異性接觸與隔離抑郁/焦慮癥模型的雌雄大鼠同步造模法

沈天愛，吳霄漢，馮佳偉，張忠楠，汪萌芽

(皖南醫(yī)學院 1.細胞電生理研究室;2.啟明星小組，安徽 蕪湖 241002)

抑郁癥是以顯著而持久的心境障礙為主要特征的一種疾病，也稱抑郁發(fā)作。臨床常表現(xiàn)為興趣喪失、注意困難、有自殺觀念等，還包括認知功能、行為等異常表現(xiàn)[1]。長期以來，高校大學生群體抑郁癥的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，由抑郁癥導致的一系列自殺、傷害他人等行為的事件也在增加[2]，而且失戀引起抑郁癥的臨床病例報道也日益增多，表明失戀、社交障礙等因素也是抑郁癥的重要發(fā)病原因之一。“異性接觸與隔離”(opposite sex contact and isolation，OSCI)是新近報道的一種抑郁/焦慮模型的造模方法，是模擬社交失敗的壓力與情感缺陷(如隔離、失戀等)等情緒障礙導致的抑郁/焦慮的動物模型[3]。但該造模方法中，雌雄鼠能否同時造模成功以及對雌鼠是否有差別化影響尚未提及，本文旨在探索能否通過OSCI對雌雄鼠同時進行抑郁/焦慮癥模型造模的方法。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性SD大鼠37只，雌性SD大鼠37只，由南京青龍山動物中心提供。 實驗動物在適應性飼養(yǎng)2周后體質量為雄性(320±20)g，雌性(290±20)g,合格證號：SCXX(滬) 2013-0006。

1.2 儀器 44 cm×44 cm×47cm大鼠曠場反應箱及數(shù)據采集和處理系統(tǒng)，動物行為視頻跟蹤分析系統(tǒng)(Smart系統(tǒng),Panlab,USA)。

1.3 造模方法 大鼠置于恒溫恒濕房間中，12 h明亮12 h黑暗，自由飲食飲水，對照組同性別的兩只大鼠一籠，模型組都是1個籠子放1只雌鼠1只雄鼠，中間有隔板(隔板上有20個直徑為0.5 cm的洞)分為兩邊，前6 d雌雄鼠從直接接觸(雌雄鼠在隔板同一邊)到間接接觸(雌雄鼠分開到隔板兩邊)，第7天雌雄鼠完全隔離(雌雄鼠分為兩個籠子即1個籠子1只)。第1天：直接接觸24 h；第2天：直接接觸6 h+間接接觸18 h；第3天：直接接觸1 h+間接接觸23 h；第4天：直接接觸0.5 h+間接接觸23.5 h；第5天：直接接觸10 min+間接接觸23.83 h；第6天：間接接觸24 h；第7天：完全隔離；第8天開始測試相關指標[3]。

1.4 行為學測試

1.4.1 糖水消耗實驗 OSCI模型法造模7 d后的第1天即實驗第8天，進行糖水消耗實驗。參考文獻[4]的方法并稍作修改。實驗開始前對大鼠進行2 d適應性飲用2%濃度糖水的訓練，每籠放置2個水瓶，首日兩瓶均裝2%濃度的蔗糖水，次日將其中1瓶改為純水。此后，禁水24 h。然后再進行糖水偏愛百分比測定，即每只大鼠同時放置定量好的1瓶2%濃度的蔗糖水和1瓶純水。4 h后，檢測兩瓶水的剩余量，并計算糖水偏愛百分比[糖水偏愛%=(糖水消耗量/總液體消耗量)×100%]。

1.4.2 曠場實驗 OSCI模型法造模7 d后的第1天即實驗第8天，進行曠場實驗，分析大鼠的自發(fā)活動和探索能力是否因為造模產生變化。實驗開始前3 d，每天在曠場箱中撫摸大鼠5 min，開始實驗時，將4只大鼠(2只雄鼠2只雌鼠)分別放入44 cm×44 cm ×47 cm曠場箱的4個方格內，應用動物行為視頻跟蹤分析系統(tǒng)(Smart系統(tǒng))持續(xù)記錄大鼠行蹤15 min，記錄后取出大鼠，清理曠場箱內的排泄物，用35%濃度的酒精去除其殘留的氣味，雌雄組各組大鼠交替測試。實驗結束后，分析每只大鼠的活動總路程、垂直站立總時間、跨格數(shù)3項指標。

2 結果

2.1 雄鼠造模結果 與對照組雄鼠(n=10)相比，OSCI組雄鼠(n=27)的糖水偏愛百分比降低(t=2.967,P<0.01)，曠場實驗總路程減少(t=4.099,P<0.01)、垂直站立總時間縮短(t=2.067,P<0.05)，提示OSCI方法使雄鼠呈現(xiàn)抑郁/焦慮癥行為學特征(圖1)。

