模擬炎癥微環(huán)境下紫草素對(duì)人牙周膜干細(xì)胞增殖和成骨分化的影響

陳意磊, 于 倩,2, 張文杰, 趙 今,2

(1新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院(附屬口腔醫(yī)院)牙體牙髓病科; 2新疆維吾爾自治區(qū)口腔醫(yī)學(xué)研究所, 烏魯木齊 830054)

慢性牙周炎是發(fā)生于牙周支持組織不可逆轉(zhuǎn)的慢性炎癥性疾病,可導(dǎo)致牙槽骨吸收、牙齒脫落等不良癥狀[1]。目前臨床上常用的治療方法是機(jī)械清除牙結(jié)石,局部使用抗菌藥物輔助治療[2]。對(duì)于已喪失牙周組織的患者,使用傳統(tǒng)的治療方法并不能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的牙周組織再生[3]。人牙周膜干細(xì)胞(Human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs)具有高可塑性和多潛能性等特點(diǎn)成為牙周炎患者牙周組織和骨再生的理想候選細(xì)胞,對(duì)牙周治療具有重要意義[4-6]。有研究表明炎癥環(huán)境可抑制hPDLSCs的增殖和成骨分化[7],牙周組織再生也就受到抑制,因此需要探尋一種有效的策略增強(qiáng)炎癥環(huán)境下hPDLSCs的成骨分化能力。天然藥物輔助治療牙周炎具有一定的優(yōu)勢(shì)[8],例如巴戟天多糖能在炎癥環(huán)境下使牙周膜細(xì)胞乙?；?表達(dá)降低,核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域(Nucleotide Binding Oligomerization Domain, NOD)樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3表達(dá)升高,發(fā)揮抗炎作用[9]。趙斌等[10]研究發(fā)現(xiàn)蘆丁在炎癥環(huán)境下能夠促進(jìn)hPDLSCs成骨分化。紫草素是從紫草中提取的一種萘醌類(lèi)活性成分,具有抗菌消炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤等作用[11-14]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)紫草素可通過(guò)骨保護(hù)素/核因子κB受體活化因子配體信號(hào)軸促進(jìn)小鼠成骨前體細(xì)胞細(xì)胞增殖和成骨分化,還可通過(guò)抑制破骨相關(guān)基因的表達(dá),從而抑制破骨細(xì)胞生成[15-16]。本研究在脂多糖誘導(dǎo)炎癥微環(huán)境下探究紫草素對(duì)hPDLSCs增殖與成骨分化的影響,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試藥紫草素(上海源葉生物科技有限公司,B21682); α-MEM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司,C12571500BT);磷酸鹽緩沖溶液(Phosphate buffer saline, PBS,美國(guó)Cytiva公司,02-024-1ACS);青鏈霉素(美國(guó)BI公司,03-031-1B);胰蛋白酶(美國(guó)BI公司,03-050-1B);胎牛血清(美國(guó)BI公司,04-001-1ACS);二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide, DMSO,(北京索萊寶生物科技有限公司,D8371);牙齦卟啉單胞菌脂多糖(英國(guó)InvivoGen公司,LPG-41-01);CD29(美國(guó)Biolegend公司,303021);CD105(美國(guó)Biolegend公司,323217);CD34(美國(guó)Biolegend公司,343515);CD45(美國(guó)Biolegend公司,368508);細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒CCK-8(英國(guó)Proteintech公司,PF00004-500T);牙周膜干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒、茜素紅(美國(guó)Cyagen公司,HUXXC-90021); ALP染色試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司,C3206);BCA蛋白定量試劑盒(碧云天生物技術(shù)有限公司,P0010-500);ALP活性測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所,A059-2);Trizol(invitrogen公司,15596-026);cDNA合成試劑盒(英國(guó)Thermo Fisher Scientific公司,4368814);RT-PCR試劑盒(Takara公司,RR820A);引物(生工生物工程有限公司,SGYW020)。

