肝星狀細胞通過胱硫醚γ-裂解酶/硫化氫（CSE/H2S）調(diào)控肝細胞癌細胞凋亡的作用及其機制

摘要：目的肝星狀細胞（HSC）和硫化氫（H2S）信號分子作為肝細胞癌（HCC）微環(huán)境中重要的組分，參與調(diào)控HCC的發(fā)生發(fā)展等多種生物學(xué)進程。本研究通過HSC與肝癌細胞系共培養(yǎng)，探討HSC通過分泌H2S參與調(diào)控肝癌細胞凋亡的作用及其機制。方法以HSC細胞系（LX-2）及肝癌細胞系（HepG2、PLC/PRF/5）為研究對象。RT-qPCR和Western Blot（WB）法檢測LX-2中H2S關(guān)鍵合成酶——胱硫醚γ-裂解酶（CSE）mRNA及表達水平；ELISA測定上清液LX-2產(chǎn)生的H2S濃度；二代測序、細胞免疫熒光、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）及WB檢測H2S（內(nèi)源性和外源性）作用HepG2和PLC/PRF/5細胞后，JNK/JunB-TNFSF14信號通路基因、結(jié)合位點及相關(guān)蛋白。Transwell小室將LX-2分別與HepG2和PLC/PRF/5共培養(yǎng)，CCK-8和流式細胞術(shù)檢測肝癌細胞的細胞活力、凋亡，WB測定H2S-TNFSF14信號通路相關(guān)蛋白。所有細胞實驗均重復(fù)3次。計量資料兩組間比較采用成組t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析或重復(fù)測量方差分析，進一步兩兩比較采用Dunnett-t檢驗。結(jié)果LX-2主要通過CSE合成H2S，LX-2培養(yǎng)上清液中H2S濃度隨著時間延長逐漸增加［（22.89±0.08）pg/mL vs（28.29±0.15）pg/mL vs（36.19±1.90）pg/mL，F(xiàn)=79.63，Plt;0.05］。LX-2中CSE mRNA水平顯著高于CBS mRNA和MPST mRNA（1.008±0.13 vs 0.320±0.014 vs 0.05±0.02，F(xiàn)=80.84，Plt;0.05）。當(dāng)CSE被炔丙基甘氨酸（PPG）抑制之后，隨著PPG濃度增加，H2S濃度下降（Plt;0.05）。LX-2分別與HepG2、PLC/PRF/5共培養(yǎng)，隨著培養(yǎng)時間延長，HepG2（87.48%±0.82%vs 70.48%±0.641%vs 52.89%±0.57%vs 45.20%±0.69%，F(xiàn)=1 517.13，Plt;0.001）和PLC/PRF/5（92.41%±0.48%vs 74.10%±0.73%vs 53.70%±0.60%vs 44.00%±0.27%，F(xiàn)=2 626.21，Plt;0.001）細胞活力降低；凋亡增加（HepG2：12.88%±0.64%vs 15.5%±0.16%vs 18.43%±0.37%vs 13.01%±0.58%，F(xiàn)=142.15，Plt;0.001；PLC/PRF/5：8.51±0.05 vs 12.80±0.33 vs 15.59±0.21 vs 10.72±0.30，F(xiàn)=676.40，Plt;0.001），第3天最顯著。二代測序顯示，內(nèi)源性H2S（LX-2產(chǎn)生）和NaHS（外源性H2S供體）參與調(diào)控HepG2中多種基因表達。NaHS和LX-2通過釋放H2S，激活肝癌細胞中JNK/JunB信號通路、上調(diào)凋亡基因TNFSF14表達，且p-JunB與TNFSF14基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域結(jié)合增加。結(jié)論在肝癌微環(huán)境中，HSC通過信號分子CSE/H2S，激活了肝癌細胞中JNK/JunB信號通路，TNFSF14表達增加，從而促進了肝癌細胞凋亡。

關(guān)鍵詞：癌，肝細胞；肝星狀細胞；硫化氫

基金項目：中德研究小組項目（GZ1517）

Role and mechanism of hepatic stellate cells in regulating the apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through cystathionineγ-lyase/hydrogen sulfide

SHANG Hongwei1，MA Yanan2，3，LU Xin1，LYU Lingna2，DING Huiguo2.（1.School of Basic Medical Sciences，Capital Medical University，Beijing 100069，China；2.Department of Hepatology and Gastroenterology，Beijing YouAn Hospital，Capital Medical University，Beijing 100069，China；3.Oncology Center，Shanxi Bethune Hospital，Taiyuan 030000，China）

