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    不同氮肥形態(tài)對李氏禾鉻富集能力的影響

    2024-11-10 00:00:00陳詩奇劉杰蔣旭升韓慶坤王路洋

    關(guān)鍵詞:氮肥形態(tài);鉻污染;李氏禾;根系特征;修復(fù)效率

    鉻作為被廣泛使用的工業(yè)原料,在工業(yè)生產(chǎn)過程中會被排放到環(huán)境中,對環(huán)境造成污染,同時其可以通過食物鏈在人體中累積,對身體健康產(chǎn)生有害影響,所以土壤鉻污染一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)環(huán)境問題之一。植物修復(fù)作為土壤修復(fù)的一種有效且低成本技術(shù),植物生物量和土壤中重金屬的生物利用度是影響植物修復(fù)效率的關(guān)鍵因素。李氏禾(Leersiahexandra Swartz)是中國境內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)的鉻超富集植物,為多年生植物,能多次刈割,具有生物量大、生長迅速等特點(diǎn),是修復(fù)土壤鉻污染的一種理想植物。

    氮作為植物生長的必需營養(yǎng)元素,施加氮肥能提高植物的葉綠素含量,促進(jìn)植物生物量積累。而且植物生長發(fā)育受植物激素調(diào)控,施加氮肥可能會影響植物體內(nèi)的植物激素含量,從而對植物生長產(chǎn)生影響。在植物修復(fù)技術(shù)中,植物生物量的大小對植物重金屬累積量有直接影響。近年來,有研究表明,不同氮肥形態(tài)對超富集植物東南景天的生物量影響不同,進(jìn)而影響其對重金屬的累積量。同時,不同形態(tài)氮肥會在土壤中發(fā)生不同反應(yīng),對土壤pH值的影響不同。土壤中重金屬遷移轉(zhuǎn)化受土壤pH值影響,而土壤重金屬遷移轉(zhuǎn)化可能改變土壤重金屬賦存形態(tài)占比,從而影響植物吸收效率。此外,有研究發(fā)現(xiàn),合理地施加氮肥能顯著提高植物根系活力,且不同氮肥形態(tài)會對植物根系形態(tài)產(chǎn)生不同影響,如銨態(tài)氮能促進(jìn)植物的根直徑增加,而硝態(tài)氮能促進(jìn)植物側(cè)根發(fā)育,從而增加植物根長。植物根系是植物吸收重金屬的重要器官,有研究發(fā)現(xiàn)植物重金屬含量與植物的總根長、根表面積、根體積呈正相關(guān),所以根系形態(tài)的變化可能會影響植物對重金屬的吸收,從而影響重金屬在植物組織中的累積。而植物根系活性會受重金屬抑制,植物根系活性的降低會影響根系發(fā)育。所以在鉻污染土壤中研究施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾根系形態(tài)與根系活力的影響,對李氏禾鉻吸收機(jī)理具有重要意義。

    本試驗(yàn)在張學(xué)洪等的研究基礎(chǔ)上,在鉻污染土壤中,以超富集植物李氏禾作為研究對象,增加酰胺態(tài)氮及氯化銨,對施氮條件進(jìn)行優(yōu)化,施加0.02mol·kg-1的不同形態(tài)的氮肥。通過對李氏禾的生物量、根系形態(tài)特征、鉻含量和土壤鉻含量等進(jìn)行分析,探究施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾富集能力的影響,以期闡明氮肥對強(qiáng)化李氏禾鉻修復(fù)機(jī)制,為鉻污染土壤場地應(yīng)用提供理論參考。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    李氏禾幼苗采自于廣西壯族自治區(qū)桂林市荔浦市某礦區(qū),對采回來的李氏禾幼苗進(jìn)行挑選修剪后,于溫室下用20%的Hoagland營養(yǎng)液于2.5L塑料桶中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)7d,使其長出根。

    供試土壤選用桂林市雁山區(qū)桂林理工大學(xué)校園土,土壤在陰涼處自然風(fēng)干后,挑去其中的雜質(zhì)、樹根和落葉等,將所取土樣研磨,充分混勻后過10目篩。土壤基本理化性質(zhì):pH4.97,有機(jī)質(zhì)50.1g·kg-1,銨態(tài)氮16.0mg·kg-1,速效磷49.1mg·kg-1,速效鉀144mg·kg-1,總鉻含量66.4mg·kg-1。以溶液形式添加K2Cr202配制鉻污染土,平衡3周后測定土壤總鉻含量為315.1mg·kg-1。

