測(cè)貝類中 VP的 tlh、tdh、trh和 ORF8基因,結(jié)果表明該方法可用于檢測(cè)基因組 DNA和菌純培養(yǎng)物,其靈敏度分別為 200 pg和1×104cfu/m。

1.3 MPN-PCR方法 MPN法(most probable number,最可能數(shù)法)采用多管發(fā)酵法,通過幾率計(jì)算,測(cè)定樣品中細(xì)菌的最可能數(shù),達(dá)到定量的目的。MPN法與 PCR法的結(jié)合可達(dá)到定量和提高檢出限的目的。欒曉燕等[17]根據(jù) VP的 tdh、trh、tlh基因序列設(shè)計(jì)了 3對(duì)特異性引物,通過增菌培養(yǎng)、樣品處理、PCR擴(kuò)增,并且結(jié)合了MPN法,實(shí)現(xiàn)了對(duì)水產(chǎn)品中的 VP快速定量檢測(cè)。該方法的最低檢出限為12 cfu/ml比直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增的最低檢出限(1.22×103cfu/m l)提高了 100倍,對(duì) tlh、tdh、trh基因的特異性強(qiáng),整個(gè)檢測(cè)過程不超過 16 h。Blanco-Abad等[18]分別用 A/P(Absence-Presence)-PCR和 MPN-PCR法進(jìn)行鑒定 VP,比較了這兩種方法的高效性和靈敏性,結(jié)果證明MPN-PCR法優(yōu)于 A/P-PCR法,可實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確檢測(cè) VP。

2 UPPCR-SSCP

通用引物 PCR(UPPCR)和單鏈構(gòu)型多態(tài)性(SSCP)相結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)具有很高的靈敏度和特異性,可以將病原菌分辨到種。16s RNA基因因保守性高,又有一定的隨科、屬、種不同而有不同程度差異的變異區(qū),被認(rèn)為是分類及臨床檢測(cè)鑒定的最有用的靶基因。以細(xì)菌 16s-RNA基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,對(duì)其可變區(qū)進(jìn)行 PCR擴(kuò)增后,結(jié)合特異性探針雜交、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(RFLP)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)或直接測(cè)序等手段就可以把病原菌定位至種。彭宣憲等[19]以 16s RNA基因?yàn)槟康钠?采用通用引物 PCR配合 SSCP分析(UPPCR-SSCP技術(shù)),對(duì)弧菌科弧菌屬中的 VP、溶藻酸弧菌等進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn) SSCP技術(shù)能較好地鑒別細(xì)菌的不同種,但對(duì)同種不同株細(xì)菌的區(qū)分較困難。結(jié)合對(duì)不同科屬種細(xì)菌的 UPPCR的結(jié)果,可以認(rèn)為種間差異的 SSCP圖譜與親緣關(guān)系似乎有一定聯(lián)系,即親緣關(guān)系越近則差異越小;反之,則差異越大。總之,若建立有關(guān)病原菌的 SSCP電泳圖譜,可用于病菌的快速檢測(cè)。

3 DNA雜交

Mccarthy等[20]建立了兩個(gè)無輻射探針堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的探針和地高辛(DIG)標(biāo)記的探針檢測(cè) VP的 tlh基因。對(duì)26株 VP、88株其他弧菌和 10株非弧菌物種用 AP標(biāo)記探針進(jìn)行特異性實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明只有 26株 VP弧菌與 AP探針雜交,種屬特異性強(qiáng)。對(duì)從牡蠣中分離的 206株疑似VP的檢測(cè)結(jié)果顯示 AP標(biāo)記探針和API-20E鑒定的結(jié)果一致性為 97%。對(duì) 584株疑似 VP的檢測(cè)結(jié)果顯示AP標(biāo)記探針和DIG標(biāo)記探針檢測(cè)結(jié)果一致性達(dá) 98%?；?AP和 DIG標(biāo)記探針的方法,Gooch等[21]通過AP探針(Direct-VPAP)和 DIG探針(Direct-VPDig)以及 MPN-VPAP3種方法對(duì)不同季節(jié)和儲(chǔ)存條件下的牡蠣中VP進(jìn)行定量檢測(cè),結(jié)果經(jīng)回歸分析顯示 MPN-VPAP方法檢測(cè)VP與 Direct-VPAP、Direct-VPDig方法檢測(cè) VP的效果是一致的,但靈敏度不同。對(duì) 0.1 g的樣品進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果表明 MPNPCR法的靈敏度為 3MPN/g,而其他兩種方法的靈敏度為10 cfu/g,因此MPN-PCR法在 VP低濃度時(shí)表現(xiàn)出高靈敏性。而在 VP含量較高時(shí)利用 Direct-VPAP、Direct-VPDig方法進(jìn)行檢測(cè),則更快速、經(jīng)濟(jì)和省力。Banerjee等[22]建立了一種 DNA探針快速檢測(cè) VP的方法。在hydrophobic grid membrane filters(HGMF)方法中,將固定在 HGMF上 VP-DNA模板與 DIG標(biāo)記的 tdh基因探針進(jìn)行雜交后檢測(cè)VP。盡管經(jīng)過富集培養(yǎng)后可以在 1 d之內(nèi)檢測(cè)出VP,但是由于該方法引入了 DNA分離、DIG標(biāo)記探針的合成、VP引物的設(shè)計(jì)和克隆雜交,使其操作步驟復(fù)雜化。

