基于數(shù)據(jù)挖掘及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探究朱文宗治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)用藥規(guī)律及機(jī)制

謝佳嶧，蔣越，陳婷婷 指導(dǎo)：朱文宗，3

1. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬溫州市中醫(yī)院，浙江 溫州 325029

2. 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 溫州 325015

3. 溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，浙江 溫州 325001

神經(jīng)性失眠是無(wú)明確病因下出現(xiàn)的或入睡困難、或睡而不深、或多夢(mèng)早醒等現(xiàn)象[1]，影響軀體、精神功能[2]。有調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)存在失眠的人群達(dá)45.2%，有30.8%的失眠受訪者精神焦慮與睡眠障礙并存[3]。有研究表明，失眠與焦慮存在雙向性影響，會(huì)導(dǎo)致癥狀愈發(fā)嚴(yán)重[4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)，多使用苯二氮?類藥物聯(lián)合5-羥色胺（5-HT）受體拮抗劑等[5]，起效雖快，但有較多的患者出現(xiàn)不良反應(yīng)。

朱文宗教授是主任中醫(yī)師、第四批全國(guó)中醫(yī)臨床優(yōu)秀人才，師承于國(guó)醫(yī)大師王琦院士，繼承并發(fā)揚(yáng)了王琦院士對(duì)中醫(yī)腹診的獨(dú)到見(jiàn)解。其在臨床上將腹診與中醫(yī)四診結(jié)合，更全面、客觀地診察疾病，活用經(jīng)方。朱文宗教授將經(jīng)方與腹診理論運(yùn)用于臨床數(shù)年，對(duì)神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的診療具有獨(dú)到的認(rèn)識(shí)。本研究通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方式探究朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的中藥處方，歸納朱文宗教授的用藥經(jīng)驗(yàn)，分析內(nèi)在機(jī)理。

1 資料與方法

1.1 處方收集 收集2020年2月—2022年12月朱文宗教授于浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬溫州市中醫(yī)院治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)患者的中藥處方。神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的診斷均參考《中國(guó)精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)第三版（精神障礙分類）》[6]。篩選出308 份處方納入研究，將處方數(shù)據(jù)錄入Excel 軟件，建立數(shù)據(jù)庫(kù)。使用IBM SPSS Statistics 26 軟件對(duì)處方中患者的基本信息（性別、年齡）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，308 份處方中包括男114 例（37%），平均年齡（50.25±1.29）歲；女194 例（63%），平均年齡（50.84±0.91）歲。

1.2 數(shù)據(jù)規(guī)范化 參考《中華人民共和國(guó)藥典：一部》[7]及《中藥學(xué)》[8]對(duì)1.1 項(xiàng)的Excel 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，如“仙靈脾”統(tǒng)一更改為“淫羊藿”，“巴戟肉”統(tǒng)一更改為“巴戟天”等。功效相近的炮制后的藥物名稱均統(tǒng)一為生品的中藥名稱，如“姜半夏”“法半夏”統(tǒng)一更改為“半夏”，“麩炒白術(shù)”“生白術(shù)”統(tǒng)一更改為“白術(shù)”等。建立中藥處方數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.3 數(shù)據(jù)挖掘 將1.2項(xiàng)的中藥處方數(shù)據(jù)庫(kù)導(dǎo)入中醫(yī)傳承計(jì)算平臺(tái)V3.0，通過(guò)“數(shù)據(jù)分析”模塊，經(jīng)由“統(tǒng)計(jì)分析”和“方分析”功能，得出中藥頻次、中藥類別以及中藥性、味、歸經(jīng)的分析結(jié)果。排序篩選得出高頻藥物數(shù)據(jù)后，將其導(dǎo)入IBM SPSS Modeler 18.0軟件，得到高頻藥物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)圖，再采用Apriori算法對(duì)高頻藥物進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析。通過(guò)上述數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果，將藥物頻次、支持度、置信度及鏈接強(qiáng)度最高的藥物組合歸納，得出核心藥物組。

