氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)對不同種類太子參揮發(fā)性成分檢測

閆嬌霞

(河南省中牟縣衛(wèi)生防疫站 河南中牟 451450)

太子參是華東地區(qū)主產(chǎn)的大宗藥材之一，含有三萜皂苷類、環(huán)肽類、多糖類以及揮發(fā)性成分等[1]。具有抗衰老、抗應(yīng)激、抗缺氧等藥理作用。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS)通過指紋的建立，分離檢測效率高，能方便定性揮發(fā)性成分，且一次能分離上百個揮發(fā)性成分，近些年來被廣泛應(yīng)用于中草藥揮發(fā)性成分分析。

1 儀器與試藥

乙醚分析純，購自江蘇漢邦科技有限公司；高純氦(含量≥99.999%)，購自河南新航工業(yè)氣體有限公司；HP6890GC／5973MSD氣質(zhì)聯(lián)用儀(美國惠普公司)；揮發(fā)油測定裝置。太子參藥材從當(dāng)?shù)蒯t(yī)藥公司購買，除5、7、10號樣品生產(chǎn)產(chǎn)地分別為福建、貴州、安徽宣州產(chǎn)區(qū)外，其他樣品均為江蘇不同產(chǎn)地。均經(jīng)品種鑒定為石竹科植物孩兒參的塊根。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)性成分的提取方法

分別取10批太子參樣品200g，粉碎后過篩，篩孔徑為0.84μm。稱取過篩后的100g太子參粗粉，置于500mL圓底燒瓶中，加入1000mL水，浸泡6h。浸泡后將樣品經(jīng)水蒸汽6h蒸餾，蒸餾液用乙醚5mL萃取3次，回流提取8h，得揮發(fā)性成分乙醚提取液后，對萃取液進(jìn)行30℃減壓蒸餾，直至濃縮至10mL左右，然后經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油，經(jīng)過濾（0.22μm微孔濾膜），密封待測。

2.2 分析條件

氣相色譜條件:HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30.0m×0.25mm ID，0.25μm Film Thickness)；載氣為高純氦，恒定流速0.7mL/min，體積流量1.0mL/min；升溫程序：柱溫60℃，以5℃/min升溫至250℃；進(jìn)樣口溫度280℃；分流進(jìn)樣，分流比為20：1，進(jìn)樣量1μL。以8℃/min的速度升溫至300℃，保持2min。質(zhì)譜條件：電離方式EI；接口溫度280℃；倍增器電壓為1480V；四級桿溫度150℃；離子源溫度230℃；電子能量70eV；溶劑延遲2min；掃描質(zhì)量為50～550amu。

2.3 指紋圖譜建立

按選定的GC-MS條件進(jìn)行分析太子參的各揮發(fā)性成分，測得所有供試品的GC-MS總離子流圖；質(zhì)譜技術(shù)對總離子流圖中的各峰掃描后，得質(zhì)譜圖。經(jīng)計算機(jī)處理和NIST-98標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫檢索對所有組分質(zhì)譜的數(shù)據(jù)鑒定，將其與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)譜圖核對，初步確定出78種化合物在太子參揮發(fā)性成分中。根據(jù)太子參揮發(fā)性成分GC-MS總離子流圖所給出的峰面積、峰保留時間和峰數(shù)值等成分鑒定結(jié)果以及相關(guān)參數(shù)，進(jìn)行比較、分析，制定GC-MS指紋圖譜。

2.4 指紋圖譜分析

經(jīng)過分析、比較揮發(fā)性成分的GC-MS總離子流圖，標(biāo)定太子參指紋圖譜的12個共有峰作為的特征峰，按照序號從大到小其峰化學(xué)成分依次為：正-十六烷酸、未鑒定B、2-環(huán)己烯-1-醇-苯甲酸酯、未鑒定A、4-丁基-3-甲氧基-2-環(huán)己烯-1-酮、4-環(huán)己二烯-1-酮、4-丁基-3-甲氧基-2、3-呋喃甲基乙酸酯、2-戊基呋喃、糠醇、糠醛、己醛、吡咯。其中4-環(huán)已二烯-1-酮，4-丁基-3-甲氧基-2是太子參揮發(fā)性成分中相對含量最高的成分。以4-環(huán)己二烯-1-酮(7號峰)，4-丁基-3-甲氧基-2為參照峰，分別求出各共有峰與之相比的a值(調(diào)整保留時間之比)和各共有峰的相對峰面積。

2.5 指紋圖譜的聚類分析

選擇太子參揮發(fā)性成分中12個比較明顯的共有峰，用SPSS 11.0軟件中的hierarchical cluster analysis對10個太子參樣品進(jìn)行聚類分析，距離公式為square euclidean distance，所用聚類方法為average linkage(between groups)。結(jié)果顯示，當(dāng)距離標(biāo)尺在1時，2、9、3、4、8、10各歸為一類；在2時,2、3、4、8、9、10歸為一類；在6時,2、3、4、6、8、9、10歸為一類；在7時,1，2、3、4、6、8、9、10歸為一類；在25時，全部歸為一類。由此可見，江蘇產(chǎn)太子參指紋圖譜相似性較好，與外省樣品5、7號有一定的區(qū)別。

3 討論

一般在制定指紋圖譜時，由于缺少適宜的對照品作參照，故以供試品中峰形好、較穩(wěn)定、峰面積適中、純度高的共有峰作為參照峰來標(biāo)定[2]。色譜指紋譜技術(shù)是國際公認(rèn)的有效控制天然產(chǎn)物或中藥內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)鍵技術(shù)，已成為目前中藥質(zhì)量評價的重要手段之一，本實(shí)驗(yàn)在用GCMS法對不同產(chǎn)地太子參中揮發(fā)性成分分析鑒定的基礎(chǔ)上，初步建立太子參揮發(fā)性成分GC-MS指紋圖譜，初步建立了以此12個共有峰為特征指紋信息的GC-MS指紋圖譜，證實(shí)不同種類的太子參揮發(fā)成分有一定的差異，此方法穩(wěn)定可靠，為太子參藥材的質(zhì)量評價和GAP實(shí)施提供科學(xué)依據(jù)。

[1]Liang X T.Basic Studies on Chinese Materia Medica(常用中藥基礎(chǔ)研究)[M].Vol I.Beijing:Science Press,2003.

[2]吳朝峰，林彥銓.藥用植物太子參的研究進(jìn)展[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報,自然科學(xué)版，2004，33(4)：426～430.