    1.2盆栽試驗(yàn)

    稱取2kg供試土壤裝入規(guī)格為2.5L(高21cm,直徑19cm)的塑料桶中,選取生長一致的李氏禾移人盆內(nèi),每盆20株。試驗(yàn)共設(shè)6個處理,每個處理3次重復(fù)。6個處理分別為:硝酸鈣(X)、尿素(UN)、氯化銨(NC)、硝酸銨(NN)、硫酸銨(NS)5種氮肥處理組和對照處理組(CK,不施加氮肥)。施加氮肥量為0.02mol·kg-1,處理60d后收獲植物,盆栽收樣時不同處理的李氏禾如圖1所示。

    1.3植物及土壤樣品的采集、處理及測定方法

    1.3.1李氏禾生長指標(biāo)及鉻含量的測定

    李氏禾種植60d收獲,在收樣前測量株高和葉綠素含量。用直尺從盆栽李氏禾根部測量至李氏禾最高處作為株高;采用95%乙醇提取一分光光度法測定葉綠素含量。收獲后的李氏禾用自來水洗凈后,再用去離子水潤洗3次,將清洗后的李氏禾分成根部和地上部待用。將洗凈的李氏禾擦干放進(jìn)信封置于烘箱中105℃殺青30min后,75℃烘干至恒質(zhì)量。將根、莖、葉分開用電子天平測其干質(zhì)量。

    稱取烘干磨碎的李氏禾樣品0.2g,用HN03-H202消解,消解后的李氏禾采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(PerkinElmer Optima 7000 DV)測定鉻含量,并采用國家一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW07603,灌木枝葉)進(jìn)行質(zhì)量控制,加標(biāo)回收率為90.0%-102.5%。

    1.3.2李氏禾根系活力的測定

    采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法測定根系活力。稱取新鮮的李氏禾根系0.2g完全浸沒于1% TTC溶液和等量0.1mol·L-1磷酸緩沖液混合液中,37℃避光孵育1-3h后加入2mL硫酸(1mol·L-1)以終止反應(yīng)。將根系取出,擦干水分后與3-5mL乙酸乙酯一起放在研缽內(nèi)研碎,以提取出三苯基甲腙(TTF)。把紅色浸提液過濾到10mL容量瓶,用乙酸乙酯定容,在波長485nm下測定吸光度。通過TTF標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品的TTF含量,即為李氏禾根系活力(TTFmg·g-1·h-1)。

    1.3.3李氏禾的根系形態(tài)測定

    李氏禾收獲后,將洗凈的根部剪下,用直尺測量根部長度,然后將根放進(jìn)有去離子水的塑封袋中。將李氏禾根系平鋪在根系掃描系統(tǒng)(萬深LA-S植物根系分析系統(tǒng))的樹脂平板上進(jìn)行掃描,用鑷子將重疊的部分分開。測定的根系形態(tài)包括根平均直徑、總根表面積、總根長和總根體積。

    1.3.4李氏禾的植物激素測定

    采用固相萃取(SPE)和高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MSIMS)對6種植物激素[順式玉米素核苷-O-糖苷(cZROG)、異戊烯腺嘌呤-7-葡糖苷(iP7G)、2-甲硫基順式玉米素核苷(2MeScZR)、N6-異戊烯腺嘌呤(IP)、異戊烯腺嘌呤-9-葡糖苷(iP9G)和反式一玉米素-9-B-葡萄糖苷(tZOG)]進(jìn)行分析和測定。將稱質(zhì)量后的樣品研磨后放人10mL離心管中,加入5mL提取液(甲醇:水:甲酸=15:4:1,含0.5%二丁基羥基甲苯)漩渦混合1min、超聲振蕩30min,于-40℃下靜置60min。固相萃取:(1)活化,用3mL水和3mL甲醇洗滌萃取柱。(2)吸附,將上清液注入柱中,流速應(yīng)小于1mL·min-1。(3)淋洗,用3 mL水和10%的甲醇清洗色譜柱。(4)洗脫,1mL甲醇。洗脫液用蒸發(fā)濃縮器干燥,然后加入200uL 80%甲醇復(fù)溶,再次旋轉(zhuǎn)離心(12000r·min-1,10min)。最后用LC-MS/MS分析上清液。

