利用GWAS和DNA甲基化共定位鑒定豬肉質(zhì)性狀的候選基因

摘 要： 為了更深入地了解肉質(zhì)性狀的遺傳基礎(chǔ)，本研究使用基于基因型填充的測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行了GWAS分析并與之前的發(fā)表的EWAS結(jié)果進(jìn)行共定位分析。該研究發(fā)現(xiàn)了515個(gè)全基因組水平顯著的SNPs位點(diǎn)和4 134個(gè)達(dá)建議顯著閾值的SNPs位點(diǎn)，這些位點(diǎn)共涉及406個(gè)基因，其中包括262個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因，最終確定了6個(gè)可能與肉質(zhì)性狀相關(guān)的重要候選基因。同時(shí)，與EWAS的結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)有12個(gè)顯著的CpG位點(diǎn)與顯著SNP位點(diǎn)存在重疊。通過(guò)這些研究可以為改善豬肉品質(zhì)的育種工作提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞： 全基因組關(guān)聯(lián)分析；SNPs；肉質(zhì)性狀

中圖分類號(hào)：S828.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""" 文章編號(hào)：0366-6964（2024）05-1945-13

收稿日期：2023-12-08

基金項(xiàng)目：四川省科技廳項(xiàng)目（2020YFN0024；2021ZDZX0008；2021YFYZ0030）；國(guó)家生豬技術(shù)創(chuàng)新中心先導(dǎo)科技項(xiàng)目（NCTIP-XD/B01）

作者簡(jiǎn)介：崔晟頔（2000-），男，河南新鄉(xiāng)人，碩士，主要從事豬遺傳育種研究，E-mail：313164192@qq.com

*通信作者：唐國(guó)慶，主要從事豬分子數(shù)量遺傳研究，E-mail：tyq003@163.com

Identification of Candidate Genes for Pork Texture Traits Using GWAS Combined with

Co-localisation of DNA Methylation

CUI" Shengdi1，2，3， WANG" Kai4， ZHAO" Zhenjian1，2，3， CHEN" Dong1，2，3， SHEN" Qi1，2，3， YU" Yang1，2，3，

WANG" Junge1，2，3， CHEN" Ziyang1，2，3， YU" Shixin1，2，3， CHEN" Jiamiao1，2，3， WANG" Xiangfeng1，2，3，

TANG" Guoqing1，2，3*

（1.State Key Laboratory of Swine and Poultry Breeding Industry，College of Animal

Science and Technology， Sichuan Agricultural University， Chengdu 611130，" China;

2.Key Laboratory of Livestock and Poultry Multi-omics of Ministry of Agriculture and

Rural Affairs， College of Animal Science and Technology， Sichuan Agricultural University，

Chengdu 611130，" China; 3.Farm Animal Genetic Resources Exploration and Innovation

Key Laboratory of Sichuan Province， Sichuan Agricultural University， Chengdu 611130，

China;

4.New Hope Liuhe CO. LTD.， Chengdu 625014，" China）

Abstract： To gain a deeper understanding of the genetic basis of meat quality traits， this study performed GWAS analysis using genotype-based populated sequencing data and co-localisation analysis with previously published EWAS results. The study identified 515 genome-wide significant SNP loci and 4 134 SNP loci at the proposed significance threshold， which involved 406 genes， including 262 protein-coding genes， and resulted in the identification of 6 important candidate genes that may be associated with meat quality traits. Meanwhile， comparison with the results of EWAS revealed that 12 significant CpG loci overlapped with significant SNP loci. The study results can provide a more solid theoretical foundation and data support for breeding efforts to improve pork quality.

