膠原酶預(yù)處理對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用影響

●邵政一　朱毅芳　陳　霞

(南通醫(yī)學(xué)院藥理教研室,江蘇226001)

摘要為探討細(xì)胞外間質(zhì)中某些膠原成分在穴位注藥信息傳遞中的作用。應(yīng)用不同劑量膠原酶Ⅰ、Ⅳ及混合膠原酶于"內(nèi)關(guān)"穴上方5 mm心包經(jīng)上預(yù)處理,30 min后觀察"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素的初始降糖作用,并與心包經(jīng)旁預(yù)處理組、蒸餾水經(jīng)上預(yù)處理組相比較。結(jié)果:膠原酶Ⅳ心包經(jīng)上預(yù)處理幾乎完全阻斷"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素初始降糖作用,并且呈一定劑量相關(guān)性,大劑量混合膠原酶也能明顯阻斷該降糖作用,而心包經(jīng)旁同樣預(yù)處理沒有阻斷作用。

主題詞穴,內(nèi)關(guān)胰島素/投藥和劑量血糖膠原酶類

我們以往的實驗研究發(fā)現(xiàn),穴位注射后出現(xiàn)的快速、強大的藥效作用與血藥濃度、神經(jīng)系統(tǒng)的完整性無明顯相關(guān)性^[1-2]。穴位注藥后強大的初始藥效(吸收前或未達(dá)有效血藥濃度)出現(xiàn)的機理及藥物信息傳遞途徑的探索有助于闡明穴位注藥及經(jīng)絡(luò)的實質(zhì),本研究目的在于探索穴位注藥后藥物信息傳遞與細(xì)胞外間質(zhì)中某些成分的關(guān)系,以期為探索經(jīng)絡(luò)實質(zhì)作更深入的研究。

1材料與方法

1.1材料

ICR小鼠20±2 g,雌雄各半,由南通醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供(蘇動質(zhì)字97025號,蘇動環(huán)97062)。膠原酶Ⅰ、膠原酶Ⅳ(Sigma公司生產(chǎn))?；旌夏z原酶(膠原酶粗品,上海醫(yī)藥工業(yè)研究院生產(chǎn))。One Touch Ⅱ血糖測定儀(美國強生公司產(chǎn)品)。胰島素40 U/ml(南京生化制藥廠生產(chǎn),批號980403)

1.2方法

(1)*"膠原酶Ⅰ預(yù)處理對小鼠"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用的影響:已禁食18 h的ICR小鼠40只,隨機分為4組,每組10只:①小劑量預(yù)處理組:"內(nèi)關(guān)"穴上方5 mm心包經(jīng)上注射膠原酶Ⅰ 0.05 mg(0.02 ml),30 min后"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素0.05 ml(2 U);②大劑量預(yù)處理組:"內(nèi)關(guān)"上方5 mm,心包經(jīng)上注射膠原酶Ⅰ 0.1 mg(0.02 ml),30 min后"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島0.05 ml(2 U);③大劑量經(jīng)旁預(yù)處理組"內(nèi)關(guān)"穴上方5 mm,心包經(jīng)旁開2 mm處注射膠原酶Ⅰ 0.1 mg(0.02 ml),30 min后"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素0.05 ml(2 U);④對照組:"內(nèi)關(guān)"穴上方5 mm,心包經(jīng)上注射蒸餾水0.02 ml,30 min后"內(nèi)關(guān)"穴注射等量胰島素。上述各組均在預(yù)處理后即刻采各鼠眶后靜脈血,用One Touch Ⅱ血糖測定儀測血糖,并在給藥后5 min,15 min各測血糖,以觀察各組的血糖下降百分率。

(2)*"膠原酶Ⅳ預(yù)處理對小鼠"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用的影響:取禁食18 h的ICR小鼠40只,隨機分為4組,每組10只,分組及處理方式同(1)。1,2,3組分別用膠原酶Ⅳ 0.05 mg、0.1 mg、0.1 mg預(yù)處理。

