假單胞菌L-3對(duì)氧化樂(lè)果降解條件的優(yōu)化

王立東, 阮長(zhǎng)青, 郎雙靜

(1.黑龍江省農(nóng)產(chǎn)品加工工程技術(shù)研究中心,黑龍江大慶163319;2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江大慶 163319)

氧化樂(lè)果是目前中國(guó)常用的大噸位農(nóng)藥品種之一,雖然該農(nóng)藥的使用為保證農(nóng)作物的豐收起到了重要的作用,但其高毒、對(duì)農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境存在較嚴(yán)重的污染等問(wèn)題,越來(lái)越引起人們的重視[1]。微生物降解是消除有機(jī)磷農(nóng)藥污染最主要的途徑,國(guó)外從20世紀(jì)50年代開(kāi)始研究有機(jī)磷農(nóng)藥的治理技術(shù),確認(rèn)微生物降解有機(jī)磷農(nóng)藥具有費(fèi)用省、環(huán)境影響少、可最大限度降低污染物濃度、可用于其他技術(shù)難以應(yīng)用的場(chǎng)地等優(yōu)點(diǎn)[2-3]。Wackett等[4]從土壤中分離出一株假單胞菌能降解除草劑阿特拉津,能以阿特拉津?yàn)槲┮坏?在90 min內(nèi)使100 mg/L阿特拉津完全降解。楊惠芳等5]研究發(fā)現(xiàn),添加降解菌可促進(jìn)土壤中殺蟲(chóng)劑單甲咪的降解。由此可見(jiàn),用微生物控制農(nóng)藥污染的生物修復(fù)技術(shù)顯示出廣闊的應(yīng)用前景,但是由于農(nóng)藥污染環(huán)境的化合物組成很不穩(wěn)定,環(huán)境中溫度、p H值及通氣量等波動(dòng)也較大,有可能抑制特定優(yōu)勢(shì)微生物的生長(zhǎng)。另外,投放到環(huán)境中去的特定微生物種群還會(huì)受到該環(huán)境土著微生物種群的影響,甚至受到拮抗而不能在該環(huán)境中成為優(yōu)勢(shì)種群[6-8]。

作者通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室篩選出的菌株L-3對(duì)氧化樂(lè)果降解培養(yǎng)基及環(huán)境條件的優(yōu)化,希望探尋更有利于菌體生長(zhǎng)的條件,從而提高對(duì)氧化樂(lè)果的降解效果,為氧化樂(lè)果降解試驗(yàn)的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器

GC-9900氣相色譜儀:上?？苿?chuàng)色譜儀器有限公司制造;NDP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱、TGL-16B臺(tái)式離心機(jī)、722S型分光光度計(jì):上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);LRH-280型微電腦控制生化培養(yǎng)箱:廣東省醫(yī)療器械廠制造;SG2型p H計(jì):梅特勒-托利多儀器上海有限公司生產(chǎn)。

1.2 培養(yǎng)基與試劑

普通培養(yǎng)基:牛肉膏 3.0 g,蛋白胨 10.0 g,NaCl 5.0 g,蒸餾水 1 000 mL,p H 7.0。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基:NaCl 0.5 g,KH2PO40.5 g,K2HPO41.5 g,MgSO40.5 g,蒸餾水1 000 mL,p H 7.0。

分離培養(yǎng)基A:NH4NO30.5 g,Na2HPO41.19 g,KH2PO40.45 g,MgSO40.45 g,瓊脂 15 g,蒸餾水1 000 mL,p H 7.0,使用前加入500 mg/L氧化樂(lè)果溶液。

分離培養(yǎng)基B:NaNO32 g,KCl 0.5 g,MgSO40.5 g,MnSO40.10 g,BaCl20.05 g,CaCl20.05 g,瓊脂15 g,蒸餾水1 000 mL,p H 7.0,使用前加入500 mg/L氧化樂(lè)果溶液。

發(fā)酵培養(yǎng)基:蔗糖17 g,牛肉蛋白胨9.2 g,KH2PO41.84 g,KCl 1.0 g,MgSO40.50 g,MnSO40.10 g,BaCl20.05 g,CaCl20.05 g,蒸餾水 1 000 mL,p H 7.0,氧化樂(lè)果500 mg/L。

菌種:黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院實(shí)驗(yàn)室分離制得,鑒定為假單胞菌,命名為L(zhǎng)-3。

