微柱凝膠間接免疫分析技術(shù)在血小板抗體篩查及交叉配血中的應(yīng)用

孫長杰 林海蘭

[摘要] 檢測受血者血清中是否存在待輸血小板的抗體,或反復(fù)輸注血小板、全血及含有血小板的血液制品后產(chǎn)生血小板抗體,導(dǎo)致輸注血小板無效。只有經(jīng)過血小板抗體篩查和配型,輸注與患者相合或基本相合的血小板,才能達(dá)到安全有效的輸注血小板療效,另外血小板抗體篩查可協(xié)助診斷某些血小板減少癥。血小板輸注無效的特征是多次輸血小板均未取得滿意效果。有些病人可能有一次輸血小板效果不好,而以后幾次效果不錯。只有在2次及2次以上輸血小板效果都不好,才能診斷為血小板輸注無效。

[關(guān)鍵詞] 微柱凝膠間接免疫分析技術(shù);血小板抗體篩查;血小板特異性抗原;血小板配型試驗(yàn)

[中圖分類號] R552[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1004-8650(2009)05-020-02

1原理

微柱凝膠中依次加入稀釋液、受檢者血清、血小板、指示紅細(xì)胞。指示紅細(xì)胞上包被有動物抗人血小板抗體,該抗體Fc段結(jié)合在人紅細(xì)胞膜上,Fab段與血小板結(jié)合,如果受檢者血清中存在抗血小板抗體,該抗血小板抗體Fab段亦與血小板抗原結(jié)合,相鄰的抗血小板抗體Fc段通過抗人球蛋白搭橋連結(jié)成網(wǎng)絡(luò)狀凝聚復(fù)合物,即以抗人球蛋白為橋,連接抗血小板抗體、血小板和指示細(xì)胞,形成指示紅細(xì)胞—血小板—抗血小板抗體—抗人球蛋白-抗血小板抗體—血小板—指示紅細(xì)胞免疫復(fù)合物,形成凝集網(wǎng)絡(luò)。該復(fù)合物在一定離心力下,浮于膠表面或位于膠中;如果受檢者血清中無抗血小板抗體,則不能形成上述網(wǎng)絡(luò)狀血凝復(fù)合物,指示紅細(xì)胞沉于微注凝膠管尖底部。

血小板輸注無效的判斷原則:不正常反應(yīng):1小時(shí)血小板回收率(PPR)<30%或血小板壽命<2天;不成功輸注:1小時(shí)血小板增加指數(shù)(CCI)<7.5×109-10×109/L;18小時(shí)血小板增加指數(shù)(CCI)<4.5×109-7.5×109/L。

如果CCI或PPR不能達(dá)到,則輸后血小板增加<5×109/L(輸注1個(gè)單采量)可作為輸注無效的指標(biāo)。其原因可分為免疫、非免疫和血小板質(zhì)量低下三類。

2討論

血小板輸注效果的判定主要以血小板的回收率和校正血小板計(jì)數(shù)增加值為指標(biāo)。血小板的回收率與發(fā)熱、感染、DIC、出血、脾腫大等因素有關(guān),而最重要的是患者體內(nèi)是否存在血小板同種抗體。理想的血小板交叉配合試驗(yàn)應(yīng)該包括HLA型和HPA型均能達(dá)到配合,才能達(dá)到有效的血小板治療的目的。

簡易致敏血小板血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)方法:標(biāo)本用量少,保持時(shí)間長,可作為一般實(shí)驗(yàn)室輸血的常規(guī)篩選及血小板減少性疾病的診斷等方面的臨床應(yīng)用;可以采用保存血小板做配合性試驗(yàn),但試驗(yàn)過程較繁瑣,需要進(jìn)間相對較長,難以保證配合性血小板的及時(shí)發(fā)出,影響臨床使用。

HLA淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn):LCT靈敏度均較高主要針對患者HLA抗體,對于混合抗體或HPA抗體引起的PTR效果不佳,但在我們檢測的樣本中,血小板抗體陽性患者均含有HLA抗體,很少單純HPA抗體。

單克隆抗體固相血小板抗體試驗(yàn):為針對HPA和HLA的試驗(yàn)方法,但患者血清纖維蛋白原干擾或血小板濃度高均導(dǎo)致假陽性結(jié)果,血小板濃度低會導(dǎo)致假陰性。另外,實(shí)驗(yàn)方法一般用富含血小板血漿進(jìn)行配型實(shí)驗(yàn),要求采用供者新鮮血樣,如果應(yīng)用保存血小板進(jìn)行配合性實(shí)驗(yàn),供者血小板濃度需要調(diào)整。

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法:是最常用的檢驗(yàn)方法,但這些方法缺點(diǎn)較多,如操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)或特異性低。

流式細(xì)胞術(shù):是一種單細(xì)胞定量分析的新技術(shù),具有快速、靈敏的特點(diǎn),但費(fèi)用昂貴不易于用于常規(guī)檢查。

微柱凝膠間接免疫分析技術(shù):為檢測血小板抗原抗體反應(yīng)提供了最為理想的方法,操作簡單、方便、快捷;結(jié)果更為準(zhǔn)確和高度特異性,容易觀察,重復(fù)性好,保存時(shí)間長,實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)準(zhǔn)化,自動化程度高,所需標(biāo)本量少等優(yōu)點(diǎn)。所用時(shí)間短,整個(gè)試驗(yàn)過程在30分鐘以內(nèi),基本同紅細(xì)胞血型交叉配血試驗(yàn)所需時(shí)間,并可用于大量標(biāo)本,數(shù)十份標(biāo)本同時(shí)檢測,故可以用于臨床常規(guī)的血小板配型試驗(yàn)。

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(收稿日期2009-02-03)