1.2 儀器MINI-10K型迷你離心機(jī)(杭州佑寧儀器有限公司);VORTEX-6型混勻儀(其林貝爾儀器制造有限公司);XS1003S型電子天平(METTLER TOLEDO);SW-CJ-2F型超凈工作臺(tái)(博迅實(shí)業(yè)有限公司);CytoFLEX型流式細(xì)胞儀(貝克曼庫(kù)爾特公司);DM IL LED型倒置顯微鏡(德國(guó)徠卡公司);BC-J160型二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(博迅醫(yī)療生物儀器有限公司);CHT210R型高速冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);Multiskan型GO全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(賽默飛世爾公司);A51683型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(賽默飛世爾公司);Forma 88500型-80℃冰箱(賽默飛世爾公司)。

1.3 方法

1.3.1 hPDLSCs的分離和培養(yǎng) 收集2023年3月-5月就診于新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院(附屬口腔醫(yī)院口腔外科門(mén)診)因正畸需拔除的前磨牙或智齒(12～25歲牙周健康者),將離體牙保存到預(yù)冷的α-MEM完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清,1%青鏈霉素,89% α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基)中,30 min內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。在超凈臺(tái)內(nèi),用α-MEM完全培養(yǎng)基反復(fù)沖洗牙根直至無(wú)血漬,用12號(hào)刀片小心刮取根中1/3牙周膜,剪成1 mm3的組織塊,收集于離心管中,1 000 r/min離心3 min,此過(guò)程重復(fù)3次,將組織塊置于培養(yǎng)瓶底部,翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,加入3 mL α-MEM完全培養(yǎng)基,置于37℃、5% CO2環(huán)境下干涸2 h,翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶孵育。培養(yǎng)基3 d更換1次,待細(xì)胞鋪滿(mǎn)瓶底70%～90%時(shí),用0.25%胰蛋白酶消化,按1∶3傳代,標(biāo)記為第1代細(xì)胞(P1)。取P3-P5代用作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本研究通過(guò)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的審批(審批號(hào):K202304-19),所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.3.2 藥物配置 將14.42 mg紫草素粉末溶于1 mL DMSO中,混勻后用0.22 nm濾器過(guò)濾得到5×104μmol/L的紫草素母液,分裝于EP管中,置于液氮罐保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)稀釋母液分別至4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062 5 μmol/L。

1.3.3 hPDLSCs鑒定 取狀態(tài)良好的P3代細(xì)胞采用流式細(xì)胞檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞的表面標(biāo)志物,其中陽(yáng)性標(biāo)志物CD105、CD29,陰性標(biāo)志物CD34、CD45。

1.3.4 CCK-8檢測(cè) 紫草素對(duì)不同狀態(tài)hPDLSCs的增殖影響實(shí)驗(yàn)分組:空白組(單純培養(yǎng)基)、不同濃度紫草素組( 0、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2、4 μmol/L),每孔加入200 μL。每孔2×103個(gè)細(xì)胞,每組4個(gè)復(fù)孔,按照分組連續(xù)培養(yǎng)7 d,分別在1、3、5、7 d使用CCK-8試劑盒測(cè)量吸光度值。根據(jù)測(cè)定結(jié)果,選用對(duì)hPDLSCs有促進(jìn)增殖作用的紫草素濃度范圍,進(jìn)行分組:空白組(單純培養(yǎng)基)、LPS組(Porphyromonasgingivalislipopolysaccharide,P.g-LPS ,10 μg/mL)、LPS+不同濃度紫草素組(P.g-LPS+不同濃度紫草素),每孔加入200 μL,每孔2×103個(gè)細(xì)胞,每組4個(gè)復(fù)孔。體外模擬炎癥微環(huán)境選用牙齦卟啉單胞菌脂多糖(P.g-LPS),濃度為10 μg/mL,LPS預(yù)先誘導(dǎo),添加紫草素,連續(xù)培養(yǎng)72 h,分別在24、48、72 h時(shí)按CCK-8試劑盒說(shuō)明書(shū)操作,用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處吸光度。

1.3.5 分組 根據(jù)“1.3.4”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取后續(xù)實(shí)驗(yàn)最佳紫草素濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組:空白組(單純培養(yǎng)基)、紫草素組(實(shí)驗(yàn)藥物濃度紫草素)、LPS組(P.g-LPS ,10 μg/mL)、紫草素+LPS組(P.g-LPS+實(shí)驗(yàn)藥物濃度紫草素,先加入P.g-LPS誘導(dǎo)炎癥微環(huán)境,后加入實(shí)驗(yàn)藥物濃度的紫草素)。