Corresponding author：DING Huiguo，dinghuiugo@ccmu.edu.cn（ORCID：0000-0002-8716-4926）

Abstract：Objective As important components in the microenvironment of hepatocellular carcinoma（HCC），hepatic stellate cells（HSCs）and hydrogen sulfide（H2S）participate in various biological processes that regulate the development and progression of HCC.Through the co-culture of HSCs and HCC cells，this article aims to investigate the role and mechanism of HSCs in regulating the apoptosis of HCC cells by secreting H2S.Methods The HSC cell line（LX-2）and HCC cell lines（HepG2 and PLC/PRF/5）were used for experiment.RT-qPCR and Western Blot（WB）were used to measure the mRNA and protein expression levels of cystathionineγ-lyase（CSE），a key synthase for H2S；ELISA was used to measure the concentration of H2S in supernatant；next-generation sequencing，cell immunofluorescence assay，chromatin immunoprecipitation（ChIP），and WB were used to measure the JNK/JunB-TNFSF14 signaling pathway genes，binding sites，and related proteins after HepG2 cells were treated by H2S.LX-2 cells were co-cultured with HepG2 or PLC/PRF/5 cells in a Transwell chamber；CCK-8 assay and flow cytometry were used to measure the viability and apoptosis of HCC cells，and WB was used to measure the H2S-TNFSF14 signaling pathway-related proteins.All cell experiments were repeated three times.The independent-samples t test was used for comparison of continuous data between two groups；a one-way analysis of variance or the analysis of variance with repeated measures was used for comparison between multiple groups，and the Dunnett-t test was used for further comparison between two groups.Results LX-2 cells synthesized H2S mainly through CSE，and the concentration of H2S in supernatant of LX-2 cells gradually increased over time（22.89±0.08 pg/mL vs 28.29±0.15 pg/mL vs 36.19±1.90 pg/mL，F(xiàn)=79.63，Plt;0.05）.In LX-2 cells，the mRNA expression level of CSE was significantly higher than that of CBS and MPST（1.008±0.13 vs 0.320±0.014 vs 0.05±0.02，F(xiàn)=80.84，Plt;0.05）.When CSE was inhibited by PPG，the concentration of H2S decreased with the increase in the concentration of PPG（Plt;0.05）.LX-2 cells were co-cultured with HepG2 or PLC/PRF/5 cells，and over the time of culture，there were significant reductions in the viability of HepG2 cells（87.48%±0.82%vs 70.48%±0.641%vs 52.89%±0.57%vs 45.20%±0.69%，F(xiàn)=1 517.13，Plt;0.001）and PLC/PRF/5 cells（92.41%±0.48%vs 74.10%±0.73%vs 53.70%±0.60%vs 44.00%±0.27%，F(xiàn)=2626.21，Plt;0.001）and significant increases in the apoptosis of HepG2 cells（12.88%±0.64%vs 15.5%±0.16%vs 18.43%±0.37%vs 13.01%±0.58%，F(xiàn)=142.15，Plt;0.001）and PLC/PRF/5 cells（8.51±0.05 vs 12.80±0.33 vs 15.59±0.21 vs 10.72±0.30，F(xiàn)=676.40，Plt;0.001），with the most significant changes on day 3.Next-generation sequencing showed that endogenous H2S and NaHS（endogenous H2S donor）were involved in regulating the expression of various genes in HepG2 cells.By releasing H2S，NaHS and LX2 activated the JNK/JunB signaling pathway and upregulated the expression of the apoptosis gene TNFSF14 in HCC cells，with increased binding between p-JunB and the transcriptional regulatory regions of the TNFSF14 gene.Conclusion In the microenvironment of HCC，HSCs activate the JNK/JunB signaling pathway in HCC cells through the signal molecules CSE/H2S，and there is an increase in the expression of TNFSF14，thereby promoting the apoptosis of HCC cells.

