結(jié)核桿菌/利福平耐藥實時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)聯(lián)合干擾素-γ釋放試驗對肺結(jié)核的診斷效能

【摘要】目的 探討結(jié)核桿菌利福平耐藥實時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測（Gene Xpert-MTB/RIF）技術(shù)聯(lián)合干擾素-γ釋放試驗（IGRA）對肺結(jié)核的診斷效能，為臨床治療提供參考。方法 選取2022年3月至2024年3月睢寧縣中醫(yī)院收治的78例疑似肺結(jié)核患者的臨床資料，進(jìn)行回顧性分析。所有患者均接受結(jié)核分枝桿菌（MTB）培養(yǎng)、Gene Xpert-MTB/RIF、IGRA檢查，以MTB培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析Gene X-pert MTB/RIF聯(lián)合IGRA對肺結(jié)核的診斷效能。結(jié)果 MTB培養(yǎng)結(jié)果顯示：78例疑似肺結(jié)核患者中，陽性58例，陰性20例；聯(lián)合檢測結(jié)果顯示：陽性72例，陰性6例。聯(lián)合檢測準(zhǔn)確度為85.90%，靈敏度為94.83%，特異度為60.00%，陽性預(yù)測值為91.67%，陰性預(yù)測值為66.67%，均高于各項單一檢測（均P<0.05）。結(jié)論 Gene Xpert-MTB/RIF聯(lián)合IGRA診斷肺結(jié)核的價值較高，值得臨床應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】結(jié)核桿菌；利福平；耐藥性；實時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)；干擾素-γ釋放試驗；肺結(jié)核

【中圖分類號】R512.91 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2096-2665.2024.21.0112.03

DOI：f0ucP/mKDCHlJ+dLgROy/V1cQzGYoCUEIHe/Nnzmly0=10.3969/j.issn.2096-2665.2024.21.034

結(jié)核病是一種由結(jié)核桿菌引起的高發(fā)傳染性疾病，主要通過飛沫傳播，可侵襲人體多個器官（如腸道、肝臟、胃和肺等），且該疾病潛伏期較長，病情多呈慢性進(jìn)展性發(fā)展[1]。早期準(zhǔn)確診斷對提升患者治療效果、改善預(yù)后具有重要價值。既往結(jié)核病的臨床診斷主要依賴結(jié)核分枝桿菌（MTB）的培養(yǎng)，但MTB培養(yǎng)通常需要幾周時間，導(dǎo)致診斷的時效性不足，從而錯過最佳治療時機(jī)[2]。隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步，結(jié)核桿菌利福平耐藥實時熒光定量核酸擴(kuò)增檢測（Gene Xpert-MTB/RIF）技術(shù)逐漸應(yīng)用于肺結(jié)核的診斷，該技術(shù)能全自動提取樣本中的核酸并進(jìn)行純化和濃縮，有效簡化檢測流程[3]。干擾素-γ釋放試驗（IGRA）是一種檢測結(jié)核感染的新型免疫學(xué)檢測方法，通過檢測機(jī)體感染MTB后特異性 T 細(xì)胞釋放干擾素-γ（IFN-γ）的情況判斷是否存在結(jié)核感染[4]?；诖?，本研究分析Gene Xpert-MTB/RIF技術(shù)聯(lián)合IGR1H+ENb6O3jwxbNM606sa95GszaQh3T4WG0C6bphNWC8=A對肺結(jié)核的診斷效能，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022年3月至2024年3月睢寧縣中醫(yī)院收治的78例疑似肺結(jié)核患者的臨床資料，進(jìn)行回顧性分析。所有患者中男性45例，女性33例；年齡27～83歲，平均年齡（55.00±3.72）歲； BMI 20～35 kg/m2，平均BMI（27.50±1.72）kg/m2。本研究經(jīng)睢寧縣中醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴符合肺結(jié)核可疑癥狀者（咳嗽、咯痰≥2周、咯血或者血痰，具有以上1項癥狀即為肺結(jié)核可疑癥狀者）[5]；⑵意識清晰，可正常溝通。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴存在肺結(jié)核病史者；⑵合并其他傳染性疾病者；⑶合并血液系統(tǒng)疾病者；⑷合并免疫系統(tǒng)疾病者。

1.2 研究方法 患者使用清水漱口2次，將痰液咳入無菌痰瓶后，密封并及時送至檢驗科。

MTB 培養(yǎng)：取1 mL痰樣本，加入20 mL 4%氫氧化鈉溶液（德國達(dá)姆施塔特默克集團(tuán)，規(guī)格：500 mL/瓶），靜置 30 min 待其充分液化（可振蕩2～3次加速液化，如痰液黏稠可延長液化時間）。液化完成后接種至酸性培養(yǎng)基，將生化培養(yǎng)箱（青島海爾生物醫(yī)療科技有限公司，魯械注準(zhǔn)20222221116，型號：HSP-160）設(shè)置為37 ℃恒溫培育14 d，培育期間觀察病原菌生長情況。培育完成后制片，采用結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀（鄭州中普醫(yī)療器械有限公司，豫械注準(zhǔn)20222220089，型號：ZOPOMED-240）檢測MTB菌落生長情況。

Gene X-pert MTB/RIF：另取1 mL痰樣本，與處理液混勻（比例為1∶2）后靜置10 min，隨后再次混勻靜置5 min。取2 mL混合液貼壁加入Gene Xpert-MTB/RIF試劑盒（購自美國Cepheid公司，嚴(yán)格按照說明書操作），將其置于配套Gene X-pert檢測器中，通過配套軟件自動判讀結(jié)果。

