常山抗球合劑對雞柔嫩艾美耳球蟲病的治療效果研究

摘 要：為了探討國家三類新獸藥常山抗球合劑對柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria" tenella）感染的雛雞的治療效果，用900只自然感染E.tenella的24日齡雛雞開展研究。將所有試驗雞只隨機分成陰性對照組、常山抗球合劑組、地克珠利陽性對照組，每組300只，隔離飼養(yǎng)。各給藥組均飲水給藥，常山抗球合劑組（每8 mL兌水1 L，混飲，連用6 d）；陽性對照組（每0.2 mL 0.5%地克珠利溶液兌水1 L，混飲，連用6 d）；陰性對照組正常飼養(yǎng)不給藥。結(jié)果顯示，常山抗球合劑組和陽性對照組可明顯減輕病雞臨床癥狀，病雞料重比和盲腸病變記分均顯著低于陰性對照組（P＜0.05），增重率和存活率顯著高于陰性對照組（P＞0.05）。試驗結(jié)果表明，常山抗球合劑對E.tenella感染的雛雞具有良好的治療效果，可明顯減輕臨床癥狀和提高生產(chǎn)性能，且不會在體內(nèi)產(chǎn)生殘留和誘導(dǎo)球蟲耐藥性產(chǎn)生。

關(guān)鍵詞：常山抗球合劑；雞球蟲??；柔嫩艾美耳球蟲；療效；地克珠利

中圖分類號：S859.79+5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1673-1085（2024）08-0027-07

雞球蟲病是一種由艾美耳屬的單細(xì)胞原蟲引起，寄生于雞腸道上皮細(xì)胞，主要以經(jīng)口食入具有感染性的孢子化卵囊進(jìn)行傳播[1]。目前，國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)大多以集約化飼養(yǎng)為主，由于生產(chǎn)規(guī)模擴大、飼養(yǎng)密度增加，隨糞便排出的球蟲卵囊相對集中，又因為雞舍內(nèi)恒定的溫度、濕度適合雞球蟲卵囊的孢子化，更容易造成雞球蟲病暴發(fā)[2]。因此，球蟲病作為對養(yǎng)禽業(yè)危害極大且呈全球性分布的禽類傳染病之一，可導(dǎo)致家禽生長受阻、飼料轉(zhuǎn)化率降低和肉蛋品質(zhì)下降，發(fā)病率和死亡率較高，給現(xiàn)代養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。在所有的雞球蟲屬中，柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）對雞的危害最為嚴(yán)重[3]，其主要寄生于雞盲腸內(nèi)，又稱為盲腸球蟲病，盲腸病變尤為明顯。

目前，雞球蟲病防治主要依靠化學(xué)藥物（地克珠利、妥曲珠利及常山酮等）和疫苗兩種方式，前者容易引起嚴(yán)重耐藥性、藥物殘留的問題，后者免疫效果差，因此迫切需要研發(fā)新型安全高效的抗球蟲藥物。于是人們將目光投向了中草藥，有些中草藥具有抗球蟲療效好、低殘留、不易產(chǎn)生耐藥性和可增強機體免疫力等優(yōu)點[4]，被用于防治雞球蟲病，逐漸得到大家的認(rèn)可。

中獸醫(yī)理論認(rèn)為，治療疾病時要對癥下藥，由內(nèi)而外加強機體防衛(wèi)能力和抗病能力。中藥復(fù)方是將不同功效的單味中藥結(jié)合使用，對治療球蟲感染有良好作用。王新愛等[5]通過預(yù)防人工感染E.tenella試驗，篩選出由青蒿、常山、白頭翁等中藥組成的具有良好抗球蟲效果的復(fù)方球蟲散，并結(jié)合體外抑制球蟲卵囊孢子化試驗，確定球蟲散能降低卵囊孢子化率、抑制球蟲的體外發(fā)育過程，對球蟲散進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)，球蟲散80目微粉制劑、5%濃度拌料時的抗球蟲指數(shù)最佳。

