針刺對腎上腺切除大鼠哮喘模型嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)及血清皮質(zhì)酮水平的影響

崔龍?zhí)O 楊永清 等

崔龍?zhí)O 楊永清 王正田 陳漢平 馬淑蘭 張英英

(上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究所,上海200030;1河北省張家口市第一醫(yī)院)

摘 要 觀察腎上腺切除(ADX)大鼠哮喘模型針刺后的血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)和血清皮質(zhì)酮水平的變化,并與ADX大鼠哮喘模型非針刺、ADX大鼠哮喘模型捆綁處理、普通大鼠哮喘模型和空白組作對照。結(jié)果表明,針刺能明顯降低ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù),對血清皮質(zhì)酮水平無明顯影響。提示針刺對哮喘能從減少血液嗜酸性粒細(xì)胞方面發(fā)揮其治療作用,亦表明針刺對血液嗜酸性粒細(xì)胞的減少不依賴腎上腺皮質(zhì)激素。

主題詞 腎上腺切除術(shù) 哮喘/針灸療法 粒細(xì)胞/針灸效應(yīng) 皮質(zhì)酮/血液臨床和實驗研究證明,針灸對過敏性疾病均有明顯的治療作用[1],其中之一是過敏性哮喘。針刺防治過敏性哮喘的作用環(huán)節(jié)是多方面的,有研究認(rèn)為針灸通過增加皮質(zhì)激素水平發(fā)揮作用[2,3]。但我們研究提示針刺防治過敏性哮喘,可能不主要依賴腎上腺皮質(zhì)激素,并認(rèn)為存在其他內(nèi)源性調(diào)節(jié)途徑[4],因此皮質(zhì)激素在針刺防治過敏性哮喘中的作用有待進(jìn)一步明確。為此我們曾經(jīng)將大鼠切除腎上腺造成皮質(zhì)激素缺乏后,再造哮喘模,觀察了針刺對肺功能的影響[5],在此基礎(chǔ)上我們進(jìn)一步觀察針刺對腎上腺切除大鼠哮喘模型嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)及血清皮質(zhì)酮水平的影響。報告如下。

1 材料和方法1.1 實驗動物及分組體重150～170g的雄性SD大鼠47只(中國科學(xué)院上海實驗動物中心),隨機分成5組,腎上腺切除(ADX)大鼠哮喘模型捆綁并針刺處理組(n=10)、ADX哮喘模型組(n=8)、ADX哮喘模型捆綁處理組(n=9)、普通大鼠哮喘模型組(n=10)、空白對照組(n=10)。

1.2 哮喘模型制備[6]將大鼠依Farris等[7]方法行雙側(cè)腎上腺切除術(shù),術(shù)后飼以糖鹽水(1%生理鹽水+5%葡萄糖)。模型組大鼠分別一次性腹腔注射含卵蛋白(上海麗珠東風(fēng)技術(shù)有限公司)1mg和氫氧化鋁(上海金山化工廠)10mg的生理鹽水1ml,2周后靜脈注射卵蛋白(15mg/kg)激發(fā)哮喘發(fā)作。

1.3 方法ADX大鼠哮喘模型捆綁并針刺處理組自造模之日起,隔日上午9時捆綁針刺1次,以0.5寸32號華佗牌針灸針,針刺"大椎"、"肺俞"、"風(fēng)門"穴,每穴留針20min,每隔5min行針1次(以200次/min的捻轉(zhuǎn)速度捻針,20次為行針1次),共治療7次;ADX哮喘模型捆綁處理組的捆綁處理同針刺組的捆綁;普通大鼠哮喘模型組的處理是將大鼠不行雙側(cè)腎上腺切除術(shù),直接進(jìn)行造模;ADX哮喘模型組是將大鼠行雙側(cè)腎上腺切除術(shù)后再進(jìn)行造模;而空白對照組不作任何處理。

1.4 觀察指標(biāo)(1)大鼠血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)心臟采血時取20μl大鼠血液,滴進(jìn)0.38ml嗜酸性細(xì)胞染色液(伊紅∶丙酮=9∶1)中并將其混勻,室溫下靜置10min之后,用計數(shù)板在光電顯微鏡下計數(shù)。