農(nóng)藥試劑:40%氧化樂(lè)果乳油,北京金宏大生化有限公司產(chǎn)品。

1.3 菌株活化的方法

接種菌株于普通培養(yǎng)基中,30℃下于160 r/min振蕩培養(yǎng) 12～18 h,備用[8]。

1.4 氣相色譜的檢測(cè)條件、方法及降解率的計(jì)算方法

1.4.1 檢測(cè)條件 GC-9900氣相色譜儀。條件:不銹鋼柱SE-30(4 mm×1 m)。柱溫180℃、氣化室225℃、檢測(cè)器溫度220℃;氮?dú)饬髁?0 mL/min,氫氣流量60 mL/min,空氣流量46 mL/min;檢測(cè)器為FPD。

1.4.2 檢測(cè)方法 采用國(guó)標(biāo)GB/T 14552-2003的方法進(jìn)行測(cè)定。

1.4.3 降解率計(jì)算

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 碳源的選擇及其質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響 在含500 mg/L氧化樂(lè)果的分離培養(yǎng)基A中分別加入0.5 g/dL的不同碳源,并將制備好的菌懸液以3%的接種體積分?jǐn)?shù)接入到培養(yǎng)液中,在p H 7.0、30 ℃、160 r/min振蕩培養(yǎng)3 d,用氣相色譜法測(cè)定降解前后氧化樂(lè)果的質(zhì)量濃度,計(jì)算降解率,同時(shí)測(cè)定OD600值。

將優(yōu)選出最適碳源以不同質(zhì)量濃度添加到含500 mg/L氧化樂(lè)果的分離培養(yǎng)基A中,測(cè)定不同底物質(zhì)量濃度條件下氧化樂(lè)果的降解率,選出最適碳源質(zhì)量濃度。

1.5.2 氮源的選擇及質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響 以相同質(zhì)量濃度的其它氮源代替含500 mg/L氧化樂(lè)果的分離培養(yǎng)基B中的NaNO3,并將制備好的菌懸液以3%的接種體積分?jǐn)?shù)接入到培養(yǎng)液中 ,在 p H 7.0、30 ℃、160 r/min 振蕩培養(yǎng) 3 d,用氣相色譜法測(cè)定降解前后氧化樂(lè)果的體積分?jǐn)?shù),計(jì)算降解率,同時(shí)測(cè)定OD600值。

將優(yōu)選出最適氮源以不同質(zhì)量濃度添加到含500 mg/L氧化樂(lè)果的分離培養(yǎng)基B中,測(cè)定不同氮源質(zhì)量濃度條件下氧化樂(lè)果的降解率,選出最適氮源質(zhì)量濃度。

1.5.3 磷源的選擇及質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響 在含500 mg/L氧化樂(lè)果的分離培養(yǎng)基A和分離培養(yǎng)基B中加入一定的蔗糖,接種培養(yǎng)3 d后,測(cè)定不同培養(yǎng)基中氧化樂(lè)果的降解率,并過(guò)對(duì)培養(yǎng)基中成分進(jìn)行分析。

將優(yōu)選出磷源以不同質(zhì)量濃度添加到含500 mg/L氧化樂(lè)果的分離培養(yǎng)基B中,測(cè)定不同磷源質(zhì)量濃度條件下氧化樂(lè)果的降解率,選出最適磷源質(zhì)量濃度。

1.5.4 二次回歸正交旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)確定降解培養(yǎng)基降解培養(yǎng)基中C、N、P最佳質(zhì)量濃度的確定采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)因子的水平及編碼見(jiàn)表1[9]。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析:采用DPS軟件(3.01專(zhuān)業(yè)版)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

表1 實(shí)驗(yàn)因素與水平Tab.1 Test facts and levels

1.5.5 不同環(huán)境條件對(duì)降解的影響

1)不同p H值對(duì)降解效率的影響:制備菌懸液,以3%的接種體積分?jǐn)?shù)接種于優(yōu)化的降解培養(yǎng)液中,調(diào)p H 值依次為 5、6、7、8、9、10,添加 500 mg/L氧化樂(lè)果,設(shè)不接菌的空白為對(duì)照,每處理重復(fù)3次,測(cè)定降解率。

