高效液相色譜法測定小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量及均勻度

曹玉明

(安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司，安徽 宣城　242000)

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高效液相色譜法測定小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量及均勻度

曹玉明

(安徽新和成皖南藥業(yè)有限公司，安徽 宣城242000)

目的建立小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量及均勻度的檢測方法。方法采用高效液相色譜法對小兒氨酚黃那敏顆粒中的馬來酸氯苯那敏含量及均勻度進(jìn)行測定。以shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱為固定相；甲醇-0.01 mol·L-1辛烷磺酸鈉溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0，63∶37)為流動相；流速為1 mL·min-1；檢測波長為261 nm；進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果馬來酸氯苯那敏在7.928～31.712 mg·L-1的范圍與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.999 92。樣品中馬來酸氯苯那敏的平均回收率為99.8%(n=9,RSD=0.83%)。用該文建立的方法對5個批次小兒氨酚黃那敏顆粒中的馬來酸氯苯那敏含量及均勻度進(jìn)行了測定，其含量均為標(biāo)示量的90.0%～110.0%,均勻度符合規(guī)定。結(jié)論該方法準(zhǔn)確可靠，可作為小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量及均勻度的測定方法。

氯苯那敏/化學(xué);醋氨酚;色譜法,高壓液相

小兒氨酚黃那敏顆粒為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化藥地標(biāo)升國標(biāo)第3冊收載的品種，該藥為感冒用藥類非處方藥藥品,劑型為可溶性顆粒劑。目前該藥為多數(shù)省份納入基本藥物管理的非基本藥物。其主要含有對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏和人工牛黃，用于緩解兒童普通感冒及流行性感冒所引起的發(fā)熱、頭痛、打噴嚏、流鼻涕、咽痛等癥狀[1-4]。由于臨床療效確切，副作用小，市場需求量較大，現(xiàn)國內(nèi)有近三百多家藥企生產(chǎn)，其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)[5]為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0214)-2002(試行)。該標(biāo)準(zhǔn)只規(guī)定了對乙酰氨基酚的含量測定，無抗組胺藥馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度測定法。臨床上馬來酸氯苯那敏的副作用主要為困倦、思睡、疲勞等，過量時可出現(xiàn)先中樞抑制，后中樞興奮癥狀，甚至可導(dǎo)致抽搐、驚厥等表現(xiàn)。兒童易發(fā)生焦慮、入睡困難和神經(jīng)過敏[6]。由于該藥品處方中所含的馬來酸氯苯那敏較少，在生產(chǎn)制備過程中可能導(dǎo)致混合不均勻，另該標(biāo)準(zhǔn)不完善，不能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，而產(chǎn)生一定的安全性問題。通過對小兒氨酚黃那敏顆粒中馬來酸氯苯那敏含量及均勻度測定方法的研究,完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有效控制生產(chǎn)工藝過程中混合均勻性，保證該產(chǎn)品的安全有效。

1　儀器與試藥

1.1儀器UV-2450島津紫外分光光度；LC-20A島津高效液相色譜儀，UV檢測器，N2000色譜工作站；METTLER TOLEDO電子天平。

1.2試藥馬來酸氯苯那敏對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號：100047-201403)；小兒氨酚黃那敏顆粒(共5批，批號：141001、141002、141003、K1403211、K1403212)；輔料：蔗糖(由湖南湘易康制藥提供，批號：140902)乙醇(由湖南爾康制藥有限公司提供，批號：140805)；甲醇、辛烷磺酸鈉為色譜純；枸櫞酸、三乙胺為分析純；水為重蒸餾水。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱；流動相：甲醇-0.01 mol·L-1辛烷磺酸鈉溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0)；流速：1 mL·min-1；柱溫：25 ℃；檢測波長為261 nm；進(jìn)樣量為10 μL。馬來酸氯苯那敏色譜峰與對乙酰氨基酚色譜峰分離度應(yīng)>2.0；理論板數(shù)按馬來酸氯苯那敏對照品色譜峰計(jì)算不低于2 000。檢則波長確定見圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品20 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻,作為對照品溶液(0.019 96 g·L-1)。

