文山百合鱗片芽誘導(dǎo)的影響因子研究

李黛，曾燕玲，張仁波

（遵義師范學(xué)院生物系，貴州遵義563002）

百合屬植物除具有極高的觀賞價(jià)值外，還具食用和藥用價(jià)值，是我國衛(wèi)生部審批通過的首批藥食兩用植物,不僅臨床上有著廣泛的應(yīng)用，而且作為加工保健產(chǎn)品的原料也極具開發(fā)前景[1]。遵義地區(qū)務(wù)川縣生產(chǎn)的百合粉早在明代初期就成為皇室御膳供品，在1938年就獲貴州省輕工保健食品獎(jiǎng)。1978年改革開放以來，務(wù)川縣境內(nèi)宣起了野生百合粉、百合干生產(chǎn)的高潮，其野生百合粉經(jīng)華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)測(cè)定，富含鋅、磷、硒等11種微量元素和18種人體必需的氨基酸，產(chǎn)品供不應(yīng)求。由于原料的需求量大，加之務(wù)川縣境內(nèi)野生百合的資源利用與開發(fā)的情況基本上是處于簡(jiǎn)單地收集百合鱗莖進(jìn)行粗放型的初加工階段，為一種“掠奪式”的采集[2]，因此，對(duì)務(wù)川縣野生百合資源進(jìn)行開發(fā)利用研究，將對(duì)務(wù)川以至整個(gè)貴州野生百合的可持續(xù)開發(fā)利用和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展產(chǎn)生一定的影響。

文山百合（Lilium wenshanense L·J·Penget F.X.Li)作為培育百合新品種的種質(zhì)材料[3]，為多年生宿根草本植物，在貴州省務(wù)川縣有較多分布，其鱗莖白色，分節(jié)，淀粉含量較高，在務(wù)川縣被用作野生百合粉生產(chǎn)的原材料之一。目前百合的種球繁育技術(shù)雖日漸成熟，但因其速度慢，繁殖系數(shù)低等缺點(diǎn)還是制約了百合鱗莖和切花的大規(guī)模生產(chǎn)。百合組培苗的培育具有繁殖系數(shù)高、周期短等優(yōu)點(diǎn)，剛好彌補(bǔ)了種球繁育的不足。目前對(duì)百合組培快繁研究較多[4-9]，但對(duì)文山百合的組織培養(yǎng)研究?jī)H見屈云慧等人在《植物生理學(xué)通訊》上有一篇報(bào)道[10]。本文介紹了筆者對(duì)文山百合鱗片誘導(dǎo)不定芽的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

本實(shí)驗(yàn)所用的文山百合采自貴州務(wù)川縣野生林下，種植于遵義師范學(xué)院植物園內(nèi)。將鱗莖用自來水沖洗干凈，然后從外到內(nèi)等量分成外、中、內(nèi)三層，再分別將外、中、內(nèi)三層鱗片的上節(jié)和下節(jié)分開，并將鱗片下節(jié)切成下部和上部?jī)刹糠趾蠓址庞诓煌臒?，在自來水下流水沖洗60min左右，于超凈工作臺(tái)上用75%的酒精浸泡10s左右，然后用0.1%的升汞消毒15min，無菌水沖洗5次以上后備用。

1.2 方法

采用正交試驗(yàn)篩選誘導(dǎo)鱗片形成不定芽的最佳培養(yǎng)基以及用鱗片誘導(dǎo)不定芽的最佳著生位置和部位。所用基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，正交實(shí)驗(yàn)采用L9(3)4正交表，6－BA和NAA濃度、鱗片著生位置、鱗片部位四因素三水平的試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

將上述供試材料按正交試驗(yàn)方案接種到9種芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個(gè)處理共接4瓶，每瓶接3塊，每個(gè)處理重復(fù)3次，在溫度為24－26℃，光照12h/d，光照強(qiáng)度1500－2000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)60天后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

表1 L9(3)4正交試驗(yàn)表頭設(shè)計(jì)表

2 結(jié)果與分析

2.16 －BA、NAA濃度對(duì)鱗片誘導(dǎo)芽的影響

將文山百合鱗片接種到9組培養(yǎng)基后約一周，白色鱗片轉(zhuǎn)成了淺紫紅色，10天后鱗片基部出現(xiàn)乳白色小突起，30天后，鱗片上的乳白色突起轉(zhuǎn)成了綠色不定芽。50天左右長(zhǎng)成1－2cm高的苗。文山百合鱗片誘導(dǎo)芽正交試驗(yàn)L9(3)4結(jié)果見表2。

