結(jié)直腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的臨床意義*

于 游,王 燦,彭 力,吳 強(qiáng),韓繼明,李雅嘉

(重慶市急救醫(yī)療中心:1.普外科;2.病理科 400014)

結(jié)直腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的臨床意義*

于 游1,王 燦1,彭 力2,吳 強(qiáng)1,韓繼明1,李雅嘉1

(重慶市急救醫(yī)療中心:1.普外科;2.病理科 400014)

目的探討結(jié)直腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與臨床病理參數(shù)的關(guān)系及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)方法,用細(xì)胞角蛋白CK20及CEA檢測(cè)53例常規(guī)病理檢查無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌周圍淋巴結(jié)509枚。結(jié)果53例結(jié)直腸癌患者中21例有淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移(39.6%)。微轉(zhuǎn)移與浸潤(rùn)深度有關(guān),深層組織的微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率高于淺層,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),PT3、PT4患者陽(yáng)性率明顯高于PT1、PT2患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。低分化癌微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率明顯高于高分化癌,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論對(duì)常規(guī)檢查淋巴結(jié)為陰性的結(jié)直腸癌,微轉(zhuǎn)移檢測(cè)可能對(duì)準(zhǔn)確地確定臨床分期、指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后有積極臨床意義。

結(jié)直腸腫瘤;淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移;免疫組化;腫瘤分期

周圍淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況直接關(guān)系到腫瘤的病理分期、預(yù)后判斷和術(shù)后輔助治療方案的選擇。結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是臨床最為重要的診斷治療參考指標(biāo)。然而傳統(tǒng)組織學(xué)檢查對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,尤其是微轉(zhuǎn)移的診斷有很大的局限性。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷的遺漏直接影響著臨床分期的準(zhǔn)確性。因此淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)對(duì)患者術(shù)后復(fù)發(fā)及預(yù)后的預(yù)測(cè)、合理治療方案的選擇有重要的臨床意義[1-2]。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法研究結(jié)直腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,以探討微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的臨床意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2003年3月至2009年3月在本院行結(jié)直腸癌根治術(shù)的53例結(jié)直腸癌患者;其中男 31例,女 22例;年齡27～71歲,平均(57.1±11.4)歲。病理分型:高分化腺癌 9例,中分化腺癌11例,低分化腺癌33例。其中結(jié)腸癌33例,直腸癌20例。PTNM 分期:Ⅰ期19例,Ⅱ期25例,Ⅲ期9例。收集常規(guī)HE染色為陰性的淋巴結(jié)共509枚,平均每例9.6枚。

1.2 試劑及方法 CK20鼠抗、CEA鼠抗、即用型抗原修復(fù)液及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物制品公司。將各蠟塊連續(xù)切片4張,切片厚度為4 μ m,1張行HE染色,另3張行免疫組化SP法染色,經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水后,檸檬酸緩沖液微波法修復(fù)抗原;3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性;加入抗體,4℃過夜;DAB顯色,顯微鏡下觀察3～10 min,陽(yáng)性染色為棕色或黃色;蒸鎦水沖洗,蘇木素復(fù)染,0.1%鹽酸分化,PBS返藍(lán);切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,中性樹膠封固;光鏡下觀察結(jié)果。每次染色均以PBS代替一抗作陰性對(duì)照,直腸癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷以胞漿黃染或棕色為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均采用四格表χ2檢驗(yàn),用SPS13.0軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

結(jié)直腸腺癌細(xì)胞的CK20和CEA陽(yáng)性染色位于胞漿內(nèi)。53例結(jié)直腸癌共 509枚淋巴結(jié)中有 21例(39.6%)共47枚淋巴結(jié)出現(xiàn)微轉(zhuǎn)移(9.2%),其中有21例(39.6%)淋巴結(jié)共46枚(9.04%)為CEA陽(yáng)性,有20例(37.7%)淋巴結(jié)共43枚(8.45%)CK20陽(yáng)性。二者均為陽(yáng)性者42枚(8.25%)。微轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為單個(gè)散在或2～3個(gè)及數(shù)個(gè)聚集小團(tuán)狀的癌細(xì)胞位于淋巴竇內(nèi),以邊緣竇為主。微轉(zhuǎn)移與癌腫浸潤(rùn)的深度有關(guān),腫瘤浸潤(rùn)愈深,微轉(zhuǎn)移愈易發(fā)生(P＜0.05)。微轉(zhuǎn)移還與組織類型有密切關(guān)系,分化程度低者,微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率高(P＜0.05)。但微轉(zhuǎn)移與腫瘤的部位、大小無關(guān)(P＞0.05)(表1)。本組經(jīng)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)有19例重新分期,其中4例Ⅰ期實(shí)屬Ⅲ期,15例Ⅱ期實(shí)屬Ⅲ期;重新分期率為35.85%(19/53)。

3 討 論

雖然目前結(jié)直腸癌的治療療效較過去20年已有了相當(dāng)大的提高,但復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是治療失敗的主要原因,即使在常規(guī)病理學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者中年內(nèi)腫瘤的復(fù)發(fā)率也可達(dá) 50%[3]。分析其原因可能是因?yàn)榱馨徒Y(jié)、血管、骨髓中存在的微小轉(zhuǎn)移灶,用傳統(tǒng)的病理檢查方法很難檢出,而導(dǎo)致臨床無法及時(shí)和正確治療[4-5]。