1.3.6 劃痕實(shí)驗(yàn) 按“1.3.5”項(xiàng)下方法分組,將hPDLSCs以5×104個(gè)/孔的密度接種于12孔板中,待細(xì)胞融合至80%時(shí),用200 μL移液槍槍頭在孔板底部劃一均勻橫線(xiàn),每組3個(gè)復(fù)孔,分別在0、24 h在倒置顯微鏡下測(cè)量劃痕寬度,用Image J軟件計(jì)算遷移率,遷移率=(0 h劃痕寬度-24 h劃痕寬度/0 h劃痕寬度)×100%。

1.3.7 細(xì)胞上清液中IL-6、IL-18的測(cè)定 將hPDLSCs以3×104個(gè)/孔的密度接種于24孔板中,待細(xì)胞融合至80%時(shí),按“1.3.5”項(xiàng)下分組方法更換培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),每組3個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)72 h后收集于離心管中,4 000 r/min離心20 min,取上清液,-80℃保存。按ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)方法檢測(cè)上清液中IL-6、IL-18的水平。

1.3.8 堿性磷酸酶染色 將hPDLSCs以2×105個(gè)/孔的密度接種于6孔板中,待細(xì)胞融合至80%時(shí),按“1.3.5”項(xiàng)下分組方法更換成品成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),每組3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)7 d后進(jìn)行堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)染色,顯微鏡下觀(guān)察并拍照記錄。

1.3.9 ALP活性檢測(cè) 將hPDLSCs以3×104個(gè)/孔的密度接種于24孔板中,待細(xì)胞融合至80%時(shí),按“1.3.5”項(xiàng)下分組方法更換成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基,每組3個(gè)復(fù)孔,7 d后終止培養(yǎng),裂解細(xì)胞后1 000 r/min離心10 min上清為待測(cè)樣本。按BCA蛋白試劑盒說(shuō)明書(shū)操作,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)以計(jì)算各組蛋白濃度。按照ALP活性測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)操作,在96孔板中進(jìn)行分組:空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔,用酶標(biāo)儀測(cè)定520 nm處各孔吸光度,細(xì)胞ALP活力=(測(cè)定孔OD值-空白孔OD值)/標(biāo)準(zhǔn)孔OD值-空白孔OD值×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(0.02 mg/mL)÷待測(cè)樣本蛋白濃度。

1.3.10 茜素紅染色 將hPDLSCs以5×105個(gè)/孔的密度接種于35 mm培養(yǎng)皿中,待細(xì)胞融合至80%時(shí),按“1.3.5”項(xiàng)下方法分組更換成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),每組3個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)21 d后終止,進(jìn)行茜素紅染色,顯微鏡下觀(guān)察并拍照記錄,Image J軟件計(jì)算結(jié)節(jié)相對(duì)含量,礦化結(jié)節(jié)相對(duì)含量=紫草素組礦化結(jié)節(jié)數(shù)/空白組礦化結(jié)節(jié)數(shù)×100%。

1.3.11 RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá) 按“1.3.9”項(xiàng)下方法培養(yǎng)hPDLSCs,每組3個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)7 d后終止,采用Trizol法提取總RNA,定量后用反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。在實(shí)時(shí)定量熒光PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增,以GAPDH 為內(nèi)參。RT-PCR 反應(yīng)條件:(1)預(yù)變性95℃,2 min;(2)變性95℃,5 s;(3)退火58℃,30 s,共40個(gè)循環(huán);(4)延伸72℃,5 min。用2-△△Ct相對(duì)定量法檢測(cè)檢測(cè)骨鈣素(Osteocalcin, OCN)、RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runt-related transcription factor 2, RUNX2)、ALP mRNA的表達(dá),引物序列見(jiàn)表1。

表1 RT-PCR引物

2 結(jié)果

2.1 hPDLSCs形態(tài)學(xué)與鑒定組織塊法分離培養(yǎng)原代hPDLSCs,培養(yǎng)120 h后可見(jiàn)組織塊周?chē)虚L(zhǎng)梭形細(xì)胞爬出,呈漩渦狀生長(zhǎng)(圖1)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)hPDLSCs表面標(biāo)志物結(jié)果顯示:CD29(99.91%)、CD105(92.34%)、CD34(0.76%)、CD45(0.32%),證實(shí)分離細(xì)胞符合干細(xì)胞特性,見(jiàn)圖2。