1.4 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

1.4.1 核心藥物活性成分及作用靶點(diǎn)篩選 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP），設(shè)置口服生物利用度（OB）≥30%及類藥性（DL）≥0.18，篩選核心藥物組的活性成分及作用靶點(diǎn)，因核心藥物中甘草主要起到調(diào)和諸藥的作用，故將其省去。后通過(guò)UniProt 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org/）統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化篩選得到的作用靶點(diǎn)名稱。

1.4.2 疾病靶點(diǎn)篩選 以“insomnia”“anxiety”為檢索詞，分別在DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.drugbank.com/）、基因組注釋數(shù)據(jù)平臺(tái)（GeneCards）（https：//www.genecards.org/）、藥物靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)（TTD）（http：//db.idrblab.net/ttd/）以及在線人類孟德?tīng)栠z傳（OMIM）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//omim.org/）中進(jìn)行檢索，并通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)將靶點(diǎn)名稱進(jìn)行統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范。

1.4.3 疾病-核心藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 通過(guò)R 語(yǔ)言軟件將核心藥物活性成分的作用靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)取交集，得到藥物-疾病交集靶點(diǎn)，并繪制韋恩圖。再將核心藥物活性成分及其作用靶點(diǎn)與藥物-疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件構(gòu)建“疾病-核心藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，篩選出核心活性成分。

1.4.4 蛋白質(zhì)互相作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)分析 將藥物-疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/），設(shè)置置信度≥0.400后進(jìn)行計(jì)算，將計(jì)算得出的結(jié)果數(shù)據(jù)導(dǎo)出后，導(dǎo)入至Cytoscape 3.9.1 軟件，進(jìn)行可視化操作，根據(jù)度值（degree）獲得關(guān)鍵活性成分。

1.4.5 基因本體（GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析 將核心藥物和疾病的共同核心靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//metascape.org/gp/index.html#/main/step1），進(jìn)行GO 功能富集分析和KEGG通路富集分析，將結(jié)果篩選導(dǎo)入微生信云平臺(tái)（http：//www.bioinformatics.com.cn/）以及Cytoscape 3.9.1軟件進(jìn)行可視化處理。

2 研究結(jié)果

2.1 高頻藥物統(tǒng)計(jì)結(jié)果 見(jiàn)表1。本研究共納入處方308 個(gè)，涉及中藥共計(jì)174 味，累計(jì)使用頻次4 064 次。將174 味中藥按照分類排序，包含藥物最多的5 類分別為補(bǔ)虛藥（30 味）、清熱藥（22 味）、解表藥（17 味）、活血化瘀藥（15 味）和安神藥（10 味）。將處方中所有藥物按照使用頻次排序，并計(jì)算其在308 個(gè)處方中的使用頻率，其中使用頻次≥60 次的高頻藥物共20 味，可推測(cè)為朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的常用藥物，輸入高頻中藥數(shù)據(jù)，建立高頻中藥數(shù)據(jù)庫(kù)，其中使用頻次排在前5位的藥物依次為甘草、半夏、黃芩、柴胡、黨參。

表1 高頻藥物統(tǒng)計(jì)結(jié)果（頻次≥60次）

2.2 中藥性、味、歸經(jīng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果 見(jiàn)圖1～3。將174 味中藥進(jìn)行性、味、歸經(jīng)分析，結(jié)果顯示，藥性以溫性為主，其次為平性、微寒性等。藥味以辛味為主，其次為苦味、甘味等。歸經(jīng)以肺、脾兩經(jīng)為主，其次為心經(jīng)、肝經(jīng)、胃經(jīng)。