傳統(tǒng)上對(duì)淋巴結(jié)的病理學(xué)檢查是通過對(duì)其具有代表性的一個(gè)切面經(jīng)HE染色作普通光鏡檢查,這種常規(guī)方法不能查及淋巴結(jié)的大部分組織,故有可能忽略淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的存在。近年來,隨著組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,利用免疫組化法可以發(fā)現(xiàn)常規(guī)HE染色所不能發(fā)現(xiàn)的單個(gè)癌細(xì)胞和(或)一小簇癌細(xì)胞。由于這些微轉(zhuǎn)移有發(fā)展成致命的顯性轉(zhuǎn)移的可能,因此微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)日益為人們所重視,并已成為目前研究的熱點(diǎn)[6-7]。Nakajo等[8]對(duì) 1 761枚常規(guī)病理檢查為陰性的淋巴結(jié)應(yīng)用免疫組化法檢查,發(fā)現(xiàn)有 30枚(1.7%)發(fā)生微轉(zhuǎn)移。本組對(duì)509枚陰性淋巴結(jié)行微轉(zhuǎn)移檢測(cè),微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率為9.2%。微轉(zhuǎn)移與浸潤(rùn)深度密切相關(guān),尤其以T3以上微轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率為高。本組結(jié)果顯示,微轉(zhuǎn)移檢測(cè)使19例結(jié)直腸癌在臨床上需要重新分期,重新分期率為35.85%。因此作者認(rèn)為,對(duì)PT3N0應(yīng)常規(guī)作淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè),這使得臨床分期更具科學(xué)性。成功的腫瘤微轉(zhuǎn)移的診斷取決于是否具備適當(dāng)?shù)哪[瘤標(biāo)記物。CK19,CK20,CEA,MUC1和CD44[9]等標(biāo)志物都在上皮組織中高度表達(dá),因此可作為消化道腫瘤的特異性標(biāo)記物。由于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞的表型復(fù)雜,而且即使同一腫瘤用不同標(biāo)記物結(jié)果也有所不同。目前的趨勢(shì)是用多套標(biāo)記物同步進(jìn)行。

有學(xué)者認(rèn)為,盡管免疫組化法技術(shù)可以檢測(cè)HE無法發(fā)現(xiàn)的腫瘤微轉(zhuǎn)移灶,但它并不能提供更好的預(yù)后信息[10]。而另一方面,贊同微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的學(xué)者稱,淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)不但有利于病情的正確分期,而且有助于預(yù)后分析,便于術(shù)后治療方案的正確決策和制訂[11]。M cGuckin等[12]報(bào)道乳癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)無瘤生存具有重要意義,但與總的生存率無關(guān)。而Nakajo等[8]對(duì)67例常規(guī)病理淋巴結(jié)陰性的胃癌患者進(jìn)行生存分析,結(jié)果表明有淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者的5年生存率明顯低于無微轉(zhuǎn)移患者。Perez等[13]也報(bào)道結(jié)直腸癌有淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者82%生存期低于5年。但迄今為止,尚沒有一種檢查能直接反映癌細(xì)胞的數(shù)量、生命力、黏附力及隨后的免疫應(yīng)答。本組資料因缺乏隨訪,未做生存分析。作者認(rèn)為淋巴結(jié)內(nèi)存在癌細(xì)胞畢竟是淋巴轉(zhuǎn)移的第1步;淋巴結(jié)內(nèi)存在微轉(zhuǎn)移預(yù)示著轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性增加,因此微轉(zhuǎn)移檢測(cè)可間接地作為預(yù)后的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。

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Clinical significance of micrometastasis detection in conventional pathologic nonmetastasis lymphnodes of patients with colorectal cancer*

YU You1,WANG Can1,PENG Li2,et al.
(1.Department of General Surgery;2.Departmentof Pathology,ChongqingMedical Emergency Center,Chongqing400014,China)

ObjectiveTo study the relationship between lymphnode micrometastasis and clinicopathological parameters.MethodsImmunohistochemical method was adopted to detect CK20 and CEA in 509 lymphnodes from 53 cases of colorectal cancer,in which,conventional pathological diagnosis showed no lymph node metastasis.ResultsMicrometastasis was found in 47 lymphnodes(9.2%)of 21 cases(39.6%).The incidence of micrometastasis was correlated with the depth of invasion,and the incidence of micrometastasis in PT3 and PT4 patients was more than that in PT1 and PT2 patients(P＜0.05).The incidence of micrometastasis was also higher in the poorly differentiated cancer than that in well differentiated cancer(P＜0.05).The histologicstage of the 19(35.85%)micrometastasis patients was upstaged by the group of micrometastatic lymph nodes from stageⅠ tostageⅡin 4 cases,stageⅢin 15 cases.ConclusionMicrometastasis detection in negative lymph nodes of colorectal cancer is recommended to precisely determine the tumor stage,in order to direct cancer therapy and predict prognosis.

colorectal carcinamo;lymph node micrometastasis;IHC;neoplasm staging

R735.3;R73-37

A

1671-8348(2010)05-0547-02

重慶市衛(wèi)生局科研基金資助項(xiàng)目(06-2-011)。

2009-06-23

2009-09-08)

?臨床研究?