傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法在臨床細(xì)菌學(xué)鑒定中的作用

鄭玉珍

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的進(jìn)展，臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)日益受到重視，發(fā)揮傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法和先進(jìn)儀器的優(yōu)勢(shì)，可以促進(jìn)臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)一步提高。

1 分離培養(yǎng)是臨床細(xì)菌學(xué)不可缺少的基本技術(shù)，是獲得純培養(yǎng)物的必要手段，即使自動(dòng)化儀器再先進(jìn)也只能對(duì)純菌做出鑒定。而分離培養(yǎng)對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖特性的觀察是必不可少的。需氧茵、兼性厭氧菌的厭氧菌通過(guò)常規(guī)培養(yǎng)方法不易區(qū)別，容易錯(cuò)誤的把兼性厭氧菌當(dāng)厭氧菌鑒定。細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求、溫度、酸堿度、耐鹽性等也是鑒定的重要依據(jù)，如奈瑟菌屬的細(xì)菌形態(tài)相似，但淋病奈瑟氏菌和腦膜炎奈瑟氏菌要在血球瓊脂上生長(zhǎng)，其他奈瑟氏菌可在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)；葡萄球菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)，但鏈球菌只有在血瓊脂上才能生長(zhǎng)良好；腸球菌、李斯特菌和綠色氣球菌在6.5%NaCl中生長(zhǎng)良好，而D群鏈球菌(非腸球菌)不生長(zhǎng)；空腸彎曲菌在42℃生長(zhǎng)，在25℃就不生長(zhǎng)；霍亂弧菌在堿性瓊脂上生長(zhǎng)良好，嗜血桿菌宜在5%。l0%C02環(huán)境下培養(yǎng)等。

2 細(xì)菌的菌落、色素、溶血性、氣味是鑒定的重要依據(jù)。如葡萄球菌在羊血瓊脂上的菌落直徑大予鏈球菌，溶血性仍用于鏈球菌生化鑒定；普通變形桿菌、奇異變形桿菌和容藻弧菌均能遷徙生長(zhǎng)，但變形桿菌有惡臭味；而茵落扁平，邊緣鋸齒狀，具有生姜味，產(chǎn)生綠色素，有金屬光澤者容易辨認(rèn)，銅綠假單胞菌，細(xì)菌產(chǎn)生紅色素(粘質(zhì)沙霄茵)，紫色素(紫色色桿菌)、黃色素(聚團(tuán)腸桿菌、板畸腸桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌等)、橙紅色素(紅球菌)等均可縮小鑒定范圍；菌落呈蠟樣(蠟樣芽孢桿菌)，膠胨狀(克雷伯氏菌和粘性綠假單胞菌)，表面顆粒狀(結(jié)核分枝桿菌、奴卡菌)也是相應(yīng)細(xì)菌的特征。半固體培養(yǎng)可直接觀察細(xì)菌的動(dòng)力。適用于沙門菌屬鞭毛抗原誘導(dǎo)。肉湯生長(zhǎng)物特別適合觀察細(xì)菌的排列，在液體中細(xì)菌的排列完全展開，如鏈球菌的鏈狀典型，便于區(qū)別微球菌科內(nèi)其他細(xì)菌，此外，還可以觀察綠膿假單胞菌色素和需氧菌在液面上形成的菌膜。

3 形態(tài)學(xué)在細(xì)菌鑒定中非常重要，如奴卡菌、紅球菌。對(duì)標(biāo)本直接涂片根據(jù)鏡檢結(jié)果結(jié)合臨床可以快速診斷，如泌尿生殖道標(biāo)本涂片中見到典型腎形的革蘭陰性雙球菌分布于白細(xì)胞內(nèi)外，可診斷為淋病。明確革蘭染色性是細(xì)菌鑒定的前提，革蘭染色錯(cuò)誤肯定對(duì)細(xì)菌鑒定有影響。即使使用自動(dòng)化儀器也是如此。同時(shí)菌體形態(tài)、染色性的觀察可以修正儀器出現(xiàn)的錯(cuò)誤報(bào)告。如形態(tài)觀察很容易區(qū)別細(xì)菌和酵母樣菌，完全可以避免誤報(bào)；莫拉菌屬、不動(dòng)桿菌屬的形態(tài)可區(qū)分其他常見非發(fā)酵的桿菌。革蘭陽(yáng)性菌或陰性菌、陽(yáng)性球菌和桿菌，陰性球菌或桿菌決定了對(duì)細(xì)菌采用何種鑒定系統(tǒng)。傳統(tǒng)方法中對(duì)染色性不定的細(xì)菌，還可通過(guò)進(jìn)行萬(wàn)古霉素紙片法敏感試驗(yàn)和3%KOH拉絲試驗(yàn)，起到佐證作用。革蘭陽(yáng)性菌通常對(duì)萬(wàn)古零素敏感、拉絲試驗(yàn)陰性；革蘭陰性茵則相反?？顾崛旧_定抗酸桿菌，改良金泳染色是奴卡菌、紅球菌的鑒定試驗(yàn)之一。鞭毛染色常用于非發(fā)酵菌鑒定，應(yīng)用芽孢、異染顆粒和莢膜染色在相關(guān)細(xì)菌確認(rèn)上都具有重要特征。