注： 取馬來酸氯苯那敏對照品，加水制成每1 mL含0.2 mg的溶液，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄IV A)在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。

圖1紫外檢測波長確定圖

2.2.2供試品溶液取本品，精密稱取適量(約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏0.5 mg)，置25 mL量瓶中，加適量水置水浴加熱使溶解，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液取其他原輔料，按處方制備不含馬來酸氯苯那敏的陰性樣品，依“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性對照溶液，作專屬性考察。

2.3測定法精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。理論板數(shù)按馬來酸氯苯那敏色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000，馬來酸氯苯那敏峰保留時間為(7.8±1.0) min,其色譜峰與對乙酰氨基酚色譜峰的分離度應(yīng)>2.0。見圖2。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1專屬性考察取對照品溶液、供試品溶液以及陰性對照溶液，按測定法進(jìn)樣測定，色譜圖見圖2。在陰性對照溶液色譜圖中與馬來酸氯苯那敏對照品相應(yīng)保留時間上無明顯色譜峰。

2.4.2線性關(guān)系考察取馬來酸氯苯那敏對照品溶液，用水稀釋制成濃度分別為7.928、11.892、15.856、19.820、23.784、27.748、31.712 mg·L-1的溶液。分別精密吸取上述7種溶液各10 μL注入液相色譜儀，以濃度為X軸，峰面積為Y軸，進(jìn)行線性回歸。得馬來酸氯苯那敏回歸方程：Y=7.007 816×104X+5.044 197×104(r=0.999 92)。結(jié)果表明馬來酸氯苯那敏進(jìn)樣濃度在7.928～31.712 mg·L-1的范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.3精密度試驗(yàn)取“2.4.2”項(xiàng)下的低、中、高濃度的溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為10 μL,以峰面積計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)，考察本系統(tǒng)的精密度，結(jié)果見表1，試驗(yàn)結(jié)果表明儀器的精密度良好。

A.對照品溶液

B.供試品溶液

C.陰性對照溶液

項(xiàng)目線性方程RSD/%低濃度1.255×106±4.433×1030.35中濃度1.470×106±5.503×1030.37高濃度1.762×106±1.094×1040.62

2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)取小兒氨酚黃那敏顆粒(批號：141001)，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣分析，計(jì)算出該顆粒中馬來酸氯苯那敏含量平均值為98.8%(相對標(biāo)示量)，RSD為0.78%，結(jié)果見表2。試驗(yàn)結(jié)果說明該方法重復(fù)性良好。

表2　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液和對照溶液，室溫自然光條件下放置，在0～12 h內(nèi)，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別于0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。以峰面積考察其日內(nèi)穩(wěn)定性。計(jì)算其峰面積平均值為1 375 319，RSD為0.99%,結(jié)果表明，供試品溶液日內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.6加樣回收率試驗(yàn)取同批均質(zhì)樣品(批號：141001)，照“2.3”項(xiàng)下測定本品的含量。再取上述均質(zhì)樣品適量，共9份，精密稱定，分別置25 mL量瓶中，分別精密加入濃度為0.052 2 g·L-1的馬來酸氯苯那敏對照品溶液3、5、7 mL，各3份，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，本法測定馬來酸氯苯那敏含量回收率較高，方法準(zhǔn)確度較高。

表3　回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5樣品測定取小兒氨酚黃那敏顆粒樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件檢測，結(jié)果見表4。

