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    菟絲子及其偽品芥菜種子的理化鑒別

    2007-12-29 00:00:00馬小帆王軍練
    云南中醫(yī)中藥雜志 2007年11期


      摘要:目的:對菟絲子及其偽品芥菜種子進(jìn)行理化鑒別。方法:化學(xué)反應(yīng)和薄層層析。結(jié)果:菟絲于的不同提取液對鹽酸一鎂粉、三氯化鐵試液均呈正反應(yīng),對生物堿沉淀試劑呈負(fù)反應(yīng);薄層色譜中出槲皮素和黃酮苷成分。未檢出生物堿。芥菜種子的上述實驗結(jié)果則相反。二者的氨基酸和揮發(fā)油類成分薄層色譜比較結(jié)果也有所不同。結(jié)論:實驗為二者提供了專屬性較強(qiáng)的理化鑒別依據(jù)。
      關(guān)鍵詞:菟絲子;芥菜種子;化學(xué)反應(yīng);薄層色譜
      中圖分類號:R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A
      文章編號:1007-2349(2007)11-0033-03
      
      菟絲子為常用中藥,來源于旋花科植物菟絲子(Cuscutachinensis)的干燥成熟種子。市場上常有其偽品發(fā)生。曾報道菟絲子及其偽品十字花科植物芥菜(原變種)(Brassicajuncea var.juncea)的干燥成熟種子在原植物、藥材性狀、水試、顯微特征和紫外光譜等方面的鑒別。為進(jìn)一步提供二者專屬性較強(qiáng)的理化鑒別依據(jù),本文根據(jù)其理化特性,進(jìn)行了化學(xué)反應(yīng)和薄層色譜比較實驗。
      
      1 材料與試劑
      
      實驗用菟絲子及其偽品芥菜種子的樣品來源和原植物學(xué)名鑒定同前文。試劑均為分析純,水為重蒸餾水,薄層層析用硅膠G由中國青島海洋化工集團(tuán)公司生產(chǎn)、國家藥典委員會監(jiān)制。槲皮素對照品購于中國藥品生物制品檢定所,批號為081-9003。
      
      2 方法與結(jié)果
      
      2.1 化學(xué)反應(yīng) (1)取兩種樣品粉末各0.5g,加石油醚(30~60℃)超聲處理3次,每次5ml、10min。濾過,藥渣揮干,加乙醚同上法處理,濾過,合并各自的乙醚溶液,殘渣備用。取兩種乙醚溶液各5ml,分別置試管中,溫水浴上蒸干,殘渣加甲醇1ml使溶解,加鎂粉少許與鹽酸3滴.結(jié)果菟絲子溶液顯紅色,芥菜種子幾無色。(2)取(1)項下的藥渣,揮干,加甲醇回流2次,每次5ml、20min,濾過,合并各自的甲醇溶液。取兩種甲醇溶液各1ml,分別置試管中,加鎂粉少許和鹽酸3滴。結(jié)果菟絲子溶液顯紅色,芥菜種子略顯淡黃色。另取兩種甲醇溶液各1ml,分別置試管中,加三氯化鐵試液2滴。結(jié)果菟絲子溶液顯污綠色,芥菜種子顯淡黃色。(3)取兩種樣品粉末各0.3g,加石油醚(30~60℃)5ml,水浴回流15min,濾過。藥渣揮干,加0.5%的鹽酸乙醇溶液5ml,水浴回流15min,濾過。取濾液加氨試液調(diào)至中性,水浴蒸干,殘渣加5%硫酸溶液5ml使溶解,濾過。取濾液各1ml,分別置3支試管中,一管加碘化鉍鉀試液、一管加碘化汞鉀試液、另一管加硅鎢酸試液各2滴。結(jié)果菟絲子各管中均無沉淀發(fā)生,芥菜種子各管中分別產(chǎn)生棕紅色、黃白色和灰白色沉淀。
      2.2 薄層層析
      2.2.1 黃酮苷元檢識 取兩種樣品粉末各1g,加石油醚(30~60℃)水浴回流3次,每次10ml、15min,濾過,合并各自的石油醚溶液,備用。藥渣揮干,加乙醚同上法處理,合并各自的乙醚溶液,藥渣備用。取兩種乙醚溶液,揮盡乙醚,殘渣加乙醚1ml使溶解,得兩種乙醚供試液。另取槲皮素對照品,加無水乙醇制成每ml含1mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述兩種乙醚供試液各8μl、對照品溶液1μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以甲苯一甲酸乙酯一甲酸(5:4:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。結(jié)果菟絲子色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同的灰褐色斑點,其它位置上尚顯有兩個灰褐色斑點;芥菜種子色譜中未檢出任何斑點(見圖1)。
      