Key words：Carcinoma，Hepatocellular；Hepatic Stellate Cells；Hydrogen Sulfide

Research funding：Sino-German Cooperation Group（GZ1517）

肝星狀細胞（HSC）作為肝細胞癌（HCC）微環(huán)境中最主要的竇周細胞，在HCC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用［1-2］。體外研究［3-4］表明，在HSC與HCC細胞的共培養(yǎng)體系中，HSC通過分泌生長因子、細胞外基質(zhì)蛋白和金屬基質(zhì)蛋白酶誘導(dǎo)腫瘤細胞向惡性表型轉(zhuǎn)化，同時增強肝癌細胞的侵襲與遷移能力。在皮下移植異種裸鼠肝癌模型［5］中發(fā)現(xiàn)，HSC通過促進HCC細胞增殖和抑制細胞凋亡，從而促進腫瘤生長。研究［6-7］還發(fā)現(xiàn)，HSC通過分泌血管內(nèi)皮生長因子、血小板源性生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子等生長因子，促進腫瘤的血管生成。硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）是繼一氧化碳和一氧化氮后第3種重要的內(nèi)源性氣體信號分子，參與氧化應(yīng)激、細胞增殖與凋亡、血管擴張、血管再生、炎癥等多種病理生理過程［8］。內(nèi)源性H2S由半胱氨酸和同型半胱氨酸經(jīng)胱硫醚γ-裂解酶（cystathionineγ-lyase，CSE）、胱硫醚β-合酶（cystathionineβ-synthase，CBS）及3-巰基丙酮酸轉(zhuǎn)硫酶（3-mercapto-pyruvate sulphurtransferase，MPST）合成產(chǎn)生［9］。前期研究［10］發(fā)現(xiàn)，外源性H2S供體——NaHS，通過PI3K/Akt/mTOR信號通路誘導(dǎo)肝癌細胞自噬，從而促進了細胞凋亡，抑制細胞增殖與遷移。然而，在肝癌微環(huán)境中HSC是否通過H2S參與調(diào)控HCC的生物學(xué)過程尚不明確。因此，本研究通過HSC與肝癌細胞系共培養(yǎng)，探討HSC通過分泌H2S參與調(diào)控肝癌細胞凋亡的作用及其機制。

1材料與方法

1.1材料DMEM細胞培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素-鏈霉素、CSE抑制劑——炔丙基甘氨酸（propargylglycine，PPG）及JNK/JunB抑制劑——SP600125試劑購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；H2S檢測ELISA試劑盒購自南京金益柏生物科技有限公司；RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄及SYBR等RT-qPCR試劑購自寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司；Transwell小室購自美國康寧公司；CCK-8試劑盒購自美國Abmole奧默生物公司；Annexin V-FITC/PI細胞凋亡試劑盒購自上海翊圣生物科技有限公司；人源β-actin、GAPDH、JNK、JunB、p-JNK/JunB抗體和二抗、ChIP試劑盒購自美國Cell Signaling technology公司；腫瘤壞死因子超家族成員-14（tumor necrosis factor superfamily member-14，TNFSF14）多克隆抗體購于美國Affinity Biosciences公司。

1.2細胞培養(yǎng)肝星狀細胞系（LX-2）及肝癌細胞系（HepG2、PLC/PRF/5），用含10%胎牛血清及1%的青霉素-鏈霉素混合液的DMEM培養(yǎng)基，置于37℃，5%（體積分數(shù)）CO2恒溫細胞孵育箱內(nèi)培養(yǎng)。Transwell小室建立共培養(yǎng)體系，上室接種LX-2，下室接種HepG2或PLC/PRF/5，按照說明書操作。所有細胞實驗重復(fù)3次。

1.3 ELISA定量測定H2S LX-2產(chǎn)生的H2S濃度及NaHS釋放的H2S，按照說明書進行操作。在酶標(biāo)板對應(yīng)的孔中分別加入標(biāo)品及待檢測的LX-2培養(yǎng)上清液和NaHS，隨后進行孵育和洗板，加入顯色液37℃孵育15 min，加入終止液終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀450 nm波長測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算所測樣本中H2S濃度。

1.4 RNA提取、二代測序及RT-q PCR Trizol法提取總RNA。取1μg總RNA，按照Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，SYBR Green Master Mix說明書配置20μL RT PCR體系，ABI 7500進行RT-q PCR。所需的引物序列見表1。LX-2與HepG2共培養(yǎng)（LX-2共培養(yǎng)組）、NaHS處理HepG2（NaHS處理組）及對照組（單獨HepG2培養(yǎng)）提取的HepG2細胞總RNA送至北京諾禾致源科技股份有限公司進行轉(zhuǎn)錄組二代測序分析，對差異基因［以|log2（fold change）|≥1為差異表達基因的標(biāo)準(zhǔn)］進行聚類分析和Veen分析。