圖1 中藥四氣雷達(dá)圖

圖2 中藥五味雷達(dá)圖

圖3 中藥歸經(jīng)雷達(dá)圖

2.3 高頻藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則分析結(jié)果 見(jiàn)表2。將2.1 項(xiàng)的高頻中藥數(shù)據(jù)導(dǎo)入IBM SPSS Modeler 18.0 軟件進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，采用Apriori 算法，設(shè)置最大前項(xiàng)數(shù)為2，最低條件支持度為50%，最小規(guī)則置信度為80%。按支持度從高到低對(duì)核心藥對(duì)進(jìn)行排名，取前12組信息。得出結(jié)果增益均大于1，說(shuō)明篩選得出的藥對(duì)均具有正相關(guān)性，可見(jiàn)由半夏-黃芩-甘草-黨參-柴胡組成的藥物組合具有較高支持度。

表2 高頻藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則分析結(jié)果

2.4 復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析 將2.1 項(xiàng)的高頻中藥數(shù)據(jù)導(dǎo)入IBM SPSS Modeler 18.0 軟件，將計(jì)算結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件，繪制高頻藥物關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖（見(jiàn)圖4），代表藥物的圓顏色越深、形狀越大，則說(shuō)明該藥物使用頻率越高（即2.1 項(xiàng)的高頻藥物），藥物之間的線條顏色越深、寬度越粗，則說(shuō)明藥物之間的鏈接越強(qiáng)。根據(jù)圖4 可見(jiàn)，半夏、黃芩、甘草、柴胡、黨參之間存在強(qiáng)鏈接。

圖4 高頻藥物關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析 通過(guò)上述結(jié)果篩選得出核心藥物組為半夏-黃芩-柴胡-黨參（去調(diào)和之甘草），采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行分析。

2.5.1 核心藥物活性成分及作用靶點(diǎn)篩選 通過(guò)在TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，篩選得到半夏、黃芩、柴胡、黨參的活性成分，分別為半夏13 個(gè)、黃芩36 個(gè)、柴胡17 個(gè)、黨參21 個(gè)，刪除重復(fù)靶點(diǎn)以及無(wú)對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)信息后，得出上述活性成分作用靶點(diǎn)，共計(jì)311個(gè)。

2.5.2 “疾病-核心藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖”構(gòu)建分別從DrugBank 等數(shù)據(jù)庫(kù)檢索疾病靶點(diǎn)，在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果中設(shè)置Relevance score≥1 篩選核心靶點(diǎn)信息，將各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索出來(lái)的結(jié)果合并，刪除重復(fù)值，得到478 個(gè)失眠相關(guān)靶點(diǎn)、1 655個(gè)焦慮相關(guān)靶點(diǎn)，兩種疾病的相同靶點(diǎn)共335個(gè)，通過(guò)R 語(yǔ)言軟件將311 個(gè)藥物靶點(diǎn)與疾病相同靶點(diǎn)取交集，得到63 個(gè)藥物-疾病交集靶點(diǎn)，并繪制韋恩圖，見(jiàn)圖5。將核心藥物的活性成分及其作用靶點(diǎn)和藥物-疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件，刪除不相關(guān)聯(lián)的活性成分，繪制疾病-核心藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖6。可見(jiàn)相關(guān)聯(lián)的活性成分有63 個(gè)，根據(jù)度值進(jìn)行排序，排名前10 的核心活性成分包括豆甾醇、槲皮素和β-谷甾醇等，詳見(jiàn)表3。

圖5 藥物-疾病交集靶點(diǎn)韋恩圖

圖6 疾病-核心藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

表3 度值排名前10的核心活性成分

2.5.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將63個(gè)藥物-疾病交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇置信度≥0.400，將結(jié)果文件導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1軟件繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖7。根據(jù)度值取中位值進(jìn)行篩選，連續(xù)篩選2次，得到核心靶點(diǎn)，共計(jì)15 個(gè)，分別為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）、白細(xì)胞介素8（IL8）、前列腺素G/H 合酶2（PTGS2）、白細(xì)胞介素1β（IL1B）、淀粉樣β 蛋白前體（APP）、鈉依賴性多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（SLC6A3）、鈉依賴性5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（SLC6A4）、細(xì)胞色素P450 3A4（CYP3A4）、白細(xì)胞介素6（IL6）、神經(jīng)元乙酰膽堿受體亞基α-7（CHRNA7）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（CASP3）、5-羥色胺受體2C（HTR2C）、雌激素受體（ESR1）、白細(xì)胞介素10（IL10）、腫瘤壞死因子（TNF）。見(jiàn)圖8。