Key words： genome-wide association study; SNPs; meat traits

*Corresponding author：TANG Guoqing， E-mail：tyq003@163.com

豬肉是我國(guó)肉類食品中的重要組成部分，長(zhǎng)期以來(lái)在國(guó)內(nèi)肉類消費(fèi)中占據(jù)主導(dǎo)位置。隨著經(jīng)濟(jì)的繁榮和人民生活水平的提高，消費(fèi)者對(duì)優(yōu)質(zhì)豬肉的需求日益增長(zhǎng)。在當(dāng)前的研究中，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的廣泛應(yīng)用和低成本SNP芯片的開發(fā)，全基因組關(guān)聯(lián)分析（GWAS）已成為研究家畜重要經(jīng)濟(jì)性狀的有力工具［1］。通過(guò)進(jìn)行GWAS分析，可以識(shí)別與肉質(zhì)性狀相關(guān)的SNP位點(diǎn)，并挖掘重要的候選基因。這些發(fā)現(xiàn)為提高豬肉質(zhì)量的育種工作提供了重要的理論基礎(chǔ)。

現(xiàn)有的研究越來(lái)越多地表明，單核苷酸多態(tài)性（SNP）對(duì)基因組中大量DNA的甲基化具有顯著影響。雖然全基因組表觀遺傳關(guān)聯(lián)研究（EWAS）可以揭示DNA甲基化與復(fù)雜表型之間的關(guān)系，但尚不能明確其與表型變異的因果關(guān)系。有研究表明，表觀遺傳變異可能受到SNP［2-3］、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合［4］或環(huán)境因素［5］的影響。因此，EWAS識(shí)別的顯著相關(guān)性可能與其他因素混淆。為了深入了解肉質(zhì)性狀的遺傳基礎(chǔ)，本研究基于基因型填充測(cè)序數(shù)據(jù)對(duì)大白豬群體進(jìn)行GWAS分析。一方面，識(shí)別與肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)的SNP位點(diǎn)，并挖掘影響肉質(zhì)性狀的重要候選基因；另一方面，與之前的EWAS分析結(jié)果進(jìn)行比較，從基因組水平上驗(yàn)證EWAS識(shí)別的關(guān)鍵區(qū)域和候選基因。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與表型測(cè)定

在本研究選取了浙江天蓬豬場(chǎng)140頭純種大白豬（包括85頭公豬和55頭母豬）。所有試驗(yàn)豬都在相同的設(shè)施條件和環(huán)境下的圈舍中飼養(yǎng)，并執(zhí)行相同的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。在屠宰時(shí)，這些豬的平均體重為（111.71±12.92） kg，并在屠宰前禁食了24 h。在屠宰過(guò)程中，從每頭豬的左半邊胴體第3～4肋處背最長(zhǎng)肌收集樣品，并對(duì)其pH、肉色、滴水損失、肌內(nèi)脂肪和脂肪酸組成等肉質(zhì)性狀進(jìn)行測(cè)定。

1.2 組織樣本采集及DNA提取和SNP分型

在對(duì)試驗(yàn)豬進(jìn)行屠宰測(cè)定的同時(shí)采集肌肉樣品于凍存管中，加入 75% 的乙醇，于－20℃ 條件下保存?zhèn)溆?。耳組織 DNA 的提取參照 OMEGA 組織 DNA 提取試劑盒說(shuō)明書所述步驟進(jìn)行?；?Illumina 平臺(tái)（Illumina，美國(guó)）標(biāo)準(zhǔn)流程使用 Neogen GeneSeek Porcine50K 芯片對(duì) 140 頭大白豬進(jìn)行基因分型，芯片包含50 697個(gè)SNPs。

1.3 基因型填充

1.3.1 基因型填充參考模板

本研究采用了兩種參考模板對(duì)芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行填充，并將兩種參考模板填充的結(jié)果進(jìn)行了合并。第一種參考模板的參考群體來(lái)自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)的張哲課題組［6］（包括50頭來(lái)自福建某豬場(chǎng)的杜洛克，以及來(lái)自華南地區(qū)21個(gè)地方豬品種的210頭豬），芯片數(shù)據(jù)填充過(guò)程由對(duì)方完成。第二種參考模板的參考群體則是本課題組搜集的40頭大白豬的重測(cè)序數(shù)據(jù)。

1.3.2 基因型填充及質(zhì)量控制

填充完成后利用 Plink v1.09 軟件［7］對(duì)填充后的 SNP 數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)量控制，過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)為：1）去除實(shí)際等位基因與最可能等位基因相關(guān)性平方（R2）小于0.9的SNPs位點(diǎn)；2）去除MAF小于0.01的SNPs位點(diǎn)；3）去除HWE檢驗(yàn)小于 1×10-6的SNPs位點(diǎn)；4）去除性染色體上的 SNPs位點(diǎn)。經(jīng)過(guò)質(zhì)量控制檢驗(yàn)的SNPs位點(diǎn)被用于后續(xù) GWAS 分析。