常山抗球合劑是由北京生泰爾科技股份有限公司研發(fā)申報的國家三類新獸藥，由常山、苦參、墨旱蓮、仙鶴草提取制備而成，前期研究已表明對人工感染的雞柔嫩艾美耳球蟲病具有較好的治療作用。為探究常山抗球合劑在實際臨床的治療效果，本研究以自然感染E.tenella的雛雞為試驗動物開展治療效果研究。

1" 材料與方法

1.1" 試驗動物

900只24日齡的青腳麻雞，來自四川省綿陽市某球蟲陽性雞場，經(jīng)蟲種鑒定均感染E.tenella；試驗前隔離飼養(yǎng)、自由飲水采食，雛雞飼料未添加任何抗球蟲藥物。

1.2" 試驗藥物

常山抗球合劑是以常山、苦參、墨旱蓮、仙鶴草作為主藥材，運用現(xiàn)代中藥生產(chǎn)工藝制備而成的呈棕黃色至棕褐色的液體，1 mL相當(dāng)于原生藥0.5 g，由愛迪森（北京）生物科技有限公司提供，批號：1706051。

0.5%地克珠利溶液，由愛迪森（北京）生物科技有限公司提供，批號：1703118。

2" 試驗方法

2.1" E.tenella的診斷方法

E.tenella的診斷方法主要參照《GB/T18647-2002動物球蟲診斷技術(shù)》[6]《雞球蟲病學(xué)》[2]等文獻(xiàn)資料。具體診斷方法如下：

2.1.1" 臨床癥狀" 發(fā)病初期，病雞精神萎靡不振，羽毛蓬亂、逆立無光澤，怕冷扎堆，縮頭閉眼，飲水增加，食欲減退，排水樣糞便，內(nèi)混血絲和氣泡。嚴(yán)重者的糞便呈鮮紅色，有時全是血液或是血塊，肛門周圍羽毛被血液污染。發(fā)病后期，雞冠、肉髯和眼結(jié)膜蒼白，兩翅下垂，站立不穩(wěn)。多在排血便后1～2 d內(nèi)衰竭死亡，死前有抽搐、搖頭、拍翅等癥狀。

2.1.2" 實驗室檢驗" 對疑似感染球蟲病的雞舍，從不同位置、多點采集新鮮糞樣，采用飽和鹽水漂浮法進(jìn)行檢查，若見糞便中存在球蟲卵囊，可確診為球蟲病。

對病死雞進(jìn)行剖檢，肉眼觀察，盲腸可見明顯病變，主要表現(xiàn)為盲腸壁增厚，盲腸明顯腫大、有散在出血點，有的盲腸內(nèi)容物明顯帶血。分別取病變盲腸黏膜、內(nèi)容物進(jìn)行顯微鏡檢查，均可見大量球蟲卵囊，經(jīng)過形態(tài)學(xué)方法和PCR鑒定并結(jié)合流行特點[7]，可以進(jìn)一步確診該雞群感染E.tenella。

2.2" 動物分組與給藥

隨機選取900只體重相近并感染E.tenella的雛雞，空腹12 h后開展擴大臨床試驗。將所有試驗雞隨機分成陰性對照組、常山抗球合劑組、陽性對照組，每組包含3個重復(fù)，每個重復(fù)100只，隔離飼養(yǎng)。常山抗球合劑組，每8 mL常山抗球合劑兌水1L，混勻，自由飲水，連用6 d；陽性對照組，每0.2 mL0.5%地克珠利溶液兌水1L，混勻，自由飲水，連用6 d；陰性對照組，正常飼養(yǎng)不給藥。第一次給藥當(dāng)天記為試驗第1天。各組試驗雞只除給予相應(yīng)藥物之外，其他處理相同。

2.3" 觀察指標(biāo)

