胃癌組織中GHR的表達(dá)與組織分化相關(guān)性的研究

袁 媛， 李蘇宜

基于對腫瘤生物學(xué)理解的加深和新的治療策略的不斷涌現(xiàn)，晚期癌癥的治療取得了重大的進(jìn)展。但即便如此，極高比例的晚期惡性腫瘤患者仍將面對致死性的不良預(yù)后，其主要原因是惡病質(zhì)與營養(yǎng)不良。重組人生長激素(recombinant human growth hormone，rhGH)因具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、增加機(jī)體瘦組織、改善機(jī)體免疫功能及降低應(yīng)激反應(yīng)的作用，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于外科圍手術(shù)期的代謝調(diào)節(jié)。應(yīng)用rhGH后是否會促進(jìn)腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)尚存在爭議。由于生長激素受體(growth hormone receptor，

GHR)是生長激素(GH)作用的生理基礎(chǔ)，本研究旨在通過檢測GHR在胃癌組織中的表達(dá)，以探討其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，為GH應(yīng)用于胃癌代謝調(diào)節(jié)的臨床可行性提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取徐州市中心醫(yī)院2008年1月至2008年3月行胃癌根治術(shù)的32例胃癌患者的術(shù)后病理標(biāo)本，男25例，女7例；年齡30～84歲，中位年齡62歲，其中≤60歲15例，>60歲17例。早期胃癌4例，進(jìn)展期胃癌28例；高分化癌及印戒細(xì)胞癌各3例，中分化及低分化癌各13例。并選取正常胃黏膜組織標(biāo)本7例。

1.2 主要試劑 鼠抗人GHR單克隆抗體(Mab263)購自英國Serotec公司，生物素標(biāo)記抗鼠免疫球蛋白及酶底物顯色劑DAB均購自福州邁新公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組化SP法：(1)石蠟塊切片(3～4 μm)，貼片，烤片，二甲苯脫蠟至水，PBS沖洗(3 min×3)；(2)檸檬酸鹽抗原修復(fù)液，微波高火加熱10 min，PBS沖洗(3 min×3)；(3)免疫組化染色按SP法常規(guī)流程進(jìn)行(Mab263以1∶100稀釋)；(4)滴加新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察顯色反應(yīng)及程度；(5)蒸餾水沖洗，蘇木素淺染，自來水沖洗還藍(lán)，梯度乙醇脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。每一標(biāo)本均以一張相同組織切片備份作為空白對照，以PBS代替一抗，其余操作流程完全相同。

1.4 陽性結(jié)果判斷 應(yīng)用Olympus BX50多頭顯微鏡及北京天地公司的病理細(xì)胞圖像分析儀對切片進(jìn)行觀察和細(xì)胞計(jì)數(shù)。以細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色染色顆粒為陽性。根據(jù)組織切片著色的范圍和強(qiáng)度，以陽性細(xì)胞百分比表示結(jié)果：切片無染色反映或染色細(xì)胞計(jì)數(shù)<25%為陰性(-)；陽性細(xì)胞數(shù)≥25%為陽性，其中陽性細(xì)胞數(shù)25%～50%為弱陽性(+)，51%～75%為中度陽性 (++)，>75%為強(qiáng)陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用R×C表Fisher′s Exact Test 進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

GHR在胃癌及正常胃黏膜組織細(xì)胞中定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，以細(xì)胞質(zhì)染色多見。免疫組化染色陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒，間質(zhì)未見陽性染色，各PBS空白對照切片均無陽性染色。見圖1、2。

圖1 正常胃黏膜組織GHR高表達(dá)

圖2 胃癌組織GHR高表達(dá)

胃癌組織GHR的表達(dá)與性別、年齡無關(guān)(見表1)。正常胃黏膜組織GHR表達(dá)陽性率高于胃癌組織(P=0.038)，且GHR表達(dá)強(qiáng)度較高(見表2)。腫瘤組織分化越好GHR表達(dá)陽性率越高(P=0.036)，且GHR表達(dá)強(qiáng)度較高；而GHR表達(dá)與疾病分期無關(guān)(見表3)。

表1 32例胃癌組織中GHR的表達(dá)與臨床一般情況的關(guān)系

表2 32例胃癌組織和7例正常胃黏膜組織GHR的表達(dá)結(jié)果

表3 32例胃癌組織中GHR的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

晚期胃癌患者多伴有營養(yǎng)不良，其中約90%存在體重下降。單純的腸內(nèi)腸外營養(yǎng)不能有效改善這種營養(yǎng)不良。rhGH因具有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成、增加機(jī)體瘦組織、改善機(jī)體免疫功能及降低應(yīng)激反應(yīng)的作用，已廣泛應(yīng)用于非惡性疾病營養(yǎng)不良的代謝調(diào)節(jié)中。但由于rhGH腫瘤相關(guān)安全性尚不明確，在具腫瘤負(fù)荷患者的臨床治療仍被視為禁區(qū)。