注： 圖1A為原代hPDLSCs; 圖1B為P3代hPDLSCs; 標(biāo)尺大小: 100 μm。

圖2 hPDLSCs表面標(biāo)志物CD105、CD29、CD45、CD34結(jié)果圖

2.2 紫草素對(duì)hPDLSCs增殖的影響CCK-8結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,在1 d時(shí)各濃度紫草素組細(xì)胞增殖能力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)圖3A;在3、 5、 7 d時(shí), 當(dāng)紫草素濃度大于1 μmol/L時(shí),隨著紫草素濃度增加,對(duì)細(xì)胞有抑制作用,當(dāng)紫草素濃度在0.062 5～0.5 μmol/L范圍時(shí)對(duì)hPDLSCs有促進(jìn)增殖作用,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖3B-D。模擬炎癥微環(huán)境下:在24、48、72 h時(shí),與對(duì)照組相比,LPS組有抑制細(xì)胞增殖的作用;與LPS組相比, 0.062 5～0.5 μmol/L濃度的紫草素+LPS組促進(jìn)hPDLSCs增殖的作用, 且0.5 μmol/L濃度的紫草素作用最佳,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖4。結(jié)合紫草素對(duì)hPDLSCs增殖活性的結(jié)果,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇0.5 μmol/L的藥物濃度。

注：圖3A為1 d結(jié)果,圖3B為3 d結(jié)果,圖3C為5 d結(jié)果,圖3D為7 d結(jié)果。與空白組比較, *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001。

注: 圖4A為1 d結(jié)果; 圖4B為2 d結(jié)果; 圖4C為3 d結(jié)果; 與LPS組比較, **P<0.01, ***P<0.001。

2.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)與空白組相比,LPS組細(xì)胞遷移率減小,紫草素細(xì)胞遷移率增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與LPS組相比,紫草素+LPS組細(xì)胞遷移率增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖5、6。

圖5 各組不同時(shí)間細(xì)胞劃痕結(jié)果顯微圖(×40)

注:與空白組比較, ***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

2.4 細(xì)胞上清液中IL-6、IL-18的水平的測(cè)定與空白組相比,LPS組中IL-6、IL-18水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與LPS組相比,紫草素+LPS組中IL-6、IL-18水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),如圖7、8。

注:與空白組比較,***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

注:與空白組比較,***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

2.5 紫草素對(duì)模擬炎癥環(huán)境下hPDLSCs的ALP活性的影響成骨誘導(dǎo)21 d后,與空白組相比,LPS組的染色深度明顯降低,紫草素組的染色深度增加;與LPS組相比,紫草素+LPS組的染色深度加深。如圖9、10。

注:與空白組比較,***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

注：堿性磷酸酶染色顯微鏡下圖(×40),標(biāo)尺大小:100 μm。

2.6 紫草素對(duì)模擬炎癥環(huán)境下hPDLSCs礦化作用的影響成骨誘導(dǎo)504 h后,與空白組相比,LPS組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)減少,紫草素組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量增加且染色較深;與LPS組相比,紫草素+LPS組的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量明顯增加。如圖11、12。

注：茜素紅染色鏡下圖(×40),標(biāo)尺大小:100 μm。

注:與空白組比較, ***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

2.7 紫草素對(duì)模擬炎癥環(huán)境下hPDLSCs中OCN、RUNX2、ALP表達(dá)的影響RT-PCR結(jié)果顯示:與空白組相比,LPS組中OCN、RUNX2、ALP表達(dá)降低,而紫草素組OCN、RUNX2、ALP表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與LPS組相比,紫草素+LPS組中OCN、RUNX2、ALP表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),如圖13、14、15。

注:與空白組比較, ***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

注:與空白組比較, ***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

注:與空白組比較, ***P<0.001; 與LPS組比較, ###P<0.001。

3 討論

牙周病的發(fā)生涉及一系列免疫炎癥反應(yīng),炎癥微環(huán)境會(huì)抑制牙周細(xì)胞成骨成血管反應(yīng),影響牙周組織的再生[17]。hPDLSCs是一種牙源性間充質(zhì)干細(xì)胞,在牙周組織重建和骨再生中發(fā)揮重要作用[18]。研究發(fā)現(xiàn)炎癥會(huì)抑制牙周組織的再生,紫草素具有明顯的抗炎活性[19],能下調(diào)由脂多糖刺激的Toll樣受體4的表達(dá)水平,抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,并促進(jìn)IL-10的分泌[20]。本課題組研究表明,紫草素對(duì)牙齦卟啉單胞菌和具核梭桿菌均有抑菌作用,并且可以減輕實(shí)驗(yàn)性小鼠牙周炎的炎癥反應(yīng),抑制牙槽骨的吸收及破骨細(xì)胞的生成[21]。