2.3.1" 一般觀察" 試驗期間每日觀察試驗雞的糞便狀態(tài)、血便程度及雛雞的臨床表現(xiàn)，病死雞剖檢觀察盲腸病變情況。

2.3.2" 存活率" 記錄試驗期間各組試驗雞只的死亡情況，試驗結(jié)束后統(tǒng)計各組剩余雞只數(shù)，并作為存活雞只數(shù)計算存活率。如果死亡雞不是因為球蟲病死亡，則記為存活。

存活率（%）= 存活雞只數(shù)（只）÷總雞只數(shù)（只）×100%

2.3.3" 平均增重" 分別于試驗當(dāng)天、試驗第6天下午19：00撤去飼料，在試驗第1天、第7天上午7：00點對各組試驗雞只空腹稱量體重，每10只為一組進(jìn)行稱量，記錄總重量，算出每只雞的平均體重，分別作為各組雞試驗前平均體重和試驗?zāi)┢骄w重，計算各組試驗雞的增重率。

平均增重（g/只）=試驗?zāi)┢骄w重－試驗前平均體重；

增重率（%）=（試驗?zāi)┢骄w重－試驗前平均體重）/試驗前平均體重×100%

2.3.4" 料重比" 于試驗第1天稱重后，統(tǒng)一放入新飼料，記錄試驗期間飼料投入量；于試驗第6天下午19：00點，各組試驗雞只統(tǒng)一撤掉飼料，記錄剩余飼料量，統(tǒng)計整個試驗期各組試驗雞只的總采食量，計算料重比。

總采食量（g）=總投入量（g）－剩余飼料量（g）

料重比=平均采食量/平均增重

2.3.5" 盲腸病變記分" 于試驗第7天，各組隨機抽取60只雞，每個重復(fù)20只，進(jìn)行剖殺。剖取盲腸，按Johnson和Reid的方法[8]進(jìn)行盲腸病變記分。兩側(cè)盲腸病變不一致時，以嚴(yán)重一側(cè)為準(zhǔn)。病變記分在0～4范圍之內(nèi)，0表示無肉眼病變，4表示最嚴(yán)重病變。試驗中因E.tenella死亡的雞只，腸道病變記分記為4分。病變值=（抽取雞只+死亡雞只的病變記分總和）/（抽取雞只數(shù)+死亡雞只）×10。具體病變記分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

2.3.6" 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析" 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，Plt;0.05表示差異顯著。

3" 試驗結(jié)果

3.1" 臨床癥狀及解剖學(xué)變化

試驗期間，陰性對照組大部分雞只精神狀態(tài)沉郁，被毛粗亂無光澤，試驗前期可見大量醬色稀軟糞便，后期出現(xiàn)血便；每日都有雞只死亡，對病死雞進(jìn)行剖檢可見盲腸腫大、盲腸壁增厚、盲腸內(nèi)容物帶血或有盲腸芯。常山抗球合劑組和陽性對照組，隨著給藥次數(shù)的增加，病雞的血便及精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)。常山抗球合劑組在用藥結(jié)束后，試驗雞只死亡情況明顯減輕，零星死亡，雞群精神狀態(tài)良好、糞便基本正常，偶爾可見稀軟糞便，雞冠逐漸變紅，采食飲水基本恢復(fù)正常；陽性對照組在用藥結(jié)束后試驗動物狀態(tài)要好于常山抗球合劑組，雞只健康活潑、采食飲水正常、糞便正常。

3.2" 存活率

試驗結(jié)束后，各組雞只存活率如表2所示。從表2分析結(jié)果可知，陽性對照組、常山抗球合劑組的試驗雞的存活率要顯著高于陰性對照組（P＜0.05），其中陽性對照組存活率最高，為97.33%；常山抗球合劑組存活率為94.67%。