1.4 全基因組關(guān)聯(lián)分析

本研究使用 GEMMA v0.98.5 軟件［8］中的線性混合模型對(duì)每個(gè)肉質(zhì)性狀進(jìn)行 GWAS 分析。在 GWAS 分析前，先使用 Box-Cox 變換將表型數(shù)據(jù)校正至符合正態(tài)分布，然后以出生年、出生月、性別、批次作為固定因子對(duì)表型進(jìn)行校正，得到的校正值被用于 GWAS 分析。GWAS 所使用的線性混合模型如下：

y=Xm+Wa+e

模型中，y表示表型值向量；m表示 SNP 效應(yīng)；a表示剩余多基因效應(yīng)，服從（a～MVN（0，Aσ2e））分布，A表示分子親緣關(guān)系矩陣 （genomic relatedness matrix，GRM） ；e表示殘差，服從（e～MVN（0，Iσ2e））分布，I表示單位向量；X和W分別表示 m和a的關(guān)聯(lián)矩陣。GRM 根據(jù)如下公式計(jì)算：

G=1p∑pi=1（xi-1nx-i）（xi-1nx-i）T

式中，G表示個(gè)體間親緣關(guān)系矩陣；n 表示個(gè)體數(shù)量；p表示 SNP 的數(shù)量；i表示第i個(gè)SNP；X表示n×p的表型矩陣; xi表示第i個(gè)SNP 的基因型；x-i表示第i個(gè)SNP 的平均值。

本研究使用Bonferroni校正法來(lái)設(shè)置全基因組顯著閾值，即 GWAS 結(jié)果中當(dāng) SNP 的關(guān)聯(lián)P值達(dá)到 Plt;0.05/N時(shí)，表示該 SNP 為顯著 SNP 位點(diǎn)，其中 N表示 GWAS 分析中使用的 SNP 數(shù)量；建議顯著閾值設(shè)置為Plt;1/N。然后使用R軟件中的CMplot v4.0.0 包繪制曼哈頓圖。使用R軟件中GenABEL包［9］中的estlambda函數(shù)計(jì)算基因組膨脹系數(shù) λ 用于判斷是否有假陽(yáng)性信號(hào)。

1.5 候選基因注釋和功能分析

本研究中，以顯著 SNP 位點(diǎn)上、下游 20 kb 范圍的基因組區(qū)域作為 QTL 區(qū)域，根據(jù) Ensembl 網(wǎng)站的 BioMart 模塊檢索范圍內(nèi)的候選基因，然后使用 DAVID 網(wǎng)站對(duì)候選基因進(jìn)行 GO 和 KEGG 富集分析，并結(jié)合候選基因相關(guān)的已發(fā)表文獻(xiàn)綜合分析候選基因的生物學(xué)功能。

1.6 EWAS 與 GWAS 的共定位分析

本研究對(duì) 140 頭大白豬群體肉質(zhì)性狀的 GWAS 鑒定的顯著SNPs與EWAS（EWAS結(jié)果見文獻(xiàn)［10］）鑒定的顯著CpG位點(diǎn)進(jìn)行比較，從而鑒定GWAS與EWAS重疊的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)。如果GWAS的顯著SNPs與EWAS顯著CpG位點(diǎn)在2 Mb范圍內(nèi)，則被認(rèn)為是二者重疊的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)［11］。

2 結(jié) 果

2.1 表型統(tǒng)計(jì)

本研究中 140 頭大白豬（ZJYY）的表型統(tǒng)計(jì)見表1。

2.2 SNP數(shù)據(jù)填充統(tǒng)計(jì)結(jié)果

本研究對(duì)140頭試驗(yàn)大白豬進(jìn)行了50K芯片基因分型，并獲得了50 697個(gè)SNPs。經(jīng)過(guò)填充、合并及質(zhì)量控制后，成功獲得了10 961 097個(gè)高質(zhì)量的SNPs（圖1），這些SNPs被用于后續(xù)的GWAS研究。