4 LAMP檢測(cè)方法

LAMP(核酸擴(kuò)增-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù))是一種新穎的檢測(cè)VP的方法。LAMP技術(shù)依賴于能夠識(shí)別靶DNA上6個(gè)特定區(qū)域的 4條特異性引物和一種具有鏈置換活性的 DNA聚合酶在恒溫條件下對(duì)核酸進(jìn)行擴(kuò)增,具有高特異性、快速簡(jiǎn)便、高效性等特點(diǎn)。徐芊等[23]針對(duì)VP的tlh基因設(shè)計(jì)四條特異性引物進(jìn)行 LAMP擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化,反應(yīng)時(shí)間為 1 h,反應(yīng)溫度為 60℃。結(jié)果表明 LAMP檢測(cè) VP特異性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本低,有望發(fā)展成為快速檢測(cè)VP的有效手段。

5 Transcrip tion-reverse transcrip tion concerted(TRC)方法

TRC是用于檢測(cè)mRNA的一種新研制的方法,它是將目標(biāo)RNA序列反轉(zhuǎn)錄成 cDNA,經(jīng)過dsDNA轉(zhuǎn)錄成 RNA后插入活性熒光 DNA探針(INAF DNA探針),通過實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)器在一恒定的溫度下定量檢測(cè) TRC反應(yīng)中的熒光強(qiáng)度,然后根據(jù)反應(yīng)時(shí)間和熒光強(qiáng)度比率作圖。在 tdh-TRC與trh-TRC方法中反應(yīng) 30m in后,樣品的熒光強(qiáng)度比率≥1.2認(rèn)為是陽(yáng)性,＜1.2的為陰性。Masuda等[24]新建立了快速、靈敏的 TRC方法定量檢測(cè) VP中 tdh和trh基因的 mRNA轉(zhuǎn)錄。針對(duì)提取來自 24株VP,31株其他弧菌屬,8株非弧菌屬的 RNA檢測(cè)結(jié)果表明：用TRC方法分別檢測(cè)tdh和 trh的 mRNA的結(jié)果與用 DNA克隆技術(shù)檢測(cè)結(jié)果一致,靈敏度為 100 cfu。但 tdh-TRC只檢測(cè) tdh mRNA;菌株攜帶任何 tdh的不同基因(tdh1-tdh5)都呈現(xiàn)陽(yáng)性的結(jié)果而攜帶 trh基因(trh1或 trh2)都呈陰性。同理,trh-TRC方法只對(duì)攜帶trh基因的VP表現(xiàn)出陽(yáng)性結(jié)果。因此,TRC方法檢測(cè) VP的致病基因具有簡(jiǎn)單、特異、快速的特點(diǎn),同時(shí) TRC原理也可用于檢測(cè)其他致病菌。

6 免疫學(xué)方法

6.1 間接免疫熒光抗體方法 樊景鳳等[25]建立了 VP的間接免疫熒光抗體檢測(cè)方法,該方法將細(xì)菌固定于載玻片上,滴加免疫血清,37℃孵育 30 m in;用 PBST(含 0.5%Tween-20的0.01mol/L,pH=7.4的 PBS)洗滌 3次,滴加 FITC標(biāo)記的羊抗兔 LgG,37℃孵育 30m in;用 PBST洗滌 3次,干燥后滴加 PBS緩沖的甘油(PBS∶甘油 =1∶9)1滴,加蓋玻片,在其上加 1滴無自發(fā)熒光的香柏油,用落射熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。交叉反應(yīng)和阻斷試驗(yàn)證明該方法的特異性較高,并且該方法具有快速、簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)適用于現(xiàn)場(chǎng)的應(yīng)用推廣。