    標(biāo)準(zhǔn)品購自源葉生物科技有限公司。準(zhǔn)確取標(biāo)準(zhǔn)溶液(2.5ug·mL-1)0.20mL,用80%的甲醇定容至1mL配制成濃度為500ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液,再用80%的甲醇稀釋成標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。根據(jù)不同濃度及相應(yīng)濃度下標(biāo)品的峰面積繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    儀器:液相色譜Waters Acquity UPLC,質(zhì)譜ABSCIEX 5500 Qtrap-MS。

    色譜柱:Acquity UPLC HSS T3(1.8um,2.1mmX100mm)。

    1.3.5土壤理化性質(zhì)測定

    土壤pH值采用水土比2.5:1(V/m)提取,pH計測定;有機(jī)質(zhì)用重鉻酸鉀加熱法測定;銨態(tài)氮用氯化鉀浸提,流動注射分析儀(荷蘭SKALAR SAN++)測定;速效磷用碳酸氫鈉一分光光度法測定;速效鉀用乙酸銨浸提法測定。

    1.3.6土壤鉻含量和鉻形態(tài)的測定

    土壤總鉻含量測定采用HN03-H202消解法,土壤鉻質(zhì)量控制用國家一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW07404,土壤),加標(biāo)回收率為89.8%-101.0%。施肥種植后的土壤鉻賦存形態(tài)采用BCR四步連續(xù)提取法測定。消解和提取后的鉻含量用電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(PerkinElmer Optima 7000 DV)測定。

    1.4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析方法

    富集系數(shù)(BCF)=李氏禾地上部鉻含量(mg·kg-1)/土壤總鉻含量(mg·kg-1)

    修復(fù)效率(土壤鉻去除率)=(修復(fù)前土壤總鉻含量一修復(fù)后土壤總鉻含量)/修復(fù)前土壤總鉻含量×100%

    使用Microsoft Excel 2019和SPSS 26對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計學(xué)分析。植物生長指標(biāo)及修復(fù)效率采用單因素方差分析(ANOVA),通過最小顯著差數(shù)法(LSD)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)(Plt;0.05)。植物激素含量采用t檢驗(yàn)(Student'st-test)分析顯著差異性。使用Origin 2021繪制柱狀圖,使用R4.1.3中R包“Heatmap”進(jìn)行相關(guān)性分析并繪制熱圖。

    2結(jié)果與分析

    2.1施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾生長的影響

    如圖2(a)所示,施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾各部位生物量均有顯著性提高,其中施加硫酸銨的李氏禾生物量最大,相比于對照,地上部生物量增加了1.98倍、根部干質(zhì)量增加了88.3% (Plt;0.05)。如圖2(b)所示,施加不同形態(tài)氮肥后李氏禾株高均有顯著增長。圖2(c)為施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾葉綠素含量的影響,除了施加尿素外,施加其他形態(tài)氮肥的李氏禾的葉綠素含量比對照增加35%-50%,說明施加氮肥有利于提高葉綠素含量,促進(jìn)李氏禾生長。2.2施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾根系特征的影響

    施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾的根系特征影響不同。由圖3(a)可以看出,施加氮肥對李氏禾根系伸長均有促進(jìn)作用,根長增長的大小順序?yàn)槟蛩豨t;硝酸銨gt;硫酸銨gt;硝酸鈣gt;氯化銨gt;對照。如圖3(b)所示,施加硝酸鈣和硝酸銨的總根長有顯著增加,分別比對照增加22.0%和59.4%,根據(jù)根系掃描圖顯示,應(yīng)該是側(cè)根發(fā)育比較多,從而使總根長有顯著增加。如圖3(c)和圖3(d)所示,施加不同形態(tài)氮肥后,硝酸銨處理的李氏禾總根表面積和總根體積增長最顯著,總根表面積為對照的2.15倍,總根體積比對照增長99.5%。如圖3(e)所示,施加不同形態(tài)氮肥有利于李氏禾根平均直徑增大,其中施加硫酸銨比對照增長50%。如圖3(f)所示,與對照相比,除了施加氯化銨外,施加其他形態(tài)氮肥的李氏禾根系活力均有提高,其中施加硫酸銨的李氏禾根系活力最高,比對照增加1.08倍。