2.2.1 肉質(zhì)性狀 GWAS 結(jié)果

本研究對(duì)140頭大白豬的28個(gè)肉質(zhì)性狀進(jìn)行GWAS分析。結(jié)果顯示，在所有肉質(zhì)性狀的分析中，有4個(gè)性狀共檢測(cè)到516個(gè)全基因組水平顯著的SNPs（圖2、圖3、圖4、圖5）。其中，b45min性狀的關(guān)聯(lián)結(jié)果檢測(cè)到最多的362個(gè)全基因組水平顯著SNPs位點(diǎn)，其次是C22∶6n-3（150個(gè)）、DL（2個(gè)）以及C20∶3n-3（2個(gè)）。各性狀間無(wú)共享SNPs，表明這幾個(gè)肉質(zhì)性狀之間的SNP關(guān)聯(lián)模式可能存在差異。本研究根據(jù)SNP位點(diǎn)的基因組位置，對(duì)516個(gè)全基因組水平顯著的SNPs進(jìn)行了注釋，共注釋了68個(gè)基因。其中包括34個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因，詳見表2。

此外，所有肉質(zhì)性狀 GWAS 結(jié)果中檢測(cè)到共 4 134個(gè)達(dá)建議顯著閾值的 SNPs 與 9個(gè)性狀顯著相關(guān)。其中 b45min性狀結(jié)果檢測(cè)到最多的 2 544個(gè)達(dá)建議顯著閾值的 SNPs 位點(diǎn)，其次是 C22∶6n-3（1 069個(gè)）、DL（441個(gè)）、C20∶1n-9（28個(gè)）、C18∶2n-6（25個(gè)）、C20∶0（12個(gè)）、C20∶3n-3（10個(gè)）、C10∶0（3個(gè)）以及C18∶0（2個(gè)）。本研究基于 SNP 位點(diǎn)的基因組位置，對(duì)這4 134個(gè)達(dá)建議顯著閾值的 SNPs進(jìn)行了注釋，共注釋了338個(gè)基因，其中包括228個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因。

2.3 候選基因注釋及功能分析

為了進(jìn)一步探究肉質(zhì)性狀候選基因的生物學(xué)功能，本研究對(duì) GWAS 注釋的 338個(gè)候選基因進(jìn)行 GO 和 KEGG 分析。GO 分析結(jié)果表明：這些基因主要富集在金屬離子結(jié)合、細(xì)胞間黏附、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能、脂肪酸代謝、胰島素代謝、氧化還原酶活性以及輔酶活性等相關(guān)GO條目中（圖6A）。KEGG 富集分析結(jié)果表明：這些候選基因主要參與葉酸生物合成、脂肪酸延長(zhǎng)、花生四烯酸代謝、泛酸和輔酶 A 的生物合成以及細(xì)胞色素對(duì)外源物代謝等通路（圖6B）。這些結(jié)果表明，大部分候選基因可能通過(guò)調(diào)控離子結(jié)合、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能以及脂肪酸代謝等相關(guān)生物學(xué)通路來(lái)影響肉質(zhì)性狀。

2.4 EWAS 與 GWAS 共定位分析

在本研究中，如果 GWAS 的顯著 SNP 位點(diǎn)與 EWAS 顯著 CpG 位點(diǎn)距離在 2Mb 范圍內(nèi)，則被認(rèn)為是 GWAS 與 EWAS 重疊的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)?；诖藰?biāo)準(zhǔn)，在研究的 28個(gè)肉質(zhì)性狀中，在 3個(gè)性狀（b45min、DL 和 C22∶6n-3）上發(fā)現(xiàn)了GWAS與EWAS 重疊的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)。結(jié)果如圖7和表3所示。其中，在 b45min中發(fā)現(xiàn)了 8個(gè)顯著 CpG 位點(diǎn)和59個(gè)顯著 SNPs 位點(diǎn)位置接近；在DL發(fā)現(xiàn) 1個(gè)CpG位點(diǎn)和1個(gè)SNP位點(diǎn)位置接近；在C22∶6n-3中發(fā)現(xiàn)了 3個(gè)CpG位點(diǎn)與 146個(gè)SNPs位點(diǎn)位置接近。這些位點(diǎn)被確定為重疊的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)。