(3)*"膠原酶(混合型粗品)預(yù)處理對小鼠"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用的影響:取已禁食18 h的ICR小鼠40只,隨機分為4組,每組10只,分組及處理方式同(1)。1,2,3組分別用膠原酶(混合型粗品)0.05 mg、0.1 mg、0.1 mg預(yù)處理。

2結(jié)果

2.1膠原酶Ⅰ預(yù)處理對小鼠"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用的影響結(jié)果見表1

從表1可見,用大、小劑量膠原酶Ⅰ在"內(nèi)關(guān)"穴上方同一經(jīng)上預(yù)處理能明顯降低"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后5 min的降糖作用,降糖作用明顯低于對照組(P<0.01),但與穴位上方經(jīng)旁預(yù)處理組無明顯差異,而大劑量膠元酶Ⅰ在"內(nèi)關(guān)"穴上方經(jīng)旁預(yù)處理,并不影響"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素5 min后的降糖作用。上述各組在"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素15 min后的降糖作用無明顯差異。

2.2膠原酶Ⅳ預(yù)處理對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用的影響結(jié)果見表2。

由表2可知大、小劑量膠元酶Ⅳ"內(nèi)關(guān)"穴上方同經(jīng)上預(yù)處理能明顯阻斷"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后5 min的降糖作用,該作用明顯強于用膠原酶Ⅰ相同的預(yù)處理。小劑量膠原酶Ⅳ同經(jīng)上預(yù)處理對"內(nèi)關(guān)"給藥后15 min的降糖作用仍有一定的影響。大劑量膠原酶Ⅳ"內(nèi)關(guān)"穴上方經(jīng)旁預(yù)處理對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后的降糖作用與對照組無明顯差異。

2.3混合膠原酶(粗品)預(yù)處理對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素降糖作用的影響結(jié)果見表3。

從表3可知大劑量混合膠原酶"內(nèi)關(guān)"穴上方同經(jīng)上預(yù)處理,可明顯降低"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后5 min的降糖作用,而小劑量同經(jīng)上或大劑量經(jīng)旁預(yù)處理,對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素5min后的降糖作用均無明顯影響,大、小劑量同經(jīng)上預(yù)處理組間,對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素15 min后降糖作用的影響亦有明顯差異(P<0.05)。

3討論

我們以往的研究發(fā)現(xiàn)穴位注藥不僅存在著藥物的特異性^[3],而且還存在穴位的相對特異性^[2,4]。穴位注藥后出現(xiàn)的初始藥效不僅迅速而且強大,這與穴位區(qū)藥物吸收速率、血藥濃度、靶器官藥物濃度以及神經(jīng)系統(tǒng)的完整性無相關(guān)性^[1-2],一些藥物的特殊拮抗劑不能完全拮抗該藥穴位注藥的初始藥效(如納絡(luò)酮對嗎啡之鎮(zhèn)痛)。因而研究穴位注藥后到初始藥效出現(xiàn)的中間環(huán)節(jié)即穴位藥效的作用機理既可豐富藥理學(xué)的內(nèi)容,亦可能是闡明經(jīng)絡(luò)本質(zhì)的一個途徑。