    2.3施加硫酸銨和尿素對李氏禾葉片植物激素的影響

    選取施加不同形態(tài)氮肥后生物量相差最大的硫酸銨和尿素處理,來測定李氏禾葉片中的植物激素。圖4為測定的6種植物激素的結(jié)果,其中硫酸銨的cZROG和iP7G高于尿素,且cZROG存在顯著差異,硫酸銨的IP、iP9G、tZOG均顯著低于尿素,而兩種氮肥的2MeScZR無顯著差異。綜上推測,cZROG和iP7G可能是調(diào)控李氏禾生長的關(guān)鍵植物激素,導(dǎo)致施加硫酸銨與尿素之間的李氏禾生物量差異顯著。

    2.4施加不同形態(tài)氮肥對土壤鉻含量和形態(tài)及土壤pH的影響

    施加不同形態(tài)氮肥種植李氏禾60 d后的土壤鉻含量如圖5(a)所示,與對照相比,施加氮肥種植李氏禾后的土壤鉻含量均有所降低。圖5(b)為種植后土壤鉻賦存形態(tài)占比變化,與對照相比,土壤鉻弱酸提取態(tài)、可還原態(tài)和可氧化態(tài)占比有所下降,土壤鉻殘渣態(tài)占比較高。如圖5(c)所示,與對照相比,施加硝酸鈣、氯化銨、硝酸銨、硫酸銨的土壤pH值均有所下降,只有施加尿素的土壤pH值顯著上升,與對照相比增長10.0%,

    2.5施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾鉻修復(fù)效率的影響

    李氏禾鉻含量如圖6(a)所示,與對照相比,施加硝酸鈣、尿素、硝酸銨、硫酸銨的李氏禾葉鉻含量和根鉻含量均有顯著增加,地上部鉻含量分別比對照組增加10.3%、23.4%、18.7%、36.8%,說明施加氮肥有利于提高李氏禾對鉻的吸收。圖6(b)為李氏禾鉻累積量,施加不同形態(tài)氮肥有利于提高李氏禾鉻累積量,其中,施加硫酸銨的李氏禾鉻累積量最高,地上部和根鉻累積量分別達(dá)到941.4ug·pot-1和1239.3ug·pot-1。施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾BCF均存在顯著性影響,如圖6(c)所示,與對照相比,氯化銨的BCF降低10.2%,硝酸鈣、尿素、硝酸銨、硫酸銨分別增加了16.6%、27.2%、22.2%、46.2%。土壤中鉻的去除率如圖6(d)所示,施加氮肥的李氏禾的土壤鉻去除率均有顯著性提高,為對照組的3.23-5.56倍。

    2.6李氏禾生理機(jī)制和土壤參數(shù)與李氏禾鉻修復(fù)效率的相關(guān)性

    采用Pearson相關(guān)分析評估各參數(shù)對李氏禾鉻修復(fù)效率的影響,結(jié)果如圖7所示。土壤鉻弱酸提取態(tài)、可還原態(tài)、可氧化態(tài)和土壤總鉻含量均與土壤鉻去除率存在顯著負(fù)相關(guān)。李氏禾株高、葉綠素含量、地上部干質(zhì)量、根干質(zhì)量、根平均直徑、總根表面積、總根體積、根系活力均與根鉻含量、地上部鉻累積量、根鉻累積量、土壤鉻去除率存在顯著正相關(guān),其中,地上部干質(zhì)量、根平均直徑、根系活力還與李氏禾鉻含量、鉻累積量、富集系數(shù)、土壤鉻去除率存在極顯著相關(guān)性。殘渣態(tài)鉻和李氏禾總根長與李氏禾鉻修復(fù)效率均無顯著相關(guān)性。