3 討 論

3.1 基于 GWAS 發(fā)現(xiàn)與肉質(zhì)性狀相關(guān)的 QTL

本研究基于GWAS對(duì)大白豬的28個(gè)肉質(zhì)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，在全基因組水平上檢測(cè)到516個(gè)顯著的SNPs位點(diǎn)，并鑒定了3個(gè)與肉質(zhì)性狀相關(guān)的QTL區(qū)域。在b45min性狀的關(guān)聯(lián)結(jié)果中，SSC14：17.74～19.94 Mb區(qū)域包含290個(gè)顯著的SNP。與豬QTL數(shù)據(jù)庫(kù)的比較發(fā)現(xiàn)，該基因組區(qū)域附近的大多數(shù)QTL都與豬的生長(zhǎng)性狀有關(guān)。例如，Ma等［12］在白杜洛克×二花臉豬群體研究中報(bào)道了該區(qū)域附近與眼肌面積相關(guān)的QTL。此外，SSC18：49.28～50.01 Mb區(qū)域包含7個(gè)顯著的SNPs。該基因組區(qū)域附近研究的大多數(shù)QTL都與胴體性狀有關(guān)。例如，Liu等［13］在杜洛克×皮特蘭群體的研究中鑒定了與DL性狀相關(guān)的QTL。

在C22∶6n-3的關(guān)聯(lián)結(jié)果中，SSC4∶101.55～103.75 Mb區(qū)域包含150個(gè)顯著的SNPs。Prez-Enciso等［14］報(bào)道了SSC4上與脂肪酸代謝相關(guān)的QTL。Uemoto等［15］在純種杜洛克群體的研究中也發(fā)現(xiàn)了與SSC4上的C18∶0顯著相關(guān)的QTL。

3.2 重要的候選基因

本研究通過(guò) GWAS對(duì)大白豬群體進(jìn)行了肉質(zhì)性狀相關(guān)重要候選基因的鑒定與發(fā)掘，共鑒定了68個(gè)候選基因。通過(guò)功能富集分析以及查閱相關(guān)文獻(xiàn)，確定了6個(gè)可能與肉質(zhì)性狀相關(guān)的重要候選基因，包括 NDUFB6、 GALNTL6、IGFBP1、ZFAT、CDH13 以及 MCUR1。

NDUFB6 編碼線粒體復(fù)合物Ⅰ亞基，該基因在線粒體呼吸中發(fā)揮重要作用［16-17］。研究表明，線粒體呼吸和肌紅蛋白的相互作用對(duì)畜禽屠宰前后的肉質(zhì)均有影響［18］。此外，研究還發(fā)現(xiàn)線粒體能調(diào)控低氧條件下肌紅蛋白的表達(dá)，而且線粒體及其中間產(chǎn)物對(duì)肌肉中肌紅蛋白的還原具有積極作用［19］。因此，NDUFB6基因可能通過(guò)影響線粒體功能來(lái)調(diào)節(jié)肌紅蛋白的表達(dá)，進(jìn)而對(duì)肉質(zhì)性狀產(chǎn)生影響。

GALNTL6主要編碼多肽 N-乙酰半乳糖胺基轉(zhuǎn)移酶樣6，并且在一項(xiàng)針對(duì)荷斯坦牛的 GWAS 分析中，發(fā)現(xiàn)該基因與牛胴體性狀存在關(guān)聯(lián)［20］。

IGFBP1屬于胰島素樣生長(zhǎng)因子家族，有研究表明，胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)在豬骨骼肌生長(zhǎng)中起著重要作用［21］。此外，胰島素樣生長(zhǎng)因子信號(hào)通路在調(diào)節(jié)骨骼肌生長(zhǎng)、分化和維持成人肌肉組織的穩(wěn)態(tài)方面起著關(guān)鍵作用［22］。因此，IGFBP1可能通過(guò)參與骨骼肌生長(zhǎng)分化而對(duì)肉質(zhì)性狀產(chǎn)生影響。

ZFAT編碼一種鋅指蛋白，Ishikura等［23］的研究發(fā)現(xiàn) ZFAT 在脂肪細(xì)胞的維持和分化中具有至關(guān)重要的作用。脂肪沉積與肉品質(zhì)密切相關(guān)，研究表明肌肉的IMF可以影響肉的風(fēng)味、嫩度以及多汁性，而且脂肪沉積量也直接影響肉色、滴水損失以及大理石花紋［24］。