本研究應(yīng)用膠原酶(粗品)、膠原酶Ⅰ及膠原酶Ⅳ在心包經(jīng)上或心包經(jīng)旁預(yù)處理,然后觀察"內(nèi)關(guān)"穴位注射胰島素后初始降糖作用的變化,結(jié)果表明:(1)大劑量(0.1 mg/鼠)混合膠原酶"內(nèi)關(guān)"穴上方心包經(jīng)上預(yù)處理能明顯阻斷"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后的初始降血糖作用,并對15 min的降糖作用也有影響,而同劑量"內(nèi)關(guān)"穴上方心包經(jīng)旁預(yù)處理無此作用。(2)大、小劑量膠原酶Ⅰ"內(nèi)關(guān)"穴上方心包經(jīng)上預(yù)處理,能明顯降減"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后初始降糖作用,但該作用與心包經(jīng)旁預(yù)處理組無明顯差異,經(jīng)旁預(yù)處理與對照組間無明顯差異。(3)大、小劑量膠原酶Ⅳ"內(nèi)關(guān)"穴上方心包經(jīng)上預(yù)處理能完全阻斷"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素的初始降糖作用,與大劑量膠原酶Ⅳ心包經(jīng)旁預(yù)處理組及對照組差異均有極顯著意義(P<0.001)。(4)除小劑量膠原酶Ⅳ經(jīng)上預(yù)處理可影響給藥后15 min的降糖作用外,所有各預(yù)處理組對"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后15 min的降糖作用均無明顯影響。研究結(jié)果提示了"內(nèi)關(guān)"穴注射胰島素后初始降糖作用與膠原Ⅳ有著密切關(guān)系,表明穴位給藥后在未被吸收或血濃度未達(dá)有效濃度前其藥物信息傳遞可能通過膠原Ⅳ介導(dǎo)的。至于膠原Ⅳ產(chǎn)生何種理化改變,是否會釋放某種遞質(zhì)有待進(jìn)一步研究。

近十幾年來的研究表明,細(xì)胞外間質(zhì)(ECM)如膠原蛋白等絕不僅僅是細(xì)胞外的一種惰性填充物,這類大分子具有活躍的生物活性,它不僅參與了細(xì)胞的運動、增殖和分化等細(xì)胞行為,而且介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與生物分子間的作用,從而在胚胎發(fā)育和各種生理及病理過程中發(fā)揮重要作用^[5]。膠原蛋白是ECM的主要組成成分,分布于幾乎一切組織中^[6]。根據(jù)膠原存在的部位和可能的作用,我們選擇Ⅰ、Ⅳ型膠原作為研究對象,從實驗結(jié)果來看,心包經(jīng)上穴位注藥后信息傳遞與Ⅳ型膠原(基膜膠原)有著密切關(guān)系,至于該膠原受刺激后通過何種信息傳遞進(jìn)行細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)外信息交換有待進(jìn)一步研究,此外,不同經(jīng)脈線上的信息傳遞是否都與Ⅳ型膠原有關(guān)亦有待進(jìn)一步研究。

對此進(jìn)行更深入的研究,可以進(jìn)一步了解穴位受刺激(如針、灸、藥物)后其信息傳遞的物質(zhì)基礎(chǔ)是什么,不同經(jīng)脈線上信息傳遞物質(zhì)構(gòu)成成分間是否存在著質(zhì)或量方面的差異,這既有利于了解穴位注藥--這一新的給藥途徑藥理作用機理的特點,為傳統(tǒng)藥理學(xué)增添新的內(nèi)容,又可為經(jīng)穴相對特異性、經(jīng)穴歸經(jīng)理論提供新的理論基礎(chǔ)。

4參考文獻(xiàn)

1邵政一,劉祖舜,丁斐,等."內(nèi)關(guān)"穴位注射胰島素對去臂叢神經(jīng)小鼠STZ蔡悄蠆⌒∈蟮慕堤親饔眉捌潿砸雀哐糖素拮抗作用的影響.現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),1987;4(4):7.

2邵政一,凌祥,周愛玲,等.經(jīng)穴類半導(dǎo)體性的藥理學(xué)實驗研究.中國針灸,1998;18(2):121

3周愛玲.小鼠穴位注藥的藥物特異性初探.南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1991,11(3):207

4周愛玲,邵政一,劉祖舜.小鼠穴位特異性本質(zhì)的繼續(xù)探討.針刺研究,1994:19(2):60

5劉秉慈.細(xì)胞外間質(zhì).生理科學(xué)進(jìn)展,1996;27(3):221

6Van der Rest,M.and Garrone.R.Gollagen Family of Protein.FASEB.J.1991;5:2814

(收稿日期:19990326,齊淑蘭發(fā)稿)