    3討論

    3.1施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾地上部生長和根系發(fā)育的影響

    植物葉片光合作用是植物體內(nèi)能量傳遞和物質(zhì)累積的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,而氮直接參與了光合色素的合成。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾葉綠素含量影響存在差異(圖2),其中,施加銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的李氏禾葉綠素含量和生物量均高于酰胺氮,這可能是硝態(tài)氮和銨態(tài)氮可以被李氏禾直接吸收利用,而酰胺氮需要轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮才能被李氏禾利用,導(dǎo)致李氏禾對氮肥吸收效率不同,影響了李氏禾葉綠素合成,對李氏禾生物量產(chǎn)生差異影響。植物內(nèi)源激素對植物的生長發(fā)育也有調(diào)控作用,李氏禾葉片植物激素含量結(jié)果表明(圖4),施加硫酸銨的李氏禾葉片cZ-ROG和iP7G高于施加尿素,這可能是因?yàn)檎{(diào)控李氏禾生長的關(guān)鍵植物激素是cZROG和iP7G,所以施加硫酸銨的李氏禾生物量顯著高于尿素。此外,本課題組研究還發(fā)現(xiàn)合理的刈割頻率、刈割高度和刈割時間也能提高李氏禾修復(fù)效率,刈割后的李氏禾再生有較大的氮需求。合理的施用硫酸銨可能加快李氏禾再生,兩者結(jié)合會進(jìn)一步提高李氏禾對鉻污染的修復(fù)效率。

    本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾根系形態(tài)發(fā)育和根系活力影響不同(圖3),施加硝酸銨的總根長、根表面積和根體積最大,分別為557.89cm、131.47cm2和4.01cm3;施加硫酸銨的根直徑和根系活力最大,分別為0.75mm和0.08TTFmg·g-1·h-1。這與前人研究發(fā)現(xiàn)的硝態(tài)氮有利于植物根的伸長,銨態(tài)氮有利于根的加粗,銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的聯(lián)用會促進(jìn)植物側(cè)根發(fā)育和根伸長的結(jié)果相似。

    3.2施加不同形態(tài)氮肥對李氏禾鉻富集能力的影響

    植物主要通過根部吸收重金屬,所以根系形態(tài)的變化會影響植物吸收重金屬的能力。本試驗(yàn)中施加不同形態(tài)氮肥下李氏禾根系形態(tài)有所改變,從而影響了李氏禾對鉻的吸收,其中,施加硫酸銨的李氏禾鉻含量最高,地上部和根部分別為205.9mg·kg-1和514.3mg·kg-1。值得注意的是,通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)(圖7):與李氏禾總根表面積和總根體積相比,根平均直徑與李氏禾鉻含量相關(guān)性更強(qiáng),這可能是因?yàn)橹参锔骄睆较噍^于總根表面積對土壤孔隙度的影響更大,根平均直徑越大所產(chǎn)生的孔隙越大,從而更有利于土壤鉻的遷移轉(zhuǎn)化,提高李氏禾對鉻的吸收。此外,植物對土壤中重金屬的吸收與土壤中重金屬的生物有效性有關(guān),提高重金屬活性可以促進(jìn)超富集植物對重金屬的吸收,提高植物累積量,這是植物修復(fù)發(fā)展的一個新方向。重金屬的弱酸提取態(tài)和可還原態(tài)易被植物吸收,可氧化態(tài)和殘渣態(tài)較穩(wěn)定,但可氧化態(tài)在酸性條件下可以被還原,且還原后更有利于植物吸收。本試驗(yàn)中,與對照相比,施加不同形態(tài)氮肥種植李氏禾后的土壤鉻弱酸提取態(tài)、可還原態(tài)和可氧化態(tài)含量顯著下降(圖5),這可能是施肥后土壤中鉻活性提高,李氏禾對鉻吸收有所增加。綜上,植物重金屬含量和土壤重金屬含量會影響植物富集能力,施加不同形態(tài)氮肥提高李氏禾鉻含量和土壤鉻去除率后,有利于提高李氏禾的富集系數(shù),其中施加硫酸銨的李氏禾富集系數(shù)最高,為對照的1.45倍。富集系數(shù)的提高意味著相同質(zhì)量的李氏禾可以富集更多土壤中的鉻,使李氏禾土壤鉻修復(fù)效率得到提高。

    4結(jié)論

    (1)施加不同形態(tài)氮肥有利于促進(jìn)李氏禾生長,提高葉綠素含量、生物量和根系活力,并改變其根系形態(tài)指標(biāo)。

    (2)施加不同形態(tài)氮肥對土壤鉻賦存形態(tài)、李氏禾根系形態(tài)和根系活力的改變有利于提高李氏禾鉻吸收量和土壤中鉻去除率。其中,施加硫酸銨的李氏禾修復(fù)效果最顯著,其富集系數(shù)較對照組提高47.9%,土壤鉻去除率為對照的5.56倍。

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