3.3" 生長性能

試驗組雞只平均增重以及料重比情況見表3。如表3所示，陽性對照組、常山抗球合劑組試驗雞的平均增重分別為123.64 g和118.78 g，增重率分別為29.78%和28.55%，均顯著高于陰性對照組（99.92 g和24.17%）（P＜0.05），而陽性對照組和常山抗球合劑組之間并無顯著性差異（P＞0.05）。陽性對照組和常山抗球合劑組料重比與陰性對照組相比無顯著差異（P＞0.05）。結(jié)果表明常山抗球合劑可增加雛雞平均增重，提高增重率，有效促進(jìn)雛雞的生長發(fā)育。

3.4" 盲腸病變記分

試驗結(jié)束，各組隨機抽取60只雞，每個重復(fù)抽取20只，剖殺取盲腸進(jìn)行病變記分，盲腸病變計分情況如表4所示。陰性對照組雞只盲腸病變最嚴(yán)重，平均病變值為30.28，顯著高于陽性對照組（8.96）和常山抗球合劑組（13.57）（P＜0.05）。陽性對照組病變情況也要顯著低于常山抗球合劑組（P＜0.05）。

4" 討論

本研究顯示地克珠利與常山抗球合劑對E.tenella感染雞只均有積極的治療效果，可減輕病雞臨床癥狀，顯著降低感染雛雞死亡率，改善球蟲病引起的生長緩慢，顯著提高增重率，降低料重比，二者效果相當(dāng)。對隨機抽取的60只雛雞以及病死雞進(jìn)行剖檢，可見地克珠利與常山抗球合劑組盲腸病變情況均顯著低于陰性對照組，地克珠利效果要略強于常山抗球合劑。綜上所述，常山抗球合劑對E.tenella感染具有良好的防治效果，且具有在體內(nèi)無殘留和不誘導(dǎo)球蟲耐藥性產(chǎn)生的優(yōu)勢。

由柔嫩艾美耳球蟲引起的球蟲病對養(yǎng)雞業(yè)危害最嚴(yán)重，寄生于雞盲腸內(nèi)，其球蟲卵囊毒力強，引起雛雞極高的發(fā)病率和死亡率，每年都給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[9-10]。據(jù)報道，在E.tenella感染初期，從病雞的糞便中無法檢測到卵囊，但在血便中可以檢測到大量裂殖體、裂殖子和宿主的脫落細(xì)胞。在感染后的7～9 d內(nèi)，可以在盲腸干酪樣內(nèi)容物中檢測到大量卵囊，但感染10 d后，卵囊的數(shù)量急劇減少甚至無法檢測到[11]。由于本研究為臨床擴大試驗，所有試驗雞只均為自然病例，具體感染天數(shù)未知，卵囊數(shù)量差異較大。因此，本試驗僅對各組雞只進(jìn)行了盲腸病變記分，并未每天收集試驗雞糞便稱重計算每克糞便卵囊數(shù)（Oocysts per gramme， OPG），因而沒有進(jìn)一步計算抗球蟲指數(shù)（Anticoccidial index，ACI）并將其作為藥物療效判定依據(jù)。