CDH13編碼鈣粘蛋白超家族的成員，即鈣依賴性細(xì)胞粘附蛋白。基于大白豬基因型填充數(shù)據(jù)的一項(xiàng)一步法GWAS研究表明，CDH13與豬的體型性狀存在關(guān)聯(lián)［25］。

MCUR1在線粒體能量代謝中具有重要調(diào)節(jié)作用［26］。研究表明，MCUR1是線粒體 Ca2+攝取和維持正常細(xì)胞生物能所需的線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)通道復(fù)合體的關(guān)鍵組成部分［27］。鑒于線粒體功能對(duì)肉質(zhì)的重要影響，MCUR1基因可能通過(guò)參與線粒體功能而對(duì)肉質(zhì)性狀產(chǎn)生影響。

3.3 肉質(zhì)性狀的 GWAS 與 EWAS 共定位比較

通過(guò)比較 EWAS 鑒定的顯著 DNA 甲基化位點(diǎn)與 GWAS 鑒定的顯著 SNPs 之間的關(guān)聯(lián)模式，發(fā)現(xiàn)在 EWAS 分析中鑒定的顯著關(guān)聯(lián)在整個(gè)基因組更加分散，大多數(shù)顯著關(guān)聯(lián)局限于單個(gè) CpG 位點(diǎn)，此外，許多 CpG 位點(diǎn)的 DNA 甲基化與多個(gè)肉質(zhì)性狀相關(guān)，而諸如 b45min、DL 和 C22∶6n-3 等性狀與位于不同染色體的多個(gè)CpG位點(diǎn)相關(guān)。相比之下，由于基因組上存在大量的連鎖不平衡（LDs）以及SNP在基因組上密度更高，GWAS分析中鑒定的顯著關(guān)聯(lián)往往延伸幾kb甚至幾Mb。DNA甲基化的關(guān)聯(lián)模式反映了不同染色體區(qū)域中DNA甲基化的調(diào)控特性，這是不同基因組區(qū)域中DNA甲基化對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控不同所致。

在GWAS對(duì)肉質(zhì)性狀的分析中，鑒定的顯著關(guān)聯(lián)主要涉及 b45min、DL、C20∶3n-3和C22∶6n-3 等性狀。在EWAS分析中，也鑒定了這些性狀的大量顯著關(guān)聯(lián)信號(hào)。此外，這些性狀的顯著SNP位點(diǎn)和顯著CpG位點(diǎn)在基因組中的位置也有一些比較接近。許多研究表明，遺傳變異可以對(duì)DNA甲基化組的大部分產(chǎn)生重要影響［28］。因此，EWAS的一些顯著信號(hào)可能是由附近的SNP導(dǎo)致的，而SNP或其他影響因素的混淆可能是EWAS鑒定到大量與性狀相關(guān)的顯著DNA甲基化的主要驅(qū)動(dòng)因素。

4 結(jié) 論

4.1 本研究對(duì)140 頭大白豬群體的肉質(zhì)性狀進(jìn)行 GWAS 分析，鑒定了 516個(gè)全基因組水平顯著的 SNP 位點(diǎn)以及 68 個(gè)位置候選基因，根據(jù)候選基因的功能富集分析及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道篩選了 6 個(gè)重要候選基因，分別為 NDUFB6、GALNTL6、IGFBP1、ZFAT、 CDH13 以及 MCUR1。

4.2 本研究通過(guò)比較GWAS 和 EWAS 結(jié)果鑒定二者重疊的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)，在b45min關(guān)聯(lián)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)了8個(gè)顯著CpG位點(diǎn)與 59 個(gè)顯著SNPs位點(diǎn)位置接近，在DL關(guān)聯(lián)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)1個(gè)CpG位點(diǎn)與1個(gè)SNP位置接近，在 C22∶6n-3關(guān)聯(lián)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)3個(gè)CpG位點(diǎn)與146個(gè)顯著SNPs位點(diǎn)位置接近。

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（編輯 郭云雁）