6.2 間接酶聯(lián)免疫吸附法 竇勇等[26]建立了用于 VP的間接酶聯(lián)免疫吸附法。該方法標(biāo)準(zhǔn)化后進(jìn)行測(cè)定,交叉實(shí)驗(yàn)與阻斷實(shí)驗(yàn)表明其具有較高的特異性,并且檢測(cè)時(shí)間短,準(zhǔn)確度高,可快速檢測(cè) VP。王軍等[27]用 0.5×10-3(V/V)甲醛、30℃作用8 h滅活病原菌制成菌苗。用該菌苗免疫新西蘭兔獲得特異性抗血清,以辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG為標(biāo)記第二抗體,對(duì) VP進(jìn)行間接 ELISA快速檢測(cè),其最低檢測(cè)極限為 5×104cfu/cm3。現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)即將大黃魚肝臟粗研磨后加入 5倍體積的無菌 0.9%氯化鈉溶液繼續(xù)研磨,取上清液檢測(cè);水樣直接檢測(cè)。結(jié)果表明間接 ELISA檢測(cè)法可用于 VP的快速檢測(cè)。

6.3 斑點(diǎn) ELISA法 斑點(diǎn) ELISA法是一種樣品處理上的創(chuàng)新方法,針對(duì) VP產(chǎn)生 TDH和 TRH的特點(diǎn),將菌株培養(yǎng)液的上清點(diǎn)樣于硝基纖維膜上,干燥后以 BSA封閉,再在點(diǎn)樣處加TDH和 TRH抗體,過夜后與第二抗體反應(yīng),最后加底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)指示結(jié)果。很顯然這種方法更適合處理大量樣本。臧紅梅等[28]用斑點(diǎn)ELISA技術(shù)檢測(cè)VP,通過交叉實(shí)驗(yàn)與阻斷實(shí)驗(yàn)表明該方法的特異性好,重復(fù)性好,批內(nèi)和批間結(jié)果相同,無差異。通過免疫血清敏感性試驗(yàn)結(jié)果得知,當(dāng) VP菌量低于104cfu/ml時(shí),不易檢出。斑點(diǎn)ELISA法雖然特異性強(qiáng),但靈敏度不高,還有待進(jìn)一步提高其靈敏度。提高靈敏度的方法有：AB(avidin biotin system)-ELISA法;PCR-ELISA法;斑點(diǎn)免疫酶結(jié)合試驗(yàn)(DIA)等。

7 熒光分析法

VP具有代謝阿拉伯糖的能力,在阿拉伯糖-葡萄糖醛酸鹽培養(yǎng)基(AG)培養(yǎng)基上經(jīng)過選擇性增菌后的VP具有較高胰蛋白酶樣活性,而其他菌株的胰蛋白酶活性則可忽略,并且VP胰蛋白酶活性不受其他菌株濃度的影響,僅與增菌前VP的濃度有關(guān)。高旗利等[29]用此方法檢測(cè)水產(chǎn)品中是否污染有 VP。結(jié)果表明該方法靈敏度為20個(gè)/g,只需 8h就可完成水產(chǎn)品中VP的初篩檢驗(yàn)。操作簡(jiǎn)便、靈敏度較高,適于快速檢測(cè)需要。

8 傳感器技術(shù)

8.1 電化學(xué)技術(shù) 抗原-抗體結(jié)合前后可導(dǎo)致多種信號(hào)的改變,如：重量、光學(xué)、熱學(xué)、電化學(xué)等,電化學(xué)免疫傳感器可通過感應(yīng)抗原-抗體結(jié)合前后的電化學(xué)變化來實(shí)現(xiàn)對(duì)病原微生物的定性和定量檢測(cè)。Zhao等[30]將HPR標(biāo)記VP抗體摻于瓊脂糖和納米金中并修飾于絲網(wǎng)印刷電極的表面,制備一次性電化學(xué)免疫傳感器來快速檢測(cè)VP。然后采用循環(huán)伏安法表征免疫電極和檢測(cè)酶促反應(yīng),根據(jù)免疫復(fù)合物屏蔽 HRP活性中心引起還原電流的變化來定量檢測(cè)VP。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下,免疫電極的線性檢測(cè)范圍為 105～106cfu/m l,檢出限為 7.4×104cfu/ml(S/N=3)。該免疫電極具有較好的特異性、重現(xiàn)性(RSD＜6%)、穩(wěn)定性(1周后電流響應(yīng)為初始值的 91%)和準(zhǔn)確性(與 ELISA符合率為 97.5%),可用于 VP的快速篩選。