圖7 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖8 核心靶點(diǎn)篩選過(guò)程

2.5.4 富集分析結(jié)果 對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行GO 功能富集分析（P＜0.05），結(jié)果為610 個(gè)生物過(guò)程（BP）、60 個(gè)細(xì)胞組分（CC）、119 個(gè)分子功能（MF）。BP 主要包括細(xì)胞對(duì)兒茶酚胺和乙酰膽堿的反應(yīng)、突觸信號(hào)等；CC主要包括突觸、樹(shù)突、受體復(fù)合物等；MF則主要展現(xiàn)在受體活性，如神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、5-HT 受體活性等。見(jiàn)圖9。

圖9 GO功能富集分析結(jié)果

KEGG 通路富集分析得到112 條通路，其中包括神經(jīng)活性配體-受體相互作用、多種疾病-神經(jīng)退行性變的通路、雌激素信號(hào)通路等。見(jiàn)圖10。將KEGG通路富集分析結(jié)果按照校正后的P值排序，取前20 條信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.1 軟件繪制KEGG 核心通路-基因圖（見(jiàn)圖11），可見(jiàn)核心藥物可能通過(guò)神經(jīng)活性配體-受體相互作用、鈣信號(hào)通路、多種疾病-神經(jīng)退行性變的通路、5-HT 能突觸、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切力與動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病并發(fā)癥中的晚期糖基化終末產(chǎn)物及其受體（AGE-RAGE）信號(hào)通路、阿爾茨海默病等通路發(fā)揮效能，且根據(jù)P值，關(guān)聯(lián)最密切的作用靶點(diǎn)包括TNF、IL1B、IL6、CASP3、鈣調(diào)蛋白1（CALM1）。

圖10 KEGG通路富集分析結(jié)果

圖11 KEGG核心通路-基因圖

3 討論

神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)表現(xiàn)為夜寐不安、入寐難，或多夢(mèng)、早醒，同時(shí)伴有精神緊張、情緒激動(dòng)、焦慮擔(dān)心等癥狀，歸屬于中醫(yī)學(xué)不寐及郁證范疇。朱文宗教授認(rèn)為神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的發(fā)病病機(jī)主要是營(yíng)衛(wèi)失和以及臟腑失調(diào)兩個(gè)方面。《靈樞·大惑論》言：“衛(wèi)氣……不得入于陰，則陰氣虛，故目不瞑矣?！标?yáng)不入陰，營(yíng)衛(wèi)失和，則不得寐?！端貑?wèn)·陰陽(yáng)應(yīng)象大論》云：“人有五臟化五氣，以生喜怒悲憂恐。”即人體的情志由五臟之氣所生，情志失衡，提示五臟功能失調(diào)。臨床上，神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)可大體歸為虛、實(shí)兩類，實(shí)者夾痰、夾瘀、夾氣郁，虛者臟腑、陰陽(yáng)、氣血虛。故治以健脾理氣、益氣養(yǎng)陰之法，兼以疏肝和胃、養(yǎng)心安神。