對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。

表2、表3顯示：6－BA濃度的差異對(duì)文山百合芽誘導(dǎo)的影響為：1.0mg/L＞0.5mg/L＞0.1mg/L，其中以1.0mg/L為最好，差異達(dá)極顯著水平，NAA濃度的影響為：0.5mg/L＝1.0mg/L＞0.1mg/L，但差異不顯著。從苗的生長(zhǎng)情況看，1號(hào)、4號(hào)、6號(hào)、8號(hào)培養(yǎng)瓶中苗的生長(zhǎng)較好，其中6號(hào)和8號(hào)生長(zhǎng)最佳，但有玻璃化現(xiàn)象，特別是6號(hào)的玻璃化現(xiàn)象較嚴(yán)重，1號(hào)和4號(hào)雖然較前兩組稍差，但玻璃化現(xiàn)象不明顯。從這四組培養(yǎng)基的激素配比來看，1號(hào)和4號(hào)的激素濃度較低，6號(hào)和8號(hào)的激素濃度配比較高，且1號(hào)、4號(hào)、8號(hào)和6號(hào)培養(yǎng)基中NAA：6－BA的比值為別為0.1、0.2、0.5、2，這似乎說明，隨著激素濃度的增加，特別是NAA相對(duì)含量的增加，培養(yǎng)物玻璃化現(xiàn)象將逐漸加重。圖1－9為9組培養(yǎng)基中鱗片誘導(dǎo)芽及芽的生長(zhǎng)情況。

表2 鱗片誘導(dǎo)不定芽L9(3)4試驗(yàn)結(jié)果

表3 鱗片誘導(dǎo)芽試驗(yàn)結(jié)果的方差分析

2.2 鱗片不同位置和部位對(duì)鱗片誘導(dǎo)芽的影響

從表2和表3的結(jié)果和方差分析可知：不同著生位置和部位的鱗片對(duì)其芽誘導(dǎo)有一定的影響，從著生位置來看，外層鱗片誘導(dǎo)的平均鱗莖數(shù)最多，中層次之，內(nèi)層最差；從部位來看，上節(jié)鱗片的下端誘導(dǎo)的平均鱗莖數(shù)最多，下節(jié)鱗片的上、下兩端誘導(dǎo)的平均鱗莖數(shù)一樣多，但差異均不顯著。

3 討論

從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析可以看出：誘導(dǎo)文山百合鱗片形成不定芽，6-BA濃度以1.0mg/L最為合適，NAA由于為1.0mg/L時(shí)形成的不定芽成苗極緩慢，加之從節(jié)省藥品考慮應(yīng)以0.5mg/L最佳，因此，文山百合芽增殖的最佳培養(yǎng)基應(yīng)為：

MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，這與屈云慧等人[10]的結(jié)果相比稍有差異，其6-BA濃度由0.5mg/L提高到了1mg/L。文山百合由鱗片誘導(dǎo)不定芽，從本次實(shí)驗(yàn)看，每片鱗片平均最多可形成2.54個(gè)不定芽，可能是因?yàn)?號(hào)和8號(hào)培養(yǎng)物的玻璃化現(xiàn)象較嚴(yán)重，盡管在不定芽的生長(zhǎng)過程中，玻璃化現(xiàn)象逐漸減輕，但在鱗片分化形成不定芽時(shí)玻璃化現(xiàn)象較嚴(yán)重影響了不定芽的數(shù)量，因此，如何克服文山百合鱗片誘導(dǎo)不定芽的玻璃化現(xiàn)象以增加不定芽的數(shù)量是一個(gè)值得研究的問題。此外，9號(hào)培養(yǎng)基中形成的鱗莖數(shù)也相對(duì)較多，并且無玻璃化現(xiàn)象發(fā)生，但不定芽分化出來后，生長(zhǎng)很慢，兩個(gè)月內(nèi)難以形成苗，三個(gè)月后才逐步發(fā)育成苗。圖9中已培養(yǎng)了三個(gè)月的9號(hào)培養(yǎng)中不定芽生長(zhǎng)情況證實(shí)了這一點(diǎn)，從這組實(shí)驗(yàn)的激素配比來看，雖然NAA︰6-BA的比值不是太高，僅為1，但NAA和6-BA的絕對(duì)濃度均較其它組為高，這是否說明較高的激素濃度對(duì)不定芽生長(zhǎng)成苗有一定的抑制作用，還有待進(jìn)一步研究。

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