1.5蛋白提取及Western Blot（WB）檢測取LX-2共培養(yǎng)組及NaHS處理組的HepG2細胞，PBS清洗2次，隨后在10 cm2培養(yǎng)皿中加入1 mL RAPI裂解液，冰上裂解20 min，轉(zhuǎn)移裂解液到EP管中，4℃，12 000×g離心30 min，上清即為細胞總蛋白。BCA試劑盒對提取的蛋白進行定量分析，加入對應(yīng)體積的蛋白上樣緩沖液后置于100℃金屬浴5 min，使蛋白變性，用于后續(xù)WB檢測。SDS-PAGE膠用于分析所提取的蛋白，取20μg蛋白上樣電泳，轉(zhuǎn)膜，牛奶封閉，隨后加入對應(yīng)的抗體4℃孵育過夜，將孵育好的膜放到對應(yīng)的二抗中，室溫孵育1 h后，加入化學(xué)發(fā)光液測定和分析。

1.6 CCK-8檢測細胞活力將生長狀態(tài)良好的細胞接種在96孔板，LX-2分別與HepG2、PLC/PRF/5共培養(yǎng)1、2、3、4天，單獨HepG2、PLC/PRF/5培養(yǎng)分別作為對照組。按照說明書，每孔加入10μL CCK-8試劑，隨后置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1 h后，酶標(biāo)儀450 nm測定吸光度值。細胞活力計算：細胞活力（%）=［A450（樣本－空白）］/［A450（對照－空白）］×100%。

1.7流式細胞術(shù)測定細胞凋亡將處理好的細胞制備成為單細胞懸液，按照Annexin V-FITC/PI細胞凋亡試劑盒說明書，加入5μL Annexin V孵育，再加入5μL PI避光孵育，F(xiàn)ACS流式細胞儀（BD公司）進行檢測。

1.8細胞免疫熒光染色細胞均勻接種到已放入無菌蓋玻片的24孔板中，NaHS處理HepG2細胞0、1、2、8、24 h。取處理好的細胞，加入1 mL 4%多聚甲醛固定，隨后進行透膜處理，加入1%BSA稀釋抗體p-JunB（1∶500），4℃孵育過夜。1%BSA稀釋FITC標(biāo)記的熒光二抗（1∶500）避光條件下，室溫孵育1 h。DAPI染核及封片，熒光顯微鏡下采集圖像，Image J軟件分析目的蛋白平均免疫熒光強度。

1.9染色質(zhì)免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）LX-2分別與HepG2和PLC/PRF/5共培養(yǎng)，以及NaHS分別處理HepG2和PLC/PRF/5細胞后，ChIP方法測定p-JunB與TNFSF14啟動子結(jié)合力。WB測定HepG2和PLC/PRF/5細胞核中p-JunB表達，應(yīng)用4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（4'，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）對細胞核DNA染色（藍色）和FITC標(biāo)記的抗體測定細胞核p-JunB表達（綠色）。LX-2與NaHS處理后的HepG2和PLC/PRF/5細胞用4%多聚甲醛固定10 min，核酸酶將DNA特異性的消化為DNA片段，隨后加入JunB、p-JunB抗體，從而特異性的富集目的蛋白質(zhì)和DNA復(fù)合體，通過對復(fù)合體進行富集純化，收集DNA用于PCR檢測。

1.10統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以±s表示，兩組間比較采用成組t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析或重復(fù)測量方差分析，進一步兩兩比較采用Dunnett-t檢驗。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 LX-2通過CSE產(chǎn)生H2S LX-2培養(yǎng)上清液中H2S濃度隨著時間延長逐漸增加［（22.89±0.08）pg/mL vs（28.29±0.15）pg/mL vs（36.19±1.90）pg/mL，F(xiàn)=79.63，Plt;0.05］（圖1a）。LX-2中CSE mRNA水平顯著高于CBS mRNA和MPST mRNA（1.008±0.13 vs 0.320±0.014 vs 0.05±0.02，F(xiàn)=80.84，Plt;0.05）（圖1b）。在LX-2中加入不同劑量PPG后，隨著PPG濃度增加，H2S濃度下降（Plt;0.05）（圖1c）。PPG特異性、濃度依賴性的降低CSE mRNA及蛋白水平（圖1d、e）。

