熱休克蛋白60在胃癌中的表達(dá)及其與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系*

李桂青，李森林，趙景潤

(1． 泰山醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271000； 2．泰山醫(yī)學(xué)院附屬聊城醫(yī)院消化內(nèi)科，山東 聊城 252300)

胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟、多階段和多基因共同作用的結(jié)果,涉及到多種基因的異常改變。熱休克蛋白(heat shock protein, HSP)是細(xì)胞受到各種刺激后產(chǎn)生的一類高度保守的蛋白質(zhì)，主要是通過在應(yīng)激狀態(tài)下生成保護(hù)細(xì)胞生命活動(dòng)所必需的蛋白質(zhì)以維持細(xì)胞生存, 參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要的生物學(xué)功能[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn), 在許多腫瘤細(xì)胞中存在HSP高表達(dá)現(xiàn)象。有關(guān)HSP在胃癌中的表達(dá)文獻(xiàn)中報(bào)道較少，本研究采用免疫組化方法檢測(cè)HSP60在胃癌中的表達(dá)，分析其與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系，以探討HSP60在臨床治療和判斷預(yù)后中的應(yīng)用前景。

1 資料和方法

1.1標(biāo)本來源 組織標(biāo)本均來自聊城市人民醫(yī)院2008年1月1日至2009年2月1日手術(shù)切除的病理科胃癌存檔蠟塊48例，其中男性37例，女性11例，年齡范圍30～75歲，中位59歲。術(shù)前未經(jīng)任何抗腫瘤治療。均經(jīng)病理檢查確診。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟 (UICC)的PTNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期。正常胃黏膜組織14例作為對(duì)照組，取自胃癌手術(shù)切除標(biāo)本的邊緣正常組織。

1.2主要試劑 鼠抗人HSP60， Ki-67; SABC免疫組化試劑盒和DAB 顯色劑均購自武漢博士德生物技術(shù)公司。

1.3免疫組織化學(xué)檢測(cè) 常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片，切片厚度 4 μm。免疫組化染色程序嚴(yán)格按照試劑盒規(guī)程操作。陰性對(duì)照以PBS 代替一抗; 陽性對(duì)照為公司提供已知陽性切片。HSP60陽性結(jié)果判斷，細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色為陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)20個(gè)高倍視野的陽性細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞百分率分為陰性(-): 陽性細(xì)胞<5%; 弱陽性(+): 陽性細(xì)胞數(shù)6%～30%;中等強(qiáng)度陽性(++):陽性細(xì)胞數(shù)31%～60%;強(qiáng)陽性(+++):陽性細(xì)胞數(shù)>60%。以中等強(qiáng)度陽性和強(qiáng)陽性為過表達(dá)病例。增殖指數(shù)(porlierrationindex，Pl) 以Ki-67標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞胞核呈棕黃色為陽性。高倍鏡下(×400)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，共1000個(gè)。計(jì)算陽性腫瘤細(xì)胞所占的百分比即為增殖指數(shù)。以均數(shù)為界值分為低表達(dá)及高表達(dá)組。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

HSP60在胃癌中表達(dá)明顯高于正常胃粘膜組織，陽性表達(dá)率為81.3%，HSP60表達(dá)與腫瘤分化程度和增殖指數(shù)有關(guān)，腫瘤分化程度越差，表達(dá)越高；與增殖指數(shù)呈正相關(guān)。

表1 HSP60在胃癌組織中表達(dá)情況

3 討 論

熱休克蛋白已被報(bào)道在多種腫瘤中過表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞生長和分化、抵抗腫瘤細(xì)胞凋亡和不良預(yù)后有關(guān)。HSP60在胃癌中的表達(dá)文獻(xiàn)中報(bào)道較少，有報(bào)道熱休克蛋白在胃癌中高表達(dá)，促進(jìn)腫瘤發(fā)展[2]。本研究進(jìn)一步證實(shí)熱休克蛋白在進(jìn)展期胃癌中表達(dá)的臨床意義，研究發(fā)現(xiàn)HSP60在胃癌中表達(dá)明顯高于正常胃黏膜組織，提示HSP60可能參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[3，4]。有關(guān)HSP60在胃癌中過表達(dá)，可能由于腫瘤進(jìn)展中的應(yīng)激反應(yīng)和細(xì)胞的自我保護(hù)，但具體機(jī)制目前仍不清楚[5]。

HSP60表達(dá)與胃癌分化程度有關(guān)，分化差者高于高分化者，具體機(jī)制不清楚，臨床意義有待進(jìn)一步研究。另外，Cappello等研究發(fā)現(xiàn)HSP60在進(jìn)展期大腸癌中表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[6]。GiaginisC等研究發(fā)現(xiàn)HSP60在胃癌中表達(dá)與病人性別有關(guān)。

Ki-67增殖指數(shù)(PI)是一種反映癌細(xì)胞增殖狀態(tài)的良好指標(biāo), 與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展 、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[7]。HSP60與Ki-67增殖指數(shù)呈正相關(guān)，提示HSP60促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，可能在促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

HSP60作為分子伴侶能促進(jìn)細(xì)胞生存，尤其在腫瘤細(xì)胞中，但這種機(jī)制仍不清楚。可能與半胱天冬酶依賴的凋亡途徑有關(guān)[8]。HSP60抑制劑通過對(duì)腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用，可能會(huì)成為一種新的抗癌劑。

[1]DidelotC,LanneauD,BrunetM,etal.Interactionofheat-shockprotein90betaisoform(HSP90beta)withcellularinhibitorofapoptosis1 (c-IAP1)isrequiredforcelldifferentiation[J].CellDeathDiffer, 2008, 15 (5) : 859-866.

[2]CioccaDR,CalderwoodSK.Heatshockproteinsincancers:diagnostic,prognostic,predictive,andtreatmentimplications[J].CellStressChaperones， 2005，10:86-103.

[3]GiaginisC,DaskalopulouSS,VgenopoulouS,etal.HeatShockProtein-27,-60and-90expressinoningastriccancer:associationwithclinicopathologicalvariablesandpatientsurvival[J].BMCGastroenterol，2009, 9(9):14.

[4]KapranosN,KomineaA,KonstantinopoulosPA,etal.Expressionofthe27-kDaheatshockprotein(HSP27)ingastriccarcinomasandadjacentnormal,metaplastic,anddysplasticgastricmucosa,anditsprognosticsignificance[J].JCancerResClinOncol，2002，128:426-432.

[5]HwangYJ,LeeSP,KimSY,etal.ExpressionofHeatShockProtein60kDaIsUpregulatedinCericalCancer[J].YonseiMedJ， 2009June30， 50(3): 399-406.

[6]CappelloF,DavidS,RappaF,etal.TheexpressionofHSP60andHSP10inlargebowelcarcinomaswithlymphnodemetastase[J].BMCCancer， 2005，5:139.

[7]GentileV,ViciniP,GiacomelliL,etal.DetectionofhumanpapillomavirusDNA，p53andki67expressioninpenilecarcinomas[J].IntJImmunopatholPharmacol, 2006, 19(1)：209-215.

[8]GhoshJC,DohiT,KangBH,etal.Hsp60RegulationofTumorCellApoptosis[J].JBioChem,2008,283(8):5188-5194.