白術內(nèi)酯Ⅰ和Ⅲ在不同白術樣品中的比較

吳　佳　王艷平　劉湘丹　匡艷輝

（1.長沙民政學院，長沙410004；2.湘潭市中心醫(yī)院，湘潭，400011；3.湖南中醫(yī)藥大學，長沙,410007）

【摘要】目的：研究不同白術樣品中兩種白術內(nèi)酯的變化，為白術的質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：HPLC法。結(jié)果：不同采收時期白術含兩種白術內(nèi)酯的含量變化無明顯規(guī)律，在不同提取方法實驗中以甲醇超聲波提取最優(yōu)，不同產(chǎn)地實驗中以湖南平江白術兩種白術內(nèi)酯含量最高。結(jié)論：白術藥材中兩種白術內(nèi)酯含量受產(chǎn)地和提取方法的影響較大，與采收時期無明顯相關性。

【關鍵詞】HPLC；白術內(nèi)酯；不同樣品

【中圖分類號】S567.23+3【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)02-0004-02

Studies on esterⅠand Ⅲ in the Different samples

from Atractylodes macrocephala koidz

WU Jia1WANG Yanping2LIU Xiangdan3KUANG Yanhui3

（1.ChangSha Social Work College,Changsha Hunan,410004；2.XiangTan Central Hospital,XiangTan Hunan, 400011；

3.Hunan University of Traditional Chinese Medicine，ChangSha Hunan , 410007）Иァ続bstract】:0bjective: Studieing on esterⅠand Ⅲ in the Atractylodes macrocephala koidz and Proviing the basis for the Quality Control of Atractylodes macrocephala koidz. Methods: HPLC.Results: the content of inner esterⅠand Ⅲ in Atractylodes macrocephala koidz had no orderliness in different collection time,About the different distill methods the ultrasonic wave with methanol is best,About the different producing area,The cotent of Atractylodes macrocephala koidz from PingJiang is the first.Conclusion:The producing area and distill methods do more impact in the content of two type of ester than collection time.ァ綤ey words】:HPLC；ester in the Atractylodes macrocephala koidz；different samples

中藥白術為菊科植物白術Atractylodes macrocephala koidz的干燥根莖^[1]。神農(nóng)本草列為上品，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎功效。白術根莖中含揮發(fā)油、倍半萜內(nèi)酯化合物等，其中自術內(nèi)酯類成分(白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ)為白術的抗炎、抗癌有效成分，經(jīng)實驗表明，該類成分具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進營養(yǎng)物質(zhì)吸收的作用，尤其白術內(nèi)酯I藥理作用明顯，白術內(nèi)酯I、白術內(nèi)酯Ⅲ也為白術的特征性成分^[2]。用HPLC對不同提取方法、不同采收期和產(chǎn)地的白術樣品中兩種白術內(nèi)酯的含量進行比較研究，未見報道。

1材料、儀器與試劑

白術藥材為2005年采自湖南省平江縣白術種植基地，另于同期在市場購湖南平江,隆回和浙江,安徽,河北五地白術飲片。Agilent 1100高效液相色譜儀， Agilent 1100晶體二極管陣列檢測器(DAD),四元泵，Agilent色譜工作站.

白術內(nèi)酯Ⅰ和白術內(nèi)酯Ⅲ標準品由湖南省藥品檢驗所提供,純度>99%,甲醇為色譜純,水為重蒸水(自制)。

2色譜條件

色譜柱:Kromasil-ODS柱(4.6 X 200mm,5 u m ) (Scienhome)；柱溫:30℃；流動相:甲醇一水(54:46)；流速:1.Om L/min；進樣量: 10uL.紫外檢測波長:220nm。理論板數(shù)按白術內(nèi)酯I計不低于3000，主色譜峰與相鄰其它色譜峰的分離度不小于2，拖尾因子1.020。

3方法和結(jié)果

3.1供試品溶液的制備

3.1.1超聲波溶劑提取發(fā)精密稱取白術粉末(過40目篩)1.000g ,置于具塞三角瓶中，加提取溶劑10.0m1,超聲提30min,離心(3500r/min)1Omin，10 m1容量瓶定容得供試品溶液，0.45um微孔濾膜過濾得待測液；回收溶劑后用甲醇于10m1容量瓶定容過濾后得供試品溶液。

3.1.2水蒸氣蒸餾法精密稱取粉碎過20目篩的干燥白術粉末100g，裝入1000ml的圓底燒瓶中,加蒸餾水400ml,浸泡過夜,安裝揮發(fā)油測定器和冷凝裝置,用電熱套加熱至沸,調(diào)溫度保持微沸6h停止加熱,冷卻后收集揮發(fā)油,用適量乙酸乙酯充分溶解并轉(zhuǎn)入50ml的容量瓶中，用適量甲醇定容制成供試品溶液。

