葛根素預(yù)處理在大鼠肝臟缺血再灌注損傷中的抗氧化作用

雒光強(qiáng)

【摘要】 目的 觀察葛根素預(yù)處理對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的防護(hù)作用。方法 雄性SD大鼠，建立肝臟缺血再灌注模型(HIR)。隨機(jī)分為假手術(shù)組、HIR組和HIR-葛根素預(yù)處理組。黃嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法分別測(cè)定肝組織中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性的變化，同時(shí)分析NO含量的改變。結(jié)果 肝臟缺血再灌注損傷后，與假手術(shù)組比較，肝組織中MDA活性及NO含量均顯著增加，而SOD活性顯著降低；經(jīng)40 mg/kg劑量的葛根素預(yù)處理7 d后，與模型組相比，肝組織中MDA活性及NO含量顯著降低，而SOD活性增高。結(jié)論 葛根素預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注肝臟損傷有一定的保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】 葛根素；缺血再灌注；肝臟；抗氧化

お

The antioxidation effect of kakkonein on hepatic ischemia reperfusion injury in rats

LUO Guang-qiang,Xian 630 Hospital, Xian, Shanxi 710000,China

【Abstract】 Objective To investigate the antioxidation effect of kakkonein on hepatic ischemia reperfusion injury in rats． Methods Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups: pseudo-operation normal control group， hepatic ischemia reperfusion injury model group, kakkonein group. After hepatic ischemia and reperfusion, to analysis the level of MDA, SOD and NO activity. Results After hepatic ischemia reperfusion, the MDA and NO level increased, and the SOD activity decreased obviously comparing with the normal group; Comparing to the hepatic ischemia reperfusion injury model group, the MDA and NO level decreased, and the SOD activity increased. Conclusions The apigenin have a prominent protective effect on hepatic ischemia reperfusion injury in rats．

【Key words】Kakkonein; Ischemia reperfusion; Liver; Antioxidation

肝臟缺血再灌注損傷是肝臟缺血后重獲血流灌注或氧供后，引起或加重肝臟缺血缺氧造成的損傷，是臨床肝臟手術(shù)過(guò)程中常見(jiàn)的一種病理生理變化，可產(chǎn)生氧自由基，引起鈣超載等改變，損傷肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，影響肝臟的功能^[1]。因此，如何減輕或防治肝臟缺血再灌注損傷的程度，是目前臨床肝臟手術(shù)中研究的熱點(diǎn)。NO能與含F(xiàn)e²⁺血紅素基團(tuán)的蛋白質(zhì)相結(jié)合，產(chǎn)生較穩(wěn)定的亞硝?；t素蛋白復(fù)合物。NO與超氧自由基反應(yīng)生成的過(guò)氧亞硝酸根離子，能使各種含鐵-硫酶失活，阻斷細(xì)胞內(nèi)能量合成及DNA復(fù)制，影響細(xì)胞的線粒體功能，產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用^[2]。葛根素是一種天然多酚類化合物，結(jié)構(gòu)類似雌二醇，具有某些雌激素樣作用，研究發(fā)現(xiàn)它是一種天然的抗氧化劑，具有明顯的抗氧化作用，可消除體內(nèi)過(guò)多的自由基，保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)^[3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠肝臟局部缺血再灌注模型，經(jīng)葛根素預(yù)處理，觀察肝組織中丙二醛(MDA) 含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性及NO含量的改變，從而探討葛根素對(duì)大鼠缺血再灌注肝臟損傷的保護(hù)作用。

1資料與方法

1.1 資料 雄性SD大鼠，體質(zhì)量190～210 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；MDA、SOD和NO試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；葛根素購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.2 動(dòng)物分組與模型建立 大鼠肝臟缺血再灌注模型建立方法^[4]：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，術(shù)前24 h禁食，自由飲水，乙醚吸入麻醉，腹正中切口，暴露十二指腸韌帶及肝門部，分別夾閉肝動(dòng)脈和門靜脈，造成70％肝臟缺血，70 min后去除血管夾，恢復(fù)肝臟血流。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組：① 假手術(shù)組，大鼠給予開(kāi)腹及暴露肝蒂處理，不阻斷肝臟血流；② 模型組，夾閉肝動(dòng)脈和門靜脈，缺血70 min后，再灌注120 min；③ 葛根素預(yù)處理組，術(shù)前7 d，每天口服灌胃40 mg/kg的葛根素，按上述方法建立大鼠肝臟缺血再灌注模型，阻斷肝動(dòng)脈和門靜脈，缺血70 min后，再灌注120 min。