2)不同溫度對(duì)降解效率的影響:制備菌懸液,以3%的接種體積分?jǐn)?shù)接種于含500 mg/L氧化樂(lè)果的100 mL優(yōu)化的降解培養(yǎng)液(p H 7.0)中,同時(shí)設(shè)不接菌的空白對(duì)照 ,分別于 15、20、25、30、35、40℃控溫?fù)u床培養(yǎng)72 h,搖床轉(zhuǎn)速160 r/min,每處理重復(fù)3次,測(cè)定降解率。

3)不同接種接體積分?jǐn)?shù)對(duì)降解效率的影響:制備菌懸液,分別以 1%、2%、3%、4%、5%的接種體積分?jǐn)?shù)接種于含500 mg/L氧化樂(lè)果的100 mL優(yōu)化的降解培養(yǎng)液(p H 7)中,30 ℃、160 r/min,搖床培養(yǎng)72 h,設(shè)不接菌的空白對(duì)照,每處理重復(fù)3次,測(cè)定降解率。

4)不同初始氧化樂(lè)果的質(zhì)量濃度對(duì)菌株L-3降解效率的影響:制備菌懸液,分別接種于含50、100、200、400、800 mg/L 氧化樂(lè)果的 100 mL 優(yōu)化的降解培養(yǎng)液中,30℃、160 r/min振蕩培養(yǎng),每隔24 h測(cè)定氧化樂(lè)果的降解率,繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同碳源對(duì)L-3菌落降解氧化樂(lè)果能力的影響

不同碳源對(duì)氧化樂(lè)果降解效率的影響見(jiàn)圖1。由圖1可以看出,添加的碳源中,蔗糖的降解率最高,降解率高達(dá)72.03%,添加葡萄糖、果糖、乳糖的培養(yǎng)液也能夠降解氧化樂(lè)果,但稍低于蔗糖,添加可溶性淀粉的培養(yǎng)液對(duì)氧化樂(lè)果的降解率很低,所以選擇蔗糖作為培養(yǎng)液的碳源;培養(yǎng)基中菌體的生長(zhǎng)狀況與對(duì)氧化樂(lè)果降解情況一致,即在碳源為蔗糖時(shí)菌體的生長(zhǎng)量也達(dá)到最大。

圖1 碳源對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響Fig.1 Influence of different carbon source during degradation

2.2 蔗糖質(zhì)量濃度對(duì)L-3菌降解氧化樂(lè)果的影響

不同的蔗糖質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解效果的影響見(jiàn)圖2。

圖2 不同蔗糖質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響Fig.2 Effect of sucrose concentration on degradation rate

從圖2可以看出,在氧化樂(lè)果質(zhì)量濃度一定的條件下,無(wú)蔗糖的存在,菌株不能降解氧化樂(lè)果,隨著蔗糖質(zhì)量濃度的升高,菌株對(duì)氧化樂(lè)果的降解率明顯提高,菌株含量在1%～1.5%的范圍時(shí),氧化樂(lè)果的降解率最高,隨著蔗糖質(zhì)量濃度進(jìn)一步升高,降解率反而下降。

2.3 不同氮源對(duì)L-3菌落降解氧化樂(lè)果能力的影響

不同的氮源對(duì)氧化樂(lè)果降解效率的影響見(jiàn)圖3。從圖3可以看出,有機(jī)氮比其它無(wú)機(jī)氮有利于菌體的生長(zhǎng),降解效果好。在有機(jī)氮中,牛肉蛋白胨的降解效果高于胰蛋白胨和酵母浸粉,為最適的氮源;培養(yǎng)基中菌體的生長(zhǎng)狀況與對(duì)氧化樂(lè)果的降解情況一致,即在氮源為牛肉蛋白胨時(shí)菌體的生長(zhǎng)量達(dá)到最大。

圖3 不同氮源對(duì)氧化樂(lè)果降解率的影響Fig.3 Influence of different nitrogen source during degradation

2.4 牛肉蛋白胨質(zhì)量濃度對(duì)L-3菌降解氧化樂(lè)果的影響

不同的牛肉蛋白胨質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解效果的影響見(jiàn)圖4。

圖4 不同牛肉蛋白胨質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解率的影響Fig.4 Effect of different beef peptone concentration on degradation rate