2.2 LX-2抑制肝癌細胞活力、促進凋亡LX-2分別與HepG2、PLC/PRF/5共培養(yǎng)，隨著培養(yǎng)時間延長，HepG2（87.48%±0.82%vs 70.48%±0.641%vs 52.89%±0.57%vs 45.20%±0.69%，F(xiàn)=1 517.13，Plt;0.001）和PLC/PRF/5（92.41%±0.48%vs 74.10%±0.73%vs 53.70%±0.60%vs 44.00%±0.27%，F(xiàn)=2 626.21，Plt;0.001）細胞活力降低（圖2a、b）；凋亡增加（HepG2：12.88%±0.64%vs 15.5%±0.16%vs 18.43%±0.37%vs 13.01%±0.58%，F(xiàn)=142.15，Plt;0.001；PLC/PRF/5：8.51±0.05 vs 12.80±0.33 vs 15.59±0.21 vs 10.72±0.30，F(xiàn)=676.40，Plt;0.001），第3天最顯著（圖2c、d）。

2.3內(nèi)源性和外源性H2S調(diào)控肝癌細胞多種基因LX-2與HepG2共培養(yǎng)及NaHS處理HepG2后，轉(zhuǎn)錄組測序顯示分別上調(diào)1 047和1 183個基因，共同上調(diào)659個基因；分別下調(diào)997和1 144個基因，共同下調(diào)342個基因（圖3a）。其中，30個變化最大的基因，包括TGM2、PDE2A、AQP7P1、SOCS3、B3GNT3、LGALS7B、CPNE7、TCAF2、AXL、CD3D、BEAN1、KIF26B、SLC1A7、TFF1、IGFBP3、ADAMTS16、ACTA1、SLC2A5、SERPINE2、KCNMB4、LSP1、A4GALT、TNFSF14、NPPB、MUC5B、NKAIN4、TRAF5、PFKP、EHD2、MTMR11（圖3b）。選擇促凋亡基因TNFSF14進行分析，與對照組相比，NaHS處理組TNFSF14基因增加約2.8倍，LX-2共培養(yǎng)組TNFSF14基因增加約2倍（Plt;0.05）（圖3c）。

2.4 H2S通過激活JNK/JunB信號通路調(diào)控TNFSF14轉(zhuǎn)錄ChIP實驗發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，NaHS處理的HepG2和PLC/PRF/5細胞中p-JunB與TNFSF14基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域結(jié)合增加（圖4a）；p-JunB定位于細胞核中，NaHS作用1 h熒光強度開始升高，8 h達到高值（圖4b）；且與WB結(jié)果一致（圖4c）。PPG干預(yù)后，HepG2和PLC/PRF/5胞核蛋白p-JunB表達明顯下降（圖4d）；經(jīng)SP600125（JNK/JunB抑制劑）處理后，顯示JNK/JunB-TNFSF14信號通路被抑制。NaHS處理也顯示了相似結(jié)果（圖4e）。延長NaHS處理時間，細胞核p-JunB表達增加，但JunB表達無明顯變化。結(jié)果提示，LX-2和NaHS通過釋放H2S，激活JNK/JunB信號通路調(diào)控TNFSF14基因轉(zhuǎn)錄。

