細(xì)胞周期蛋白D1在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義

張愛群 孫富國

細(xì)胞周期蛋白D1在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義

張愛群 孫富國

子宮內(nèi)膜異位癥 卵巢 細(xì)胞周期蛋白D1 細(xì)胞周期 免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜異位癥多發(fā)生于生育期女性，目前發(fā)病機(jī)制仍然不十分清楚。細(xì)胞周期蛋白D1（cyclinD1）是重要的細(xì)胞周期調(diào)控因子，與腫瘤的形成密切相關(guān)。本研究采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥中cyclinD1蛋白表達(dá)，分析其在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病過程中的作用及與臨床分期的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 異位癥組選自我院婦產(chǎn)科2006年1月—2008年1月住院行腹腔鏡手術(shù)或開腹手術(shù)治療的卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者 43例，年齡 23～45歲，平均（33.10±5.10）歲。經(jīng)腹腔鏡手術(shù)33例，開腹手術(shù)10例；其中異位內(nèi)膜淺層浸潤12例，深層浸潤31例；異位囊腫<3 cm者11例,異位囊腫≥3 cm者32例。分期標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)1985年美國生育協(xié)會(huì)（American Fertility Society）的修正分期法（revised American Fertility Society AFS-r），Ⅰ期 2例，Ⅱ期 9例，Ⅲ期 27例，Ⅳ期5例，對(duì)照組為其他婦科疾病同期來院手術(shù)者，平均年齡（36.30±5.90）歲，與異位癥組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.198，P＞0.05）。全部患者均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)，術(shù)前3個(gè)月未進(jìn)行過激素治療。卵巢子宮內(nèi)膜異位癥患者均做HE染色挑選有典型內(nèi)膜及間質(zhì)的組織標(biāo)本為入選患者。

1.2主要試劑 鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶（SP）試劑盒、cyclinD1鼠抗人單克隆抗體均購自北京中山生物技術(shù)公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 異位癥組取卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫囊壁組織，對(duì)照組取正常子宮內(nèi)膜組織，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，組織切片厚4 μm,免疫組化步驟按試劑盒說明操作。

1.4陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) cyclinD1陽性產(chǎn)物均主要定位于細(xì)胞核上。根據(jù)著色強(qiáng)度及范圍分為:陰性（-），無陽性染色細(xì)胞或細(xì)胞著色率＜5%；弱陽性（＋），陽性細(xì)胞數(shù)5%～25%；陽性（＋＋），陽性細(xì)胞數(shù) 26%～50%；強(qiáng)陽性（+++），陽性細(xì)胞數(shù)>50%，由2名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師雙盲讀片。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excel數(shù)據(jù)庫整理，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用±s表示，組間比較行t檢驗(yàn)。2組之間陽性率比較用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.12組中cyclinD1陽性表達(dá)情況的比較 cyclinD1在異位癥組中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 2組cyclinD1陽性表達(dá)的比較 （例）

2.2cyclinD1與異位癥組臨床病理特征的關(guān)系 異位癥組患者有無痛經(jīng)、月經(jīng)是否異常、是否不孕cyclinD1陽性例數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而不同囊腫大小、異位內(nèi)膜浸潤深度及盆腔浸潤情況的cyclinD1陽性例數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 2。

3 討論

cyclinD1基因定位于染色體11q13上，蛋白含295個(gè)氨基酸，是細(xì)胞周期素家族中與細(xì)胞增殖周期關(guān)系最為密切的成員，是啟動(dòng)細(xì)胞周期通過關(guān)鍵限速卡點(diǎn)即從G1期到S期的重要調(diào)節(jié)因子。cyclinD1與CDK4/CDK6結(jié)合后,作用于Rb蛋白,使其磷酸化為pRb,導(dǎo)致pRb與E2F脫離,游離的E2F可進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，啟動(dòng)S期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而使細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)DNA合成而發(fā)揮加速細(xì)胞增殖的正性調(diào)控作用。在生理狀態(tài)下，細(xì)胞進(jìn)入S期后，cyclinD迅速分解。如果cyclinD持續(xù)高表達(dá)，G1期將縮短，提前進(jìn)入S期，使細(xì)胞增殖失控，最終形成腫瘤[1]。許多人類腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)染色體在11q13區(qū)域cyclinD1基因擴(kuò)增和cyclinD1基因的過度表達(dá)，其表達(dá)異常與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[2]。cyclinD1過表達(dá)可使細(xì)胞G1期縮短，體積變小，降低細(xì)胞對(duì)促細(xì)胞分裂劑的依賴性[3]。如果抑制cyclinD1在G1期表達(dá)，細(xì)胞將不能進(jìn)入S期。正常情況下，cyclinD1在G1期是恒定的或保持極低水平，G1期的cyclinD1過度表達(dá)可加速細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞逃避監(jiān)測(cè)點(diǎn)，進(jìn)而發(fā)生細(xì)胞失控性增殖，與許多惡性腫瘤發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，cyclinD1在異位癥組陽性表達(dá)率高于對(duì)照組，提示其高表達(dá)可能與疾病的發(fā)生關(guān)系密切。cyclinD1過表達(dá)主要與周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）4或CDK6、CDK2結(jié)合成復(fù)合物，加快細(xì)胞通過G1檢查點(diǎn)，具有推動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程的作用，與異位子宮內(nèi)膜的不正常生長(zhǎng)、增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)表現(xiàn)有關(guān)。本研究表明，cyclinD1的高表達(dá)可能加速了細(xì)胞周期進(jìn)程，使其更快地進(jìn)入S期，并使異位內(nèi)膜細(xì)胞具有更強(qiáng)的種植及侵襲性，提示cyclinD1與異位內(nèi)膜增殖、浸潤關(guān)系密切，可能對(duì)判斷疾病的預(yù)后有一定的價(jià)值。

表2 cyclinD1與卵巢子宮內(nèi)膜異位癥臨床癥狀及病理指標(biāo)的關(guān)系 例（%）

[1] 吳鑫,楊鐘莉,宦晴,等.cyclinD、P16在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義[J].醫(yī)學(xué)與哲學(xué),2008,29(7B):41-42,45.

[2] 王顯艷,王坤,李林,等.PTEN、P27及cyclinD1在胃癌中的聯(lián)合表達(dá)及臨床意義[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,30(19):2353-2355.

[3] 王前,鄧晶,蔣永新.cyclinD1的研究進(jìn)展 [J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2009,17(2):350-353.

050041 河北省石家莊市，白求恩軍醫(yī)學(xué)院附屬第260醫(yī)院婦產(chǎn)科（張愛群）；白求恩軍醫(yī)學(xué)院（孫富國）

（2010-01-13收稿 2010-05-13修回）

（本文編輯 魏杰）