從圖4可以看出,在未添加外加氮源時(shí),菌株能夠降解氧化樂(lè)果,說(shuō)明菌株能以氧化樂(lè)果為惟一氮源生長(zhǎng)。當(dāng)牛肉蛋白胨的質(zhì)量濃度為0.5 g/dL時(shí),降解效果最好,降解率高達(dá)76.32%,隨著牛肉蛋白胨質(zhì)量濃度的增加,降解率有所下降。

2.5 KH2PO4質(zhì)量濃度對(duì)L-3菌降解氧化樂(lè)果的影響

不同磷源培養(yǎng)基中氧化樂(lè)果的降解率見(jiàn)表2。通過(guò)表2可以看出,接種3 d后的分離培養(yǎng)基A中的氧化樂(lè)果的降解率為74.34%,分離培養(yǎng)基B中的降解率為45.67%,分離培養(yǎng)基A比分離培養(yǎng)基B高出相差28.67%。同時(shí)分離培養(yǎng)基B中不含磷元素,說(shuō)明菌株能夠以氧化樂(lè)果為惟一磷源,磷鉬藍(lán)分光光度法檢測(cè)發(fā)酵液無(wú)磷酸生成。

表2 不同磷源培養(yǎng)基中氧化樂(lè)果的降解率Tab.2 Degradation rate of different phosphorus source medium

KH2PO4質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解率的影響見(jiàn)圖5。由圖5可以看出,加入一定量的 KH2PO4對(duì)降解有促進(jìn)作用,當(dāng) KH2PO4的質(zhì)量濃度為0.1 g/dL時(shí),降解效果最好,降解率高達(dá)78.58%,隨著KH2PO4質(zhì)量濃度的增大,降解率有所下降。

圖5 KH2PO4質(zhì)量濃度對(duì)氧化樂(lè)果降解率的影響Fig.5 Effect of KH2PO4concentration on degradation rate

2.6 二次正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

通過(guò)以上的單因素實(shí)驗(yàn)研究了培養(yǎng)基的C,N,P組分對(duì)降解的影響,最佳C,N,P質(zhì)量濃度為:蔗糖1.50 g/dL,牛肉蛋白胨 0.5 g/dL,KH2P040.1 g/dL。根據(jù)單因素最佳C,N,P含量確定因素的上下限,從而進(jìn)一步通過(guò)二次正交實(shí)驗(yàn)確定降解培養(yǎng)基的組成。各處理的降解率的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

2.6.1 回歸方程的建立 為考察各因素對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響,根據(jù)表3中試驗(yàn)結(jié)果,以降解率為指標(biāo),對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,見(jiàn)表4,可得出三因素與降解率之間的回歸方程為:

表3 培養(yǎng)基中C、N、P含量對(duì)降解率的影響Tab.3 Effect of carbon、nitrogen and phosphorsources ondegradation rate

表4 回歸旋轉(zhuǎn)正交組合計(jì)算結(jié)果Tab.4 Calculating results of two revolving orthogonal experiment

2.6.2 回歸方程的顯著性檢驗(yàn) 為了檢驗(yàn)回歸方程的顯著性,計(jì)算各類(lèi)偏差平方和,結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 回歸旋轉(zhuǎn)正交組合方差分析Tab.5 Error analysis of two revolving orthogonal experiment

首先,用F1來(lái)檢驗(yàn)回歸方程擬合情況,由表5可知,F1=3.60F0.05(9,13)=2.72,方程在α=0.05水平上顯著,說(shuō)明在各個(gè)處理水平的結(jié)果之間存在差異,二次回歸方程與實(shí)際情況擬合的較好,可以作為實(shí)驗(yàn)操作的數(shù)學(xué)模型,即可以通過(guò)計(jì)算降解率來(lái)表示氧化樂(lè)果的降解情況。

2.6.3 回歸方程系數(shù)的顯著性檢驗(yàn) 由于是正交旋轉(zhuǎn)設(shè)計(jì),可用各偏回歸平方和Q進(jìn)行F檢驗(yàn)或t檢驗(yàn),實(shí)驗(yàn)中選擇t檢驗(yàn)剔除回歸方程的不顯著項(xiàng)。經(jīng)t檢驗(yàn)可知,回歸方程中t1、t3不顯著,被剔除,其他回歸系數(shù)均在不同程度上顯著,因此回歸方程可寫(xiě)為:

2.6.4 回歸方程的優(yōu)化分析 方程局部最優(yōu)點(diǎn)是最佳的實(shí)驗(yàn)水平,利用求偏導(dǎo)數(shù)的方法求解最優(yōu)水平,對(duì)回歸方程求一階偏導(dǎo),并當(dāng)?shù)竭_(dá)局部最優(yōu)點(diǎn)時(shí),導(dǎo)數(shù)為零,此計(jì)算點(diǎn)為駐點(diǎn),可能為回歸方程的極值,再計(jì)算回歸方程在其定義域內(nèi)各端點(diǎn)的函數(shù)值進(jìn)行比較,則其中的最大值為回歸方程的最優(yōu)值。求偏導(dǎo)解方程組得到:x1=0.717,x2=0.812,x3=0.718,計(jì)算駐點(diǎn)f(0.717,0.812,0.718)及回歸方程在其定義域內(nèi)各端點(diǎn)值發(fā)現(xiàn),其中端點(diǎn)f(1.682,-1.682,1.682)為最大值,將編碼值換算成實(shí)際值時(shí),按Zj=Z0j+xjΔj進(jìn)行計(jì)算,確定優(yōu)化條件。

即當(dāng)蔗糖為1.7 g/dL,牛肉蛋白胨為0.92 g/dL,KH2PO4為0.184 g/dL,菌株降解氧化樂(lè)果的能力最強(qiáng),此時(shí)培養(yǎng)基組成為優(yōu)化的降解培養(yǎng)基組成。

最適培養(yǎng)基降解效果驗(yàn)證試驗(yàn):在優(yōu)化培養(yǎng)基中,菌種培養(yǎng)3 d氧化樂(lè)果的降解率為82.59%,測(cè)定結(jié)果均高于三元二次旋轉(zhuǎn)正交設(shè)計(jì)實(shí)施的23次實(shí)驗(yàn)。

2.6.5 各因素重要性分析 對(duì)于由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所建立的二次回歸方程,可利用對(duì)二次方程系數(shù)的檢驗(yàn)結(jié)果,來(lái)判斷因素對(duì)氧化樂(lè)果降解率的影響,即求出方程各因素對(duì)指標(biāo)的貢獻(xiàn)率大小。

利用貢獻(xiàn)率判斷因素主次,對(duì)二次方程按如下公式求得回歸系數(shù)方差比F(j)、F(jj)、F(ij)。

由以上計(jì)算可知:Δ1>Δ2>Δ3,所以對(duì)于氧化樂(lè)果降解的過(guò)程中,得到各個(gè)不同因素的影響效果順序?yàn)?碳源>氮源>磷源。

2.7 不同環(huán)境條件對(duì)氧化樂(lè)果降解的影響

2.7.1 p H值對(duì)降解效率的影響 不同p H條件下菌株L-3對(duì)氧化樂(lè)果的降解效果見(jiàn)圖6。

圖6 L-3在不同pH值條件下對(duì)氧化樂(lè)果的降解效果Fig.6 Degradations of omethoate by isolate L-3 under different culture pH

由圖6可以看出,在p H 5～10范圍內(nèi),氧化樂(lè)果都能降解,以p H 7效果最好。在較強(qiáng)的堿性條件下(p H 9～10),氧化樂(lè)果有一部分自然降解,可知氧化樂(lè)果在弱酸和中性的條件下生長(zhǎng)穩(wěn)定。

2.7.2 溫度對(duì)降解效率的影響 不同溫度條件下菌株L-3對(duì)氧化樂(lè)果的降解效果見(jiàn)圖7。

圖7 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株降解效果的影響Fig.7 Degradations of omethoate by isolate L-3 under different culture temperature

由圖7可以看出,在15～25 ℃范圍內(nèi),氧化樂(lè)果的降解率偏低,說(shuō)明低溫條件不利于氧化樂(lè)果的降解;在25～40℃范圍內(nèi),氧化樂(lè)果的降解效果較好,30℃時(shí)降解率最高。L-3菌株降解氧化樂(lè)果的最適溫度與其最適生長(zhǎng)溫度是一致的。在較高的溫度條件下35～40℃氧化樂(lè)果有一部分自然降解。

2.7.3 不同接菌種體積分?jǐn)?shù)對(duì)降解效率的影響不同接菌體積分?jǐn)?shù)條件下菌株L-3對(duì)氧化樂(lè)果的降解效果見(jiàn)圖8。