根據(jù)高頻藥物使用頻次分析結(jié)果顯示，朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的用藥以補(bǔ)虛藥（甘草、黨參、當(dāng)歸、黃芪），清熱藥（黃芩、梔子、黃連），解表藥（柴胡），安神藥（茯神、遠(yuǎn)志、首烏藤、合歡皮、酸棗仁），理氣藥（陳皮、枳殼），止咳化痰平喘藥（半夏、竹茹）為主，其中使用頻次較高的5味藥物為甘草、半夏、黃芩、柴胡、黨參，可初步推測(cè)朱文宗教授在治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)時(shí)多從肝論治，主要以小柴胡湯為底方，治以和解少陽(yáng)、調(diào)暢肝氣、和胃健脾。朱文宗教授言本病患者雖多從肝論治，但仍不能忘記顧護(hù)脾胃?！督饏T要略》曰：“見(jiàn)肝之病，知肝傳脾，當(dāng)先實(shí)脾?！鼻橹静皇?，肝氣郁滯，肝木乘脾土，脾胃乃氣機(jī)之中樞，中樞不通，則上下壅堵，亦可加重氣郁，郁而化火，繼而不寐甚，所謂“胃不和則臥不安”是也，故可隨證加減茯神、黨參、白術(shù)之品健脾和胃。

朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)患者時(shí)，往往結(jié)合傷寒派腹診[9]進(jìn)行診治，若患者夜寐不安，情緒焦慮，兼見(jiàn)偏頭或疼或緊，脅肋苦滿，脈弦，面色發(fā)青，腹診肋弓下肌群緊張，乃少陽(yáng)郁滯，則予柴胡類方加減，其中形體適中或偏瘦小者，予小柴胡湯；形體壯實(shí)，面色紅潤(rùn)有余，口苦，大便秘結(jié)，腹診腹部緊實(shí)滿者，予大柴胡湯。若兼見(jiàn)夜夢(mèng)繁多，尤甚噩夢(mèng)，性情急躁，腹脹，腹診鼓音明顯，臍旁壓痛者，乃痰瘀氣滯，可予癲狂夢(mèng)醒湯加減，病程久而頑固者，可加蟬蛻鎮(zhèn)靜安神。若兼見(jiàn)心煩，口苦，盜汗，舌紅少苔，腹部皮膚明顯熱于其他部位的皮膚，乃陰虛火旺，予天王補(bǔ)心丹加減。若見(jiàn)多夢(mèng)，心悸，精神緊張，神疲乏力，頭暈，惡心，脈滑，腹診心下悸動(dòng)[10]，乃水氣上逆，予桂枝加龍骨牡蠣湯加減。若平素膽小易驚，苔膩，舌上可見(jiàn)半夏線，腹診心下痞滿者，乃氣滯痰阻，予溫膽湯加減，以順調(diào)膽氣、調(diào)理陰陽(yáng)，乃“從膽論治”以調(diào)神、安神。兼見(jiàn)舌紅、心煩實(shí)者，加黃連、梔子之品，虛者予丹參、赤芍之品。神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)患者的舌診多可見(jiàn)半夏線，關(guān)于半夏線的記載最早見(jiàn)于《辨舌指南》[11]：“故氣郁之證，苔邊整齊如石階之起邊線，線內(nèi)有苔，線外無(wú)苔，但紅邊而已?！奔瓷噙叧霈F(xiàn)兩條細(xì)長(zhǎng)的唾沫白線。朱文宗教授指出，一般有此線者，多伴有情緒焦慮、緊張，脈弦，乃氣郁之征，若兼見(jiàn)舌苔白滑膩，則為氣郁濕阻，半夏征是也。

根據(jù)藥物性、味、歸經(jīng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析可得，朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)時(shí)，常用藥物的藥性以溫性、平性為多，藥味以辛味、苦味為主，歸經(jīng)大都?xì)w肺、脾兩經(jīng)。溫州地處依山傍水的海洋氣候地區(qū)，濕患尤多，故朱文宗教授多選辛溫之品燥濕平胃[12]。