3討論

第3個重要的內(nèi)源性氣體信號分子H2S自1992年被發(fā)現(xiàn)，較多研究［11-12］證實了H2S及其合成酶的多種功能，參與了血管擴張、血管生成、炎癥免疫、氧化應(yīng)激和細胞凋亡與自噬的調(diào)控等過程，在腫瘤和非腫瘤性疾病，特別是心血管疾病的病理生理中具有重要作用。因此，H2S及其合成酶可能是治療的靶點。但是，CSE/H2S在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究較少［13］。由肝細胞及肝竇周細胞，包括HSC、肝竇內(nèi)皮細胞、Kuffer細胞、肝癌細胞和細胞外基質(zhì)等組成的復(fù)雜腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment，TME）中，HSC及信號分子H2S促進肝癌細胞凋亡的機制尚未闡明［14］。本研究發(fā)現(xiàn)，HSC主要通過CSE產(chǎn)生信號分子H2S，激活了肝癌細胞中的JNK/JunB信號通路，上調(diào)TNFSF14基因，TNFSF14表達增加，從而促進了肝癌細胞的凋亡，發(fā)揮抗腫瘤作用。Han等［15］發(fā)現(xiàn)，HepG2中TNFSF14下調(diào)Bcl-2和survivin，通過線粒體及p53獨立途徑，誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡。體外研究［16］表明，在HepG2和SMMC-7721細胞中，TNFSF14與LT-βR結(jié)合，激活caspase-9和caspase-3，抑制STAT3磷酸化下調(diào)Bcl-XL表達，進而誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡，提示線粒體途徑也是TNFSF14誘導(dǎo)細胞凋亡的關(guān)鍵因素。由此可見，TNFSF14通過線粒體凋亡途徑和死亡受體凋亡途徑等，促進肝癌細胞凋亡。此外，TNFSF14還表達于免疫細胞，如活化T淋巴細胞，未成熟樹突狀細胞和活化自然殺傷細胞，TNFSF14信號轉(zhuǎn)導(dǎo)對T淋巴細胞激活和誘導(dǎo)細胞凋亡具有重要作用［17］。TNFSF14也通過激活抗腫瘤免疫效應(yīng)，間接殺傷腫瘤細胞和觸發(fā)腫瘤細胞凋亡，表現(xiàn)出強大的免疫抗腫瘤活性，在多種不同的腫瘤中發(fā)揮抗瘤作用［18］。因此推測，在肝癌微環(huán)境中，H2S通過激活肝癌細胞中凋亡基因TNFSF14表達及多種細胞凋亡信號途徑，促進肝癌細胞凋亡。

TNFSF14誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡的分子機制尚不清楚。本研究ChIP實驗證明，無論是在HepG2還是在PLC/PRF/5中，轉(zhuǎn)錄因子p-JunB均可與TNFSF14基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域結(jié)合，且H2S增強了p-JunB與TNFSF14基因啟動子的結(jié)合能力。H2S生成酶CSE抑制劑——PPG和p-JNK抑制劑SP600125，均顯著抑制了H2S對JNK/JunB信號通路的激活，導(dǎo)致TNFSF14表達降低。上述結(jié)果提示H2S在調(diào)節(jié)肝癌細胞TNFSF14表達中具有重要作用。細胞免疫熒光和WB也證明了外源性H2S供體NaHS及HSC合成的內(nèi)源性H2S，促進了肝癌細胞p-JunB的表達及核轉(zhuǎn)位。JunB作為Jun家族的重要成員之一，是轉(zhuǎn)錄因子AP-1（轉(zhuǎn)錄激活蛋白-1）的主要成分，對各種刺激如輻射、應(yīng)激及生長信號等作出生理或病理應(yīng)答，參與細胞增殖與分化、轉(zhuǎn)化、凋亡、炎癥等過程，在腫瘤的形成、轉(zhuǎn)移和侵襲中發(fā)揮重要作用［19］。也有研究［20］發(fā)現(xiàn)，JNK/JunB促進HepG2凋亡并抑制了其增殖與侵襲能力。因此，本研究首次闡明了TNFSF14啟動子的轉(zhuǎn)錄活性受到轉(zhuǎn)錄因子JunB的調(diào)控，H2S可激活轉(zhuǎn)錄因子JunB，促進p-JunB的核轉(zhuǎn)位，進而上調(diào)肝癌細胞凋亡基因TNFSF14。CSE/H2S可能是防治HCC具有潛力的新靶點。

總之，在TME中活化HSC合成分泌信號分子H2S，通過激活肝癌細胞中的JNK/JunB-TNFSF14信號通路，從而促進肝癌細胞凋亡、抑制腫瘤細胞活力，可能是HSC在TME中調(diào)節(jié)肝癌細胞生物學(xué)功能的新機制之一。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明：尚宏偉負責(zé)實驗指導(dǎo)，收集分析數(shù)據(jù)，撰寫及修改論文；馬亞楠負責(zé)實驗設(shè)計，收集分析數(shù)據(jù)；路欣、呂翎娜負責(zé)收集分析數(shù)據(jù)；丁惠國負責(zé)課題設(shè)計，審核文章并最后定稿。尚宏偉和馬亞楠對本文貢獻等同，同為第一作者。

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收稿日期：2024-08-07；錄用日期：2024-08-26

本文編輯：林姣

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