圖8 接種體積分?jǐn)?shù)對(duì)氧化樂(lè)果降解效果的影響Fig.8 Degradation of omethoate by isolate L-3 with different inocula quantities

由圖8可以得出,隨著接種體積分?jǐn)?shù)的增加,菌株L-3對(duì)氧化樂(lè)果的降解率呈先升后降的趨勢(shì),當(dāng)菌體接種體積分?jǐn)?shù)為3%時(shí),氧化樂(lè)果的降解率最高,達(dá)80.16%。

2.7.4 菌株L-3對(duì)不同初始質(zhì)量濃度氧化樂(lè)果的降解 菌株L-3對(duì)不同初始氧化樂(lè)果濃度的降解效果見(jiàn)圖9。

圖9 不同初始質(zhì)量濃度氧化樂(lè)果對(duì)降解率的影響Fig.9 Effect of different omethoate concentration on degradation rate

從圖9可以看出,經(jīng)過(guò)5 d的培養(yǎng),降解率為72.58%～77.71%。50 mg/L的氧化樂(lè)果降解速度相對(duì)較快,3 d后降解基本穩(wěn)定,最終降解率為72.58%;其它幾種質(zhì)量濃度氧化樂(lè)果的降解趨勢(shì)基本相似,5 d后降解趨于穩(wěn)定。

3 結(jié) 語(yǔ)

作者對(duì)從農(nóng)藥生產(chǎn)廠污泥中篩選出能夠高效降解氧化樂(lè)果的假單胞菌L-3的降解條件進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)環(huán)境條件對(duì)氧化樂(lè)果降解效果的的影響進(jìn)行了研究,得出菌株L-3最適的降解條件:碳源為蔗糖、氮源為牛肉蛋白胨、磷源為 KH2PO4;二次正交回歸設(shè)計(jì)得出最佳的降解條件為蔗糖質(zhì)量濃度為1.7 g/dL、牛肉蛋白胨質(zhì)量濃度為0.92 g/dL、KH2PO4質(zhì)量濃度為0.184 g/dL,在優(yōu)化的培養(yǎng)基中對(duì)氧化樂(lè)果進(jìn)行降解,其降解率高達(dá)82.59%;最適的環(huán)境條件為p H 7～8,溫度30℃,接種體積分?jǐn)?shù)3%,初始氧化樂(lè)果質(zhì)量濃度為50 mg/L;優(yōu)化后氧化樂(lè)果的降解率高達(dá)82.59%。

[1]仲維科,郝戩,孫梅心,等.我國(guó)食品的農(nóng)藥污染問(wèn)題[J].農(nóng)藥,2000,39(7):1-3.ZHONG Wei-ke,HAO Ji,SUN Min-xin,et al.Pestides residues in food in China[J].Pesticides,2000,39(7):1-3.(in Chinese)

[2]Donna Chaw,Ulrica Stoklas.Composting of cattle manure and hydrocarbon contaminated flare pit soil[J].Compost Science and Utilization,2001,9(4):322-335.

[3]Harruta S,Cui Z,Huang Z.Construction of a stable microbial community with high cellulose-degradation ability[J].Applied Microbiol Biotechnology,2002,59:529-534.

[4]Wackett,Prenafeta-Bold F X,Opsteeg J L,et al.Biodegradation of azo hyes in coculture of anaerobic granular sludge with aerobic aromatic amine degrading enrichment culture[J].Appl Microbil Biotechnol,1999,51:865-871.

[5]王保軍,劉志培,楊慧芳.甲單咪農(nóng)藥的微生物降解代謝研究[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),1998,18(3):298-302.WANGBao-jun,LIU Zhi-pei,YANG Hui-fang.Microbiological deterioration metabolism of jdm pesticide[J].Environmental Science Journal,1998,18(3):298-302.(in Chinese)

[6]Kauatner M,Mahro B.Microbial degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in soils affected by the orgnic matix of compost[J].Appl Microbil Biotechnol,1996,44:668-675.

[7]Filippi C,Bedini S,Levi-Minzi R,et al.Cocomposting of olive oil mill by-productis:chemcial and mocrodiological evaluations[J].Compost Science and Utilization,2002,10(1):63-71.

[8]Fang M,Wong M H,Wong J W C.Digestion activity of thermophilic bacterial isolated from ash-amended sewage sludge compost[J].Water,Air and Soil Pollution,2001,126:8-12.