IGRA：檢查當(dāng)天，采集患者空腹靜脈血6 mL于肝素抗凝管中，16 h內(nèi)將全血標(biāo)本振蕩搖勻并均分裝至培養(yǎng)管（T）、陽性對照管（P）、陰性對照管（N）中。分別向板孔加入各管待測樣品50 μL，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定。將生化培養(yǎng)箱設(shè)置為（37.0±0.5）℃進(jìn)行培養(yǎng)，將板孔中待測品振蕩混勻后封板膜封板，培養(yǎng)60 min。取出后各孔加50 μL酶標(biāo)試劑震蕩搖勻，再次封板培養(yǎng)60 min。取出后揭開封板膜采用洗滌液潤洗充分后，繼續(xù)培養(yǎng)15 min。取出后各孔加入500 μL終止液，于10 min內(nèi)采用酶標(biāo)儀[賽默飛世爾（上海）儀器有限公司，滬械注準(zhǔn)20182220073，型號：Multiskan FC]測定吸光度A值，設(shè)置波長450 nm，計算各管干擾素-γ水平。N≤400 pg/mL，若P-N為任何值，T-N≥14 pg/mL且T-N=N/4，則判定為陽性；若T-N為任何值，P-N<20 pg/mL且P-N<N/4或N>400 pg/mL，則判定為陽性；若P-N≥20 pg/mL，T-N為任何值且T-N<N/4為陰性[6]。

1.3 觀察指標(biāo) ⑴比較MTB 培養(yǎng)、Gene X-pert MTB/RIF、IGRA檢測結(jié)果。⑵診斷效能分析。以MTB培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，分析Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA及聯(lián)合檢測的診斷效能。準(zhǔn)確度=[（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)]×100%；靈敏度=[真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）]×100%；特異度=[真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）]×100%；陽性預(yù)測值=[真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)）]×100%；陰性預(yù)測值=[真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù)）]×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以[例（%）]表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTB 培養(yǎng)、Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA檢測結(jié)果比較 MTB培養(yǎng)結(jié)果顯示：78例疑似肺結(jié)核患者中，陽性58例，陰性20例；聯(lián)合檢測結(jié)果顯示：陽性72例，陰性6例，見表1。

2.2 Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA及聯(lián)合檢測的診斷效能比較 聯(lián)合檢測準(zhǔn)確度為85.90%，靈敏度為94.83%，特異度為60.00%，陽性預(yù)測值為91.67%，陰性預(yù)測值為66.67%，均高于各項單一檢測，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05），見表2。

3 討論

結(jié)核病是一種由MTB引起的慢性傳染病，主要通過呼吸道進(jìn)行傳播，在肺結(jié)核初期，患者主要表現(xiàn)為咳嗽、低熱、乏力等癥狀，若未得到及時有效的治療，隨著疾病進(jìn)展會進(jìn)一步損傷肺功能，嚴(yán)重威脅患者生命安全[7]。MTB具有極強的生存能力，能在宿主體內(nèi)長期潛伏，結(jié)核病易發(fā)生于免疫力低下的人群（如艾滋病患者、糖尿病患者、老年人等）。肺結(jié)核的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，涉及免疫反應(yīng)、慢性炎癥等方面[8]。MTB進(jìn)入肺部后，通常會被巨噬細(xì)胞吞噬，但巨噬細(xì)胞并不能完全殺滅細(xì)菌，細(xì)菌繼續(xù)在細(xì)胞內(nèi)存活并繁殖，之后機(jī)體免疫系統(tǒng)會啟動反應(yīng)并產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，T細(xì)胞等免疫細(xì)胞會被募集到感染部位，形成肉芽腫。此時若免疫反應(yīng)足夠強烈，可控制住感染，反之則會破壞肺組織，形成空洞和結(jié)核性病變[9]。因此，盡早準(zhǔn)確診斷對于控制結(jié)核病的傳播、改善患者預(yù)后具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示：在78例疑似肺結(jié)核患者中，陽性58例，陰性20例；聯(lián)合檢測結(jié)果顯示：陽性72例，陰性

6例；聯(lián)合檢測準(zhǔn)確度為85.90%，靈敏度為94.83%，特異度為60.00%，陽性預(yù)測值為91.67%，陰性預(yù)測值為

66.67%，均高于各項單一檢測。這提示Gene Xpert-MTB/RIF聯(lián)合IGRA診斷肺結(jié)核的價值較高。分析原因為，Gene Xpert-MTB/RIF技術(shù)能全自動提取樣本中的核酸并進(jìn)行純化和濃縮，快速準(zhǔn)確地檢測出MTB及利福平耐藥情況，可縮短檢測時間，為早期診斷和及時治療提供有力支持[10]。IGRA作為一種新型免疫學(xué)檢測方法，可反映機(jī)體感染MTB后特異性T細(xì)胞釋放干擾素γ的情況，具有較高的特異性，能較好地區(qū)分結(jié)核感染與其他非結(jié)核分枝桿菌感染及其他疾病[11]。兩者聯(lián)合使用，可優(yōu)勢互補，提高診斷的準(zhǔn)確性。對于一些復(fù)雜的病例（如免疫功能低下的患者、早期感染或潛伏感染的患者），單一的檢測方法易出現(xiàn)假陰性或準(zhǔn)確度不高的情況。Gene Xpert-MTB/RIF 主要針對細(xì)菌核酸進(jìn)行檢測，而IGRA則從免疫反應(yīng)的角度檢測，二者聯(lián)

合應(yīng)用可增加對特殊人群的診斷敏感性，降低漏診的可能性。

綜上所述，Gene Xpert-MTB/RIF聯(lián)合IGRA診斷肺結(jié)核的價值較高，值得臨床應(yīng)用。

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1作者簡介：張志慶，大學(xué)本科，副主任檢驗師，研究方向：微生物的臨床檢驗。