1.3 肝臟組織中MDA、SOD活性及NO含量的變化 取出肝臟組織，冰浴中操作，加入1 mol/L的HCl，碾磨制成組織勻漿，低溫離心機(jī)，離心15 min，3000轉(zhuǎn)/min，取上清液。參照按試劑盒說(shuō)明，分別用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD、硫代巴比妥酸比色法測(cè)定MDA的活性變化，通過(guò)硝酸還原酶法檢測(cè)的NO含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)，采用SPSS 11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以P<0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝組織中NO含量的變化 大鼠肝臟缺血再灌注后，通過(guò)硝酸還原酶法檢測(cè)的NO含量，肝組織中NO含量顯著增加；大鼠經(jīng)40 mg/kg劑量的葛根素預(yù)處理7 d后，同缺血再灌注組動(dòng)物相比，NO含量降低（表1）。

2.2 肝組織中SOD、MDA活性的變化 大鼠缺血再灌注后，通過(guò)黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，肝組織中SOD活性顯著降低；硫代巴比妥酸比色法測(cè)定，肝組織中MDA含量顯著增加；大鼠經(jīng)40 mg/kg劑量的葛根素預(yù)處理7 d后，同缺血再灌注組動(dòng)物相比，SOD活性明顯增加，MDA含量降低（圖1）。

3 討論

目前的研究表明，氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化在肝臟缺血再灌注損傷的過(guò)程中起著重要的作用。在肝臟缺血再灌注過(guò)程中，發(fā)生超氧化物陰離子自由基反應(yīng)，可產(chǎn)生大量氧自由基，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，造成肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死^[5]。MDA能反映細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接反映出細(xì)胞損傷的程度。氧自由基清除劑SOD，可以間接的反映體內(nèi)氧自由基水平及脂質(zhì)過(guò)氧化的損傷程度^[6]。NO與含血紅素的鳥苷酸環(huán)化酶(GC)結(jié)合，激活的GC使細(xì)胞產(chǎn)生大量環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)，發(fā)揮生物效應(yīng)。NO與超氧自由基反應(yīng)，生成過(guò)氧亞硝酸根離子，可以造成腦細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，ATP酶活性降低，細(xì)胞蛋白質(zhì)損傷^[7]。葛根素是一種異黃酮衍生物，屬植物雌激素類，在4位和7位各有一個(gè)羥基，4位羥基可與雌激素受體(ER)相結(jié)合，可以增強(qiáng)雌激素促甲狀腺釋放降鈣素的作用，具有抗自由基損傷、抑制血小板活化與聚集、擴(kuò)張心血管、降低心肌耗氧、改善心肌代謝和心臟功能等眾多藥理作用，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞也具有一定的保護(hù)作用^[8]。

肝臟缺血再灌注后，機(jī)體清除自由基的能力下降，氧自由基生成增加，肝臟細(xì)胞受到了自由基的攻擊，造成肝組織中MDA活性及NO含量均顯著增加，而SOD活性顯著的降低；經(jīng)40 mg/kg劑量的葛根素預(yù)處理7 d后，肝組織中MDA活性及NO含量均降低，而SOD活性增高，表明葛根素可以抑制肝臟缺血再灌注后SOD的失活，降低細(xì)胞內(nèi)氧自由基含量，使MDA生成下降，從而抑制大鼠肝組織的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)。

本研究結(jié)果表明，葛根素可通過(guò)降低氧自由基水平、減輕脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，有效地防治缺血再灌注所造成的肝臟損傷。此外，葛根素尚可通過(guò)提高機(jī)體NO水平，降低內(nèi)皮素水平，間接抑制PMN黏附、聚集，從而保護(hù)肝組織的功能，為臨床中缺血再灌注損傷性疾病的防治提供新的思路。

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