8.2 電子鼻技術(shù) 微生物在生長(zhǎng)代謝過程中可產(chǎn)生特有的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物,具有微生物種的特異性,而電子鼻技術(shù)是檢測(cè)揮發(fā)性成分的人工嗅覺裝置,針對(duì)微生物的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的檢測(cè)。胡惠平等[31]利用電子鼻技術(shù)對(duì)從從南美白對(duì)蝦中分離的一株VP進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)采用具有 18個(gè)金屬氧化物傳感器的 Fox 4000電子鼻對(duì) VP經(jīng)純培養(yǎng)后產(chǎn)生的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)用空白 3.5%氯化鈉TSB培養(yǎng)液作為對(duì)照。將電子鼻獲得的樣品數(shù)據(jù)用主成分分析(PCA)、判別因子分析(DFA)、單類成分判別分析(SMICA)等多元統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,VP經(jīng)純培養(yǎng)后產(chǎn)生了明顯不同于空白培養(yǎng)液氣味的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物?？梢?電子鼻可應(yīng)用于純培養(yǎng)微生物的檢測(cè),實(shí)現(xiàn)對(duì)VP無損、快速檢測(cè)。

9 VP快速測(cè)試片

許如蘇等[32]以法國(guó)進(jìn)口弧菌顯色培養(yǎng)基為主要原料,運(yùn)用微生物測(cè)試片專有技術(shù),制成一次性 VP快速檢測(cè)片。并對(duì)其檢測(cè)性能進(jìn)行測(cè)試研究。結(jié)果表明該測(cè)試片對(duì)純菌的檢測(cè)靈敏度達(dá)到 8 cfu/m l,與霍亂弧菌、溶藻弧菌等 17種非目的菌無交叉反應(yīng);重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)偏差低 8%;24h可完成檢驗(yàn)工作。應(yīng)用該測(cè)試片檢測(cè)人工染菌樣品和自然樣品,檢測(cè)結(jié)果與GB或SN標(biāo)準(zhǔn)方法一致。因此,VP快速測(cè)試片具有敏感度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),可用于食品和水產(chǎn)品中 VP的快速初篩。

10 基因芯片(Gene Chip)

近年來基因芯片技術(shù)在微生物檢測(cè)領(lǐng)域的發(fā)展將會(huì)充分發(fā)揮準(zhǔn)確及高通量并行檢測(cè)的優(yōu)越性。以基因微陣列為基礎(chǔ)的芯片,可大大提高工作效率,減少人為誤差,實(shí)現(xiàn)微生物的自動(dòng)化檢驗(yàn)。李君文等[33]利用 16SrRNA基因作為檢測(cè)的靶基因,在其恒定區(qū)設(shè)計(jì) PCR引物,在可變區(qū)設(shè)計(jì)檢測(cè)探針：用1對(duì)PCR引物就可以將所有細(xì)菌的相應(yīng)基因片段全部擴(kuò)增出來(擴(kuò)增時(shí) 1條PCR引物采用熒光標(biāo)記),再用每種細(xì)菌的特異性探針陣列與標(biāo)記的靶片段進(jìn)行雜交反應(yīng),雜交后用專用設(shè)備讀取分析熒光信號(hào),可以定性和半定量地檢出致病菌。用這種芯片可以特異地檢出水中 VP、軍團(tuán)桿菌、李斯特菌等。結(jié)果表明基因芯片技術(shù)檢測(cè)水中常見致病菌可以實(shí)現(xiàn)高通量、并行檢測(cè),一次實(shí)驗(yàn)即可得出全部結(jié)果;特異性強(qiáng)、敏感性高、操作簡(jiǎn)便、快速(檢測(cè)時(shí)間約 4h)。

以上總結(jié)了 VP各種快速檢測(cè)方法,但綜合來看,每種方法都有其優(yōu)缺點(diǎn),在定性和精確定量方面難以兼顧。微生物鑒定實(shí)驗(yàn)需要積累和吸取實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),技術(shù)含量高,但是隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展,新的技術(shù)、儀器設(shè)備不斷出現(xiàn),如基因芯片技術(shù);檢測(cè)技術(shù)也不斷完善,特別是各種分子技術(shù)的融合與創(chuàng)新,如 PCR、DNA雜交、ELISA三大現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的聯(lián)用,為VP的快速檢測(cè)提供了強(qiáng)大的工具,必將會(huì)實(shí)現(xiàn)VP快速、準(zhǔn)確、靈敏、特異、大規(guī)模的檢測(cè)。

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