表4　樣品測定結(jié)果

3　討論

3.1流動相選擇小兒氨酚黃那敏顆?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中只有馬來酸氯苯那敏的鑒別試驗(yàn)，無法對其進(jìn)行定量控制。《美國藥典》收載的馬來酸氯苯那敏[7]含量測定液相條件中流動相為堿性流動相，pH值超過了12，因其有一定的腐蝕性，不適合普通的C18柱。參考《中國藥典》2010年版二部萘敏維滴眼液藥品標(biāo)準(zhǔn)[8]中馬來酸氯苯那敏含量測定色譜條件，但其使用的色譜柱為C8柱，在一般企業(yè)較少配備，以C18柱較常用。因此選擇通用的C18柱進(jìn)行液相條件摸索[9-11]。采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱，分別采用甲醇-pH 3.3的0.1 mol·L-1磷酸二氫鈉(30∶70)、甲醇-pH 3.3磷酸二氫鉀(15∶85)、甲醇-pH 3.0辛烷磺酸鈉溶液(取辛烷磺酸鈉2.16 g，枸櫞酸8.3 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0)(65∶35)3種流動相；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫；檢測波長：215或261 nm；靈敏度：0.001AUFS，分別進(jìn)樣檢測。結(jié)果在前兩種流動相下陰性樣品在此條件下有干擾，主峰保留時間太短，或出現(xiàn)雙峰，分離度不好，拖尾嚴(yán)重；后一種在261 nm條件下主峰保留時間較為靠前，陰性樣品有干擾。因此，應(yīng)調(diào)整流動相比例，使陰性樣品不干擾，主峰保留時間適中。

3.2調(diào)整流動相采用shimpack VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,以甲醇-pH 3.0辛烷磺酸鈉溶液(取辛烷磺酸鈉2.16 g，枸櫞酸8.3 g，加水溶解并稀釋至1 000 mL，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0)(63∶37),在其它條件相同的情況下,分別測定供試品溶液、對照品溶液和陰性溶液。試驗(yàn)結(jié)果表明其陰性不干擾，主峰保留時間良好，峰形較好，且不拖尾。

3.3檢測波長的確定取對照品溶液進(jìn)行全波長掃描，在215 nm和261 nm處有較高吸光度，本法選取261 nm作為檢測波長，一方面是參照美國藥典相關(guān)測定，另一方面是因?yàn)樵诖颂帨y定時陰性無干擾。而在215 nm處測定時，陰性樣品對主峰有一定的干擾。

3.4其他馬來酸氯苯那敏系抗組胺藥，對感冒癥狀的改善起著非常重要的作用，但也會出現(xiàn)頭暈、嗜睡等不良反應(yīng)。小兒氨酚黃那敏顆粒是由乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏等組成的復(fù)方制劑，是臨床常用的小兒感冒藥?？紤]到小兒臨床用藥的安全性問題，本試驗(yàn)對該藥品中的馬來酸氯苯那敏含量和均勻度進(jìn)行控制，既有利于企業(yè)在投料方面的準(zhǔn)確性控制，又有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量。本試驗(yàn)建立的HPLC法對5批樣品進(jìn)行了測定，結(jié)果顯示有些批次的馬來酸氯苯那敏含量偏低，均勻度值偏大，這可能與原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對此成分無含量控制有關(guān)。本檢測方法的建立，有利于提高和控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

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Determination of the content and uniformity of dosage units in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules by HPLC

CAO Yuming

(AnhuiNHUPharmaceuticalCo.,Ltd,Xuancheng,Anhui242000,China)

ObjectiveTo develop a method for the chlorphenamine maleate detection in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules.MethodsHPLC was adopted for the quantitative and uniformity determination of chlorphenamine maleate.A shimpack VP-ODS column(150 mm × 4.6 mm,5 μm) was used as the stationary phase,with a mobile phase consisting of methanol and 0.01 mol·L-1sodium octane sulfonate solution (adjusted to pH3.0 with triethylamine,63∶37).The flow rate was 1 mL·min-1,the detection wavelength was 261nm and the injection volume was 10 μL.ResultsConsiderable linear relationship was observed when chlorphenamine maleate ranged from 7.928 to 31.712 mg·L-1(r=0.999 92).The average recovery of chlorphenamine maleate was 99.8%(n=9,RSD=0.83%).Five batches of Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules were analyzed under the established method with results ranging from 90.0% to 110.0%.ConclusionsThe developed method is accurate and reliable,which could be used for the quality control of chlorphenamine maleate in Pediatric Paracetamol,Artificial Cow-bezoar and Chlorphenamine Maleate Granules.

Chlorpheniramine/chemistry;Acetaminophen;Chromatography,high pessure liquid

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.018

2016-03-25，

2016-04-29)