(2)大鼠血清皮質(zhì)酮水平測定

放射免疫測定法(RatcorticosteroneRIAkit,DiagnosticProductsCorporation,LosAnge瞝es,CA,USA)。大鼠心臟采血,血液置4℃冰箱中凝固1～2h,經(jīng)2500r/min離心機離心10min,將分離的血清置-20℃冰箱保存?zhèn)錅y。1.5 統(tǒng)計方法相關(guān)分析用Spearman方法,參數(shù)型數(shù)據(jù)的比較用t檢驗,非參數(shù)型數(shù)據(jù)的比較用Mann瞁hitnnyU瞁ilcoxon秩和W檢驗。

2 結(jié)果2.1 針刺對ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)的影響圖1顯示,ADX哮喘模型大鼠的血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)較空白對照組、普通哮喘模型組均明顯增加,普通大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)也較空白對照組明顯增加。針刺可明顯降低ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù),而捆綁對ADX大鼠哮喘模型血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)無明顯影響。

2.2 針刺對ADX大鼠哮喘模型血清皮質(zhì)酮水平的影響圖2表明,ADX哮喘模型大鼠的血清皮質(zhì)酮較空白對照組和普通大鼠哮喘模型組均明顯降低。針刺對ADX大鼠哮喘模型血清皮質(zhì)酮水平無明顯影響,捆綁亦對ADX大鼠哮喘模型血清皮質(zhì)酮水平無明顯影響。

3 討論本研究顯示了ADX之后,大鼠血清皮質(zhì)酮顯著減少,證明ADX確能造成機體內(nèi)源性皮質(zhì)激素缺乏。ADX大鼠哮喘模型嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù),不僅較空白對照組增加,也較普通大鼠哮喘模型組進(jìn)一步增加,這可能亦與內(nèi)源性皮質(zhì)激素缺乏有關(guān)。

研究認(rèn)為,支氣管哮喘是一種嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎[8],為此形成了以嗜酸性粒細(xì)胞為治療靶的哮喘治療新戰(zhàn)略[9]。目前,能夠?qū)κ人嵝粤＜?xì)胞數(shù)目與活性有明顯控制作用的主要是糖皮質(zhì)激素[10]。因此理論上血液嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目的改變應(yīng)當(dāng)與血清皮質(zhì)激素水平密切相關(guān),而我們的研究結(jié)果顯示,在腎上腺切除、皮質(zhì)激素缺乏后,針刺仍可降低哮喘模型嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù),且針刺治療前(r=0.5376,P=0.135)與針刺治療后(r=0.4648,P=0.176)血清皮質(zhì)酮水平與嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)均無明顯統(tǒng)計學(xué)相關(guān)關(guān)系,與以往臨床觀察[11]結(jié)果一致,提示針刺對ADX大鼠哮喘模型嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)的降低不主要依賴腎上腺皮質(zhì)激素。

針灸對過敏性哮喘有良好的治療作用,早已為臨床所證明。臨床上應(yīng)用針刺大椎、肺俞、風(fēng)門治療哮喘不僅取得了較好的近期療效,同時也有一定的遠(yuǎn)期效果[12]。在以往的動物實驗研究方面我們發(fā)現(xiàn),針刺能顯著改善大鼠哮喘模型和ADX大鼠哮喘模型的肺功能[5,13],降低氣道阻力,增加肺順應(yīng)性。而本文研究結(jié)果又表明,針刺可使ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)降低,對皮質(zhì)激素水平無明顯影響,提示針刺對哮喘不僅從降低氣道阻力、增加肺順應(yīng)性方面發(fā)揮其明顯的防治作用,也從降低嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)方面發(fā)揮防治作用,且這種防治作用并不主要依賴腎上腺皮質(zhì)激素。捆綁處理對ADX大鼠哮喘模型的血液嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)和血清皮質(zhì)酮水平均無明顯影響,提示針刺作用并不等同于捆綁這種應(yīng)激刺激。

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