GHR是GH作用的生理基礎(chǔ)。GH 與GHR結(jié)合后不僅激活JAK2信號傳導(dǎo)系統(tǒng)途徑(JAK2-STST5，JAK2-STST3)，也激活Src家族激酶，導(dǎo)致磷脂酶Cr細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信號途徑的活化。這些路徑能增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、存活和活動(dòng)性，ERK激活與癌轉(zhuǎn)移有關(guān)。GHR在正常胃腸黏膜上皮細(xì)胞廣泛表達(dá)，激活后可以刺激提高蛋白合成，促進(jìn)傷口愈合，促進(jìn)胃腸道細(xì)胞增殖、修復(fù)，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，增加營養(yǎng)物質(zhì)吸收[1]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)GHR在多種腫瘤組織中有豐富的表達(dá)，且表達(dá)量與腫瘤進(jìn)展呈正相關(guān)[2-4]。另一方面，Okamoto等[5]則發(fā)現(xiàn)，PS評分高的惡性腫瘤患者本身存在GH-IGF1軸紊亂，血漿GH水平增高，IGF1降低，獲得性GH抵抗，分析原因可能與GHR合成減少有關(guān)，提示GHR表達(dá)的異常與癌癥惡液質(zhì)的發(fā)展可能是互為因果的[6]。澳大利亞的研究發(fā)現(xiàn)GHR的核表達(dá)可能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)[7]，進(jìn)入核內(nèi)的GHR作為轉(zhuǎn)錄激活因子，會共同激活因子CoAA啟動(dòng)靶基因子集轉(zhuǎn)錄調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程[8]。而Dehari等[9]對年輕的宮頸癌患者的研究也有相似發(fā)現(xiàn)。胃癌組織中GHR的表達(dá)情況國外報(bào)道較少，Nagano 等[10]在胃腺癌中檢測到GHR亞型——GHRd3，這種亞型缺少外顯子3，表達(dá)后呈現(xiàn)GH敏感性增強(qiáng)。國內(nèi)的梁道明等[11]發(fā)現(xiàn)胃癌GHR表達(dá)水平與正常胃黏膜相當(dāng)，胃癌GHR的表達(dá)與腫瘤分化程度、組織學(xué)類型、性別和年齡均無關(guān)。張富偉等[12]則認(rèn)為胃癌GHR表達(dá)較正常組織弱，但與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)相同，同樣的是表達(dá)情況與腫瘤大小、分化程度、性別、年齡等無關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)正常胃黏膜組織表達(dá)水平及強(qiáng)度優(yōu)于胃癌組織，與張富偉的結(jié)論相同；胃癌組織分化越好GHR表達(dá)陽性率越高，且差異顯著，這與之前的研究結(jié)果截然不同。分析原因可能是本研究為回顧性研究，所選標(biāo)本為連續(xù)的3個(gè)月間所有資料完整的32例胃癌標(biāo)本，沒有如上述兩項(xiàng)研究那樣預(yù)先分組挑選病例，因此能夠更準(zhǔn)確地描述事實(shí)真相。

前期研究表明，rhGH可增加GHR高表達(dá)細(xì)胞株胞膜表面GHR密度[13]，促進(jìn)GHR高表達(dá)細(xì)胞株裸鼠移植瘤模型的增殖，并促進(jìn)VEGF表達(dá)，而對于不表達(dá)GHR的細(xì)胞及移植瘤不僅無上述影響，反而可以改善受試裸鼠的營養(yǎng)狀況，使其增重[14]。支持GHR的表達(dá)狀況可以作為指導(dǎo)臨床應(yīng)用rhGH進(jìn)行代謝調(diào)節(jié)的生物靶標(biāo)，選擇適用人群。本研究發(fā)現(xiàn)組織分化越差GHR表達(dá)陽性率越低，表達(dá)的強(qiáng)度也越低。因此低分化、高度惡性的胃癌患者可能就是rhGH應(yīng)用相對安全的人群。然而本研究也發(fā)現(xiàn)無論何種臨床病理特征的胃癌，GHR均有一定程度的表達(dá)。提示在GHR未明的情況下，單純應(yīng)用rhGH治療仍有刺激腫瘤增殖的危險(xiǎn)。因此rhGH與化療或分子靶向藥物的全身治療聯(lián)合應(yīng)用或能最大限度地緩解與癌癥相關(guān)的不適和惡液質(zhì)，降低患者死亡率及最大限度地控制腫瘤負(fù)荷。

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