      2.2.2 黃酮苷檢識 取(1)項下的藥渣,揮干,加甲醇水浴回流3次,每次10ml、15min,濾過,合并各自的甲醇溶液,水浴蒸至約1ml,作為兩種甲醇供試液。吸取上述兩種甲醇供試液各6μl。分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1%三氯化鋁乙醇溶液,100℃加熱5min。結(jié)果菟絲子色譜中顯有2個黃色斑點;芥菜種子色譜中在與菟絲子色譜相應(yīng)位置上未檢出斑點,其它位置上幾無斑點顯現(xiàn)(見圖2)。
      
      2.2.3 氨基酸類檢識 吸取2.2.2項下剩余的兩種甲醇供試液各6μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上。以正丁醇-冰乙酸-水(4:1:1)為展開劑,展開。取出,晾干,噴以茚三酮試液,105℃加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果菟絲子色譜中顯6~7個紫紅色至淡黃色斑點;芥菜種顯11個斑點(見圖3)。
      
      2.2.4 揮發(fā)油類檢識 取2.2.1項下的兩種石油醚溶液,分別濃縮至約1ml,得兩種石油醚供試液。吸取上述兩種石油醚供試液各式各樣1μl分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以石油醚(30~60℃)一醋酸乙酯(9:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以茴香醛試液,105℃加熱5min。結(jié)果菟絲子色譜中顯3個斑點,芥菜種子顯5個斑點(見圖4)。
      
      
      2.2.5 生物堿類檢識 取兩種樣品粉末各1g,加石油醚(30~60~C)水浴回流2次,每次15ml、20min,濾過。取藥渣揮干,加濃氨試液0.8ml,拌勻,再加硅藻土適量混勻,加氯仿回流2次,每次20ml、20min,濾過,藥渣備用。合并各自的氯仿溶液。水浴蒸干,殘渣加氯仿lml使溶解,作為兩種氯仿供試液。藥渣揮干,加0.5%鹽酸酸性乙醇溶液回流提取2次,每次20ml、20min,濾過。合并各自的酸性乙醇提取液,蒸干,殘渣加水1ml使溶解,得兩種水供試液。吸取上述兩種氯仿供試液和兩種水供試液各6μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以正丁醇一冰醋酸一水(4:1:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。結(jié)果兩種氯仿供試液色譜中均未檢出斑點;兩種水供試液色譜中,菟絲子未檢出斑點,芥菜種子檢出2個橙黃色至桔紅色斑點(見圖5)。
      
      3 小結(jié)與討論
      
      文獻(xiàn)報道菟絲子含黃酮化合物,如黃酮苷元槲皮素、黃酮苷類金絲桃苷和紫蕓英苷等。實驗(1)和(2)即分別對樣品脫脂后的乙醚和甲醇提取液進(jìn)行鹽酸一鎂粉反應(yīng),結(jié)果菟絲子均呈正反應(yīng)。實驗2.2.1和2.2.2進(jìn)一步對樣品的兩種提取液分別按黃酮苷元和黃酮苷進(jìn)行薄層檢識。結(jié)果菟絲子的兩種提取液中均分別檢出黃酮成分。曾將菟絲子的上述兩種供試液分別點于同一薄層板上,以2.2.1項下的方法檢識。結(jié)果兩種供試液色譜中仍分別保持原有斑點的個數(shù),但其中甲醇供試液色譜中顯示的斑點在原點附近,乙醚供試液色譜顯示的斑點則位于前方(Rf=0.6)。說明菟絲子的上述兩種提取液中所含黃酮化合物不同,乙醚中為黃酮苷元(如槲皮素),甲醇中為黃酮苷。芥菜種子的鹽酸一鎂粉反應(yīng)呈負(fù)反應(yīng),薄層色譜中也未檢出黃酮類成分斑點。因此,是否檢出黃酮類成分,是區(qū)別菟絲子與芥菜種子的一個重要依據(jù)。
      實驗(3)反應(yīng)結(jié)果初步表明,菟絲子不含生物堿,芥菜種子則含有。實驗2.2.5即分別對石油醚脫脂后的兩種樣品制備成脂溶性生物堿供試液和水溶性生物堿供試液,經(jīng)進(jìn)一步薄層檢識。結(jié)果菟絲子未檢出生物堿,芥菜種子則檢出水溶性生物堿。水溶性生物堿的檢出,是偽品菟絲子芥菜種子的一個重要理化特性。
      實驗2.2.3和2.2.4對二者氨基酸類和揮發(fā)油類成分的薄層色譜比較結(jié)果也分別有較明顯的不同。
      上述實驗為菟絲及其偽品芥菜種子進(jìn)一步提供了專屬性較強(qiáng)的理化鑒別依

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