關(guān)聯(lián)規(guī)則分析結(jié)果顯示，半夏、黃芩、柴胡、黨參為朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的核心藥物。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果顯示，核心藥物有63 個(gè)活性成分與神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的疾病靶點(diǎn)相關(guān)，其中度值排名靠前的活性成分有半夏、黃芩、柴胡、黨參共有的豆甾醇，柴胡的主要成分槲皮素，以及半夏和黃芩的共有成分β-谷甾醇。有研究結(jié)果表明，炎癥因子可以調(diào)節(jié)腦血管血流動(dòng)力學(xué)，影響睡眠[13]，而從核心藥物中提取出的共有成分豆甾醇具有保護(hù)神經(jīng)、抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等功能[14]。從柴胡中提取所得的槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗凋亡、改善線粒體功能等作用[15]，可激活大鼠的γ-氨基丁酸受體從而改變睡眠周期，明顯延長(zhǎng)大鼠的非快速眼動(dòng)睡眠期，與此同時(shí)縮短快速眼動(dòng)睡眠期[16]，也可通過(guò)增加大鼠大腦中的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等方面，減輕大鼠的焦慮及睡眠障礙情況[17]。半夏和黃芩的共有成分β-谷甾醇具有抗焦慮、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用[18]。有研究結(jié)果表示，β-谷甾醇可減輕小鼠前額皮層和齒狀回對(duì)壓力、恐懼記憶的影響，同時(shí)減少與焦慮、記憶相關(guān)的原癌基因（FOS）的表達(dá)，從而減輕小鼠的焦慮[19]。

根據(jù)PPI網(wǎng)絡(luò)分析篩選結(jié)果得出，核心藥物治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的核心靶點(diǎn)有VEGFA、IL8、PTGS2、IL1B、APP、SLC6A3、SLC6A4、CYP3A4、IL6、CHRNA7、CASP3、HTR2C、ESR1、IL10 等。有研究表明，炎癥細(xì)胞因子如TNF、IL6 等可影響睡眠[20]。慢性失眠障礙患者血清中的TNF水平會(huì)顯著增高[21]。故核心藥物可能通過(guò)作用于炎癥因子而起到治療作用。再者，本研究納入的處方中，女性患者有194 例，占63%，平均年齡（50.84±0.91）歲，考慮圍絕經(jīng)期女性可因性激素水平降低而出現(xiàn)失眠、焦慮、煩躁等表現(xiàn)[22]，故而更容易出現(xiàn)本病，筆者推測(cè)，核心藥物可能通過(guò)作用于雌激素受體來(lái)改善病情。臨床診治時(shí)，朱文宗教授言及本病若遇圍絕經(jīng)期女性見(jiàn)畏寒肢冷，可予仙茅、淫羊藿、仙鶴草之品補(bǔ)益肝腎。結(jié)合GO、KEGG 富集分析結(jié)果，可以得到化學(xué)藥物在治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)上，主要通過(guò)神經(jīng)活性配體-受體相互作用[23]及多種疾病-神經(jīng)退行性變的通路、鈣信號(hào)通路[24]等，調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、5-HT 受體活性、血清素受體活性等，影響兒茶酚胺結(jié)合、乙酰膽堿結(jié)合等方面起到對(duì)神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)的治療作用，充分體現(xiàn)了中藥治療多成分、多靶點(diǎn)的特性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，朱文宗教授治療神經(jīng)性失眠伴焦慮狀態(tài)以健脾理氣、益氣養(yǎng)陰之法為主，兼以疏肝和胃、養(yǎng)心安神。常用的核心藥物組為半夏、黃芩、柴胡、黨參，該藥物組的核心活性成分可能通過(guò)神經(jīng)活性配體-受體相互作用等通路，作用于神經(jīng)元的突觸、樹(shù)突，影響神經(jīng)遞質(zhì)受體活性等方面發(fā)揮治療效果，充分體現(xiàn)了中醫(yī)藥治療疾病多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同作用的特點(diǎn)。本研究仍有一定的局限與不足，具體應(yīng)用仍需基于中醫(yī)學(xué)理論，結(jié)合臨床具體情況進(jìn)行具體分析。