4 動(dòng)力在各種細(xì)菌鑒定中是簡(jiǎn)便而關(guān)鍵的試驗(yàn)，如李斯特菌、腸球菌、D群鏈球菌、綠色產(chǎn)氣球菌，它們都是膽汁七葉苷陽(yáng)性，而且形態(tài)不易區(qū)分，但李斯特氏菌有動(dòng)力(25℃)很容易區(qū)別；小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在22℃～25℃有動(dòng)力但在35℃無(wú)動(dòng)力。志賀茵屬無(wú)動(dòng)力，沙門菌屬有動(dòng)力；黃桿菌屬無(wú)動(dòng)力，很容易區(qū)別有動(dòng)力的非發(fā)酵的桿菌等。

5 氧化酶、觸酶試驗(yàn)分別是革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌鑒定的關(guān)鍵試驗(yàn)，需要傳統(tǒng)方法測(cè)試，儀器也要依據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，選擇相應(yīng)的鑒定卡。氧化酶錯(cuò)誤可使細(xì)菌鑒定錯(cuò)在“科”水平，如將氣單胞菌誤認(rèn)為腸桿菌科細(xì)菌。觸酶錯(cuò)誤不可能準(zhǔn)確鑒定微球菌科細(xì)菌，對(duì)觸酶陽(yáng)性發(fā)酵的革蘭陽(yáng)性球菌必須先確定血漿凝固酶陽(yáng)性，儀器才會(huì)報(bào)告金黃色葡萄球菌。

6 傳統(tǒng)的鑒定方法通過(guò)優(yōu)先試驗(yàn)項(xiàng)目，同一科的不同屬種可以選擇不同的鑒定指標(biāo)，具有靈活性。大腸埃希菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、肺炎克雷伯菌、不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌等常見病原菌都能簡(jiǎn)便的鑒定出來(lái)。采用穩(wěn)定、優(yōu)質(zhì)的商品生化微量管，將使生化培養(yǎng)基的使用變得方便，且成本低廉。

7 志賀菌屬、沙門菌屬、致病性大腸埃希細(xì)菌等僅需幾項(xiàng)簡(jiǎn)單試驗(yàn)即可確定菌屬，即使自動(dòng)化儀器也離不開傳統(tǒng)的血清學(xué)試驗(yàn)確定型別。鏈球菌屬已有快速分群凝集試驗(yàn)。

8 傳統(tǒng)方法不足：傳統(tǒng)方法手工操作較繁雜，鑒定細(xì)菌至少需要18~24 h，而儀器可在幾小時(shí)內(nèi)報(bào)告結(jié)果。但主要還是下述問(wèn)題制約著傳統(tǒng)方法的進(jìn)一步發(fā)展：①疑難菌、少見菌、苛養(yǎng)菌鑒定是薄弱之處，它們生長(zhǎng)較慢、營(yíng)養(yǎng)要求高，如結(jié)核分枝桿菌、巴斯德菌屬、彎曲菌屬、螺菌屬、軍團(tuán)菌屑、棒狀桿菌屬等在中小實(shí)驗(yàn)室分離甚少，這些細(xì)菌雖然沒(méi)有取代傳統(tǒng)的病原菌，但有增多趨勢(shì)，需要加強(qiáng)這些細(xì)菌鑒定方法的研究和規(guī)范化。同時(shí)還應(yīng)創(chuàng)造條件普及厭氧菌培養(yǎng)和鑒定，滿足因病原菌感染所致疾病的診斷、治療的要求。②提高常見病原菌鑒定水平的基礎(chǔ)上，應(yīng)掌握疑難菌、少見菌、苛養(yǎng)菌的檢驗(yàn)技術(shù)，不要放棄臨床標(biāo)本中遇到的不熟悉的細(xì)菌，按科一屬一種原則鑒定，也便于發(fā)現(xiàn)“新的細(xì)菌”。而且對(duì)“新菌”的鑒定可以拓展思路，提高細(xì)菌的鑒定水平，必要時(shí)將可疑菌送到上級(jí)實(shí)驗(yàn)室或用儀器鑒定。還應(yīng)大力加強(qiáng)細(xì)菌檢驗(yàn)人員的培訓(xùn)，提高業(yè)務(wù)素質(zhì)。③加強(qiáng)國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基的研制。優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基是分離、培養(yǎng)病原菌的關(guān)鍵。苛養(yǎng)菌、血液增菌培養(yǎng)瓶、結(jié)核分枝桿菌等商品培養(yǎng)基應(yīng)大力開發(fā)，以適應(yīng)臨床細(xì)菌檢驗(yàn)技術(shù)的需要。