本研究通過(guò)P.g-LPS刺激模擬體外炎癥微環(huán)境[22],與TNF-α誘導(dǎo)結(jié)果相同,發(fā)現(xiàn)LPS能明顯抑制hPDLSCs的增殖,說(shuō)明LPS能成功模擬炎癥微環(huán)境。利用CCK-8篩選出對(duì)hPDLSCs沒(méi)有毒性且具有增殖作用的紫草素濃度范圍后,在炎癥微環(huán)境下篩選出增殖作用最佳的紫草素濃度為0.5 μmol/L。劃痕實(shí)驗(yàn)?zāi)苣M細(xì)胞的愈合能力[23],本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明0.5 μmol/L濃度的紫草素能在炎癥環(huán)境下促進(jìn)細(xì)胞的遷移。牙周炎發(fā)生時(shí)IL-6可以使中性粒細(xì)胞激活,加劇炎癥反應(yīng),還促使血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)的生成,進(jìn)而促進(jìn)新生血管形成導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加劇[24]。IL-18可以誘導(dǎo)趨化因子、基質(zhì)金屬蛋白酶9(Matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的釋放[25],導(dǎo)致組織降解,還能促進(jìn)炎癥細(xì)胞的吞噬、抗感染,誘導(dǎo)慢性牙周炎癥急性期蛋白的合成[26]。ELISA結(jié)果顯示,對(duì)比空白組,LPS組的上清液中IL-6、IL-18水平升高,證明促炎成功。0.5μmol/L濃度的紫草素能夠降低IL-6、IL-18水平,說(shuō)明0.5 μmol/L濃度的紫草素具有明顯的抗炎作用,這與前期研究結(jié)果一致[27]。

牙周組織再生最重要的是能否成骨,堿性磷酸酶染色和茜素紅染色是觀(guān)察成骨的標(biāo)志性方法[28-29]。經(jīng)成骨誘導(dǎo)后,ALP染色及活性測(cè)試和茜素紅染色結(jié)果顯示,LPS能夠明顯抑制hPDLSCs的成骨分化,說(shuō)明炎癥環(huán)境能抑制成骨分化。而0.5 μmol/L濃度的紫草素能夠明顯促進(jìn)成骨分化,在炎癥環(huán)境下也能促進(jìn)成骨分化,這與課題組前期研究結(jié)果一致。說(shuō)明0.5 μmol/L濃度的紫草素在正常環(huán)境及炎癥環(huán)境下,均具有促進(jìn)hPDLSCs成骨分化的作用。RNUX2作為一種骨形成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,能夠調(diào)節(jié)一系列基因的表達(dá),不僅能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖分化,還參與骨重塑和骨修復(fù)等過(guò)程[30]。OCN是一種鈣化組織的非膠原基質(zhì)蛋白,是一種明確的成骨細(xì)胞標(biāo)志物與膠原蛋白和磷灰石結(jié)合,在骨吸收和礦化中發(fā)揮作用[31]。OCN、ALP是晚期骨形成和成骨細(xì)胞分化的成骨標(biāo)志物[32]。本實(shí)驗(yàn)RT-PCR結(jié)果表明,0.5 μmol/L濃度的紫草素在正常及炎癥微環(huán)境中均能不同程度的促進(jìn)RUNX2、OCN和ALP的基因表達(dá)。但紫草素在炎癥環(huán)境下促進(jìn)hPDLSCs成骨分化的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述,適當(dāng)濃度的紫草素在炎癥環(huán)境下能夠促進(jìn)hPDLSCs的增殖和成骨分化,可作為慢性牙周炎防治的潛在備選藥物。由于口腔是個(gè)復(fù)雜的環(huán)境,本課題組將進(jìn)一步探究炎癥微環(huán)境下紫草素對(duì)牙周組織再生的影響及機(jī)制,以期為牙周病的防治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。