按照中獸醫(yī)辨證施治理論，雞球蟲病為外感濕熱，濕熱蘊集大腸，熱毒迫血妄行，導(dǎo)致糞便帶血，濕困脾土，致使雞群下痢，其治療原則應(yīng)以清熱燥濕、涼血止痢為主[12]。很多學(xué)者報道了單味中藥或組方的抗球蟲試驗，得到了與本試驗相似的結(jié)論。常山作為具有抗球蟲活性的中藥材，相關(guān)的研究報道很多，可單獨使用或作復(fù)方制劑的主藥使用。Zhang等[13]研究了不同劑量的常山提取物拌料后對E.tenella的治療作用，結(jié)果表明常山提取物對治療E.tenella感染有效，特別是與未用藥的對照組相比，20 mg/kg拌料可顯著提高增重、降低血痢、腸道病變評分和卵囊排泄量。劉傳敏等[14]研究由柴胡、黃柏、黃連等組成的中藥復(fù)方，能使感染E.tenella雞只的存活率達(dá)到91.7%，顯著高于感染不給藥組，證明復(fù)方有一定的抗球蟲作用。吳增華等[15]研究發(fā)現(xiàn)青蒿、仙鶴草、常山、肉桂、白頭翁組成的中藥方劑，以3%的濃度拌料時，可有效降低E.tenella感染病雞的死亡率，提高病雞增重率，ACI可達(dá)170.8，高于西藥對照組，抗球蟲效果良好。史萬玉等[16]采用人工感染E.tenella的方法，對由常山、柴胡、青蒿、白頭翁、地榆、黃芪等10多味中草藥，按照不同的組成和配比組配制的12個不同中藥復(fù)方的抗E.tenella的效果進(jìn)行了試驗觀察，結(jié)果有兩個組方效果最佳，ACI分別達(dá)到131.13和132.15。Yong等[17]報道了每天給予10 g/kg川楝子提取物對E.tenella感染有效，其ACI值為162.56，高于球痢靈（二硝托胺）的128.81。此外，研究者還發(fā)現(xiàn)青蒿素[18]、山蒼子[19]和蘆薈葉提取物[20]等中草藥具有抑制或殺滅E.tenella孢子的作用。

以常山、苦參、墨旱蓮、仙鶴草作為主藥材進(jìn)行組方，原因在于常山含常山堿、異常山堿等抗球蟲活性物質(zhì)；苦參性寒，內(nèi)含苦參堿、羥基苦參堿和臭豆堿等多種活性物質(zhì)，其醇提取物能殺死阿米巴原蟲；墨旱蓮味甘、性寒，有收斂、止血、補肝腎之功效；仙鶴草味苦、澀，有收斂止血、截瘧止痢、解毒補虛的作用。所以用以上諸藥組方，能達(dá)到較好的抗E.tenella效果。

5" 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，利用常山、苦參、墨旱蓮、仙鶴草制備的常山抗球合劑以8 ml/L水混飲，連用6 d，可有效治療雞E.tenella感染。同時提高雞的存活率、增重率和飼料轉(zhuǎn)化率，無毒無殘留，能夠顯著減少生產(chǎn)過程中的經(jīng)濟損失。

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Study on theTherapeutic Effect of Radix Dichroa Anti-coccidial Mixture on Eimeria Tenella in Chickens

CHI Jing

（Yantai muping district Animal epidemic disease prevention and control center， Yantai" 265508， China）

Abstract： In order to explore the therapeutic effect of Radix Dichroa Anti-coccidial Mixture （RDAM） prepared with Radix Dichroa， Sophora Flavescens， Eclipta alba， and Agrimonia pilosa as the main medicinal materials on chicks infected with E.tenella and to compare it with diclazuril， an extended clinical trial was carried out with 900 naturally infected E. tenella chicks at the age of 24 days. All test chickens were randomly divided into negative control group， RDAM group， and positive control group， with 300 chickens in each group， and kept in isolation. Each group was administered with drinking water， RDAM group （Mix every 8 ml with 1L of water to" drink， for 6 days）; positive control group （Mix every 0.2 mL 0.5% diclazuril solution with 1L of water to drink， for 6 days）; and the negative control group was kept normally without administration of drugs. The results showed that at the end of the treatment， the RDAM group and the positive control group could significantly reduce the clinical symptoms of the sick chickens， and the feed conversion ratio and the cecum lesion score of the sick chickens were significantly lower than those of the negative control group （P＜0.05）， and the weight gain rate and survival rate were significantly higher than those of the negative control group （P＞0.05）. The test showed that RDAM had a good therapeutic effect in chickens infected with E.tenella， which could significantly reduce clinical symptoms， as well as improve production performance， and it will not produce residues or drug resistance.

Keywords：" Radix Dichroa Anti-coccidial Mixture; Chicken coccidiosis; Eimeria tenella; Efficacy; Diclazuril