2.2 雌鼠造模結果 與對照組雌鼠(n=10)相比，OSCI組雌鼠(n=27)的糖水偏愛百分比(t=4.431,P<0.01)、曠場實驗總路程均降低(t=3.574,P<0.01)，垂直站立總時間縮短(t=2.497,P<0.05)，提示OSCI方法也使雌鼠有抑郁/焦慮癥行為學表現(xiàn)(圖1)。

A：糖水偏愛百分比(sucrose preference)；B、C：曠場實驗總路程(total distance,B)、垂直站立總時間(total rearing duration,C)。1.male OSCI組、3.female OSCI組：n=27;2.male control組、4.female control組：n=10。兩組t檢驗：*P<0.05，**P<0.01。

2.3 雌、雄鼠造模結果的合并分析 OSCI造模后，與對照組(n=20)相比，OSCI組大鼠(n=54)的糖水偏愛百分比(t=5.066,P<0.01)、曠場實驗總路程(t=6.561,P<0.01)、垂直站立總時間(t=2.960,P<0.01)均降低，且跨格數(shù)也有減少(t=2.399,P<0.05)，亦提示OSCI造模方法有效(圖2)。

A：糖水偏愛百分比(sucrose preference)；B～D：曠場實驗總路程(total distance,B)、垂直站立總時間(total rearing duration,C)和跨格數(shù)(zone transition number,D)。 OSCI組：n=54，control組：n=20。兩組t檢驗：*P<0.05，**P<0.01。

2.4 雌、雄模型鼠的比較 模型組雌鼠(n=27)與雄鼠(n=27)的兩組間對比顯示，糖水偏愛百分比(t=0.333)、曠場實驗總路程(t=1.138)、垂直站立總時間(t=0.116)、跨格數(shù)(t=0.612)4個相關指標均相似(P>0.05)，提示OSCI造模方法對雌雄鼠的造模效果相似(圖3)。

A：糖水偏愛百分比(sucrose preference)；B～C：曠場實驗總路程(total distance,B)、垂直站立總時間(total rearing duration,C)。 n=27;兩組t檢驗:均P>0.05。

3 討論

本實驗對同等數(shù)量的雌、雄SD大鼠進行OSCI抑郁/焦慮癥模型造模，采用糖水消耗和曠場實驗兩項行為學測試，探索OSCI方法能否對雌雄鼠同時進行抑郁/焦慮癥模型造模，檢測造模后大鼠糖水偏愛百分比，曠場實驗總路程、跨格數(shù)、垂直站立總時間共4項指標，結果表明，不僅雄性SD大鼠在OSCI造模7 d后，與雄性對照組相比4項指標均降低，與文獻報道相似，顯示造模的有效性[3]。同時，參與造模的雌性大鼠、雌雄大鼠合并分析也顯示了同樣的結果。此外，模型組雄鼠與模型組雌鼠組間對比，4項指標的組間差異均沒有統(tǒng)計學意義。由此可見，OSCI造模方法可有效地對雌雄鼠同時進行抑郁/焦慮癥模型的造模。

負性生活事件是抑郁癥發(fā)生的重要因素，多為失戀、離婚等事件。失戀性精神抑郁癥患者,一般是指存在親密關系的異性之間的矛盾而導致親密關系破裂，產生心理問題并對中樞神經系統(tǒng)產生強烈的刺激，使其發(fā)生功能紊亂而引起的一系列癥候群。在一些案例中，求助者處于失戀狀態(tài)，把不滿的情緒投射到他人身上，導致一些生理、心理反應[5]。OSCI造模方法模擬了一種消極的獎賞剝奪(與異性接觸的過程)[2]，而獎賞即是一種可引起愉悅情緒的情感體驗[6]，如社會交流對群居動物而言是一種獎賞行為[7]。有報道可通過引導雄性大鼠在與同性的社交障礙下產生抑郁/焦慮的造模方法[8]，而OSCI造模方法證明了不僅是同性，人們在與異性交流中產生社會交流障礙時也可引起抑郁/焦慮[3]。OSCI造模方法可能使雄、雌大鼠抑郁/焦慮的結果，提示異性情感接觸出現(xiàn)障礙時，雙方均可受到情感問題的影響。因此，在人類異性情感出現(xiàn)問題時，雙方可能都需要得到關心和引導，調節(jié)自身心態(tài)，盡量避免產生抑郁。

本文結果顯示OSCI造模方法可對雌雄鼠同時進行抑郁/焦慮癥模型造模，不僅在實驗方法學上有一定的價值，可被用于失戀導致的抑郁患者相關病情和治療研究等。同時兩性別模型鼠的相似行為學表現(xiàn)，對抑郁/焦慮癥的性別差異研究也有一定的意義，如在其他類型的抑郁癥(CCMD-3)的男女患者中，男性的病理異常更為嚴重[9]，提示抑郁/焦慮癥中患者的性別差異及機制可能仍需進一步探索與討論。