3.2對照品和樣品的色譜行為按上述條件，對白術內(nèi)酯I、Ⅲ對照品和樣品進行測定，樣品中與對照品的保留值處有相應的色譜峰，且與雜質(zhì)得到較好的分離(色譜圖見圖1)。

樣品峰

3.3線性關系精密稱取白術內(nèi)酯I、白術內(nèi)酯Ⅲ對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含白術內(nèi)酯I、白術內(nèi)酯Ⅲ各10 .6 ug/ml的混合對照品溶液。精密吸取混合對照品2uL, 5uL, 10uL, 15uL, 20uL,進樣分析，以進樣量ng對AI、AⅢ作線性回歸,得兩個組分的回歸方程,白術內(nèi)酯I:YI=3.24014X-0.63026r=0.999056 ,線性范圍：48.47038～450.12244白術內(nèi)酯Ⅲ:YⅢ=2.14063X+1.695000 r=0.99966 ,線性范圍:68.22203～697.97000。結(jié)果表明兩組分均成良好的線性。

3.4精密度試驗對同一對照品溶液連續(xù)進樣6次，每次10uL，以峰面積計算白術內(nèi)酯I和白術內(nèi)酯Ⅲ的精密度，其RSD分別為1.067%和1.059%。

3.5穩(wěn)定性試驗對同一樣品溶液每隔2h連續(xù)6次進樣,結(jié)果表明樣品在12h內(nèi)穩(wěn)定, 以峰面積計算白術內(nèi)酯I、白術內(nèi)酯Ⅲ的RSD分別為1.45%及1.39%。

3.6樣品重復性實驗精密稱取同批白術藥材粉1.000g，共6份按“供試品溶液的制備”下方法提取，測定，以峰面積計算白術內(nèi)酯I、白術內(nèi)酯Ⅲ的RSD分別為1.14%和1.16%。

3.7加樣回收率實驗精密稱取己知含量的平江白術飲片粉末約0.21g共6份，每份各精密加入上述混合對照品溶液53ug, 63ug, 74ug，按“供試品溶液的制備”項下進行處理并測定，計算回收率，得白術內(nèi)酯I的平均回收率為100. 07%, RSD為1.49%白術內(nèi)酯III的平均回收率為98.64%, RSD為1.20%。

3.8樣品測定精密稱取各樣品白術粉末1.000g,按“供試品溶液的制備”下進行處理并測定,結(jié)果見表1。

4討論

由表1可知，用正己烷為溶劑提取時兩種白術內(nèi)酯含量均最低，用甲醇提取時白術內(nèi)酯Ⅰ含量最高，用乙醚提取時白術內(nèi)酯Ⅲ含量最高，考慮到白術內(nèi)酯Ⅰ為白術的主要活性成分，也為白術質(zhì)量控制的主要指標，建議選取甲醇為白術內(nèi)酯超聲波提取溶劑。曾實驗不同提取時間（15，30，45，60min）及不同提取次數(shù)（1，2，3次）對甲醇超聲波提取條件的影響，結(jié)果表明用甲醇超聲波提取一次，每次30min可提取完全。由表1可知，不同采收時期白術所含兩種白術內(nèi)酯的含量變化無明顯規(guī)律，龍門和長壽白術的白術內(nèi)酯I和白術內(nèi)酯Ⅲ均在10月11日達到最高值。且兩種白術內(nèi)酯的含量都較低，白術內(nèi)酯I在龍門和長壽兩地的平均含量分別為0.0398%和0.0209%，白術內(nèi)酯Ⅲ在兩地的平均含量分別為0.0375%和0.0201%。從表六可看出白術飲片中兩種白術內(nèi)酯的含量普遍較原藥材高,表明白術經(jīng)凈制加工后質(zhì)量較原藥材優(yōu).在五個不同產(chǎn)地的比較實驗研究中，湖南省平江縣產(chǎn)白術藥材的兩種白術內(nèi)酯含量均高于浙江省于潛縣的，而河北行唐產(chǎn)白術藥材的兩種白術內(nèi)酯含量均最低。湖南省平江縣和浙江省于潛縣是歷史上白術的道地藥材產(chǎn)區(qū)，兩地所產(chǎn)藥材有效成分白術內(nèi)酯含量高。從內(nèi)在品質(zhì)上進一步說明了道地藥材質(zhì)量的優(yōu)良性。為確保色譜定性的準確性，除采用上述流動相外，曾以甲醇一水(60:40), (55:45), (54:46)等作為流動相，進行了樣品與標準品的定性比較，表明樣品中均有與標準品一致的保留值。實驗過程中選用了幾個不同波長進行測定紫外含量測定，發(fā)現(xiàn)在222nm處，兩種白術內(nèi)酯都有最大吸收，故實驗選擇了222nm作為測定波長。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典20O5年版一部[S].北京:化學工業(yè)出版社,2OO5:68

[2]李偉,文紅梅,張愛華,等.白術質(zhì)量標準研究——HPLC法測定2種白術內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志,2001,21（3）:170

(收稿日期：2009.1.1)