替格瑞洛通過akt/AMPK/eNOS信號(hào)通路調(diào)節(jié)AMI后小鼠血管新生及其機(jī)制研究

何尤夫 劉微△ 劉德斌 李玲 向仕菊 姚奇

(1.貴州省人民醫(yī)院心血管內(nèi)科,貴州 貴陽(yáng) 550000;2.貴州省心血管疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心,貴州 貴陽(yáng) 550000;3.廣東省汕頭市第二人民醫(yī)院,廣東 汕頭 515000;4.遵義市正安縣人民醫(yī)院,貴州 遵義 563100)

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是由于各種原因?qū)е鹿诿}急性缺血,進(jìn)而引起的心肌細(xì)胞缺血壞死,具有很高的發(fā)病率和死亡率,并對(duì)健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1]。即使AMI患者及時(shí)接受介入治療,心肌細(xì)胞的死亡仍不可避免,嚴(yán)重影響患者的預(yù)后[2]。替格瑞洛作為一種新型P2Y12-ADP受體拮抗劑,無須經(jīng)肝臟代謝激活即可直接起效,可逆地與血小板P2Y12-ADP受體結(jié)合發(fā)揮抑制血小板的作用[3]。另有研究[4]顯示替格瑞洛通過腺苷依賴的機(jī)制發(fā)揮增加冠脈血流量、減少心肌梗死面積等作用,但是替格瑞洛是否具有促進(jìn)AMI后血管生成的作用尚不清楚。腺苷是一種重要的生物活性物質(zhì),具有介導(dǎo)血管生成的作用。已有試驗(yàn)證實(shí)替格瑞洛能過腺苷依賴的機(jī)制促進(jìn)蛋白激酶B(akt)、AMP依賴的蛋白激酶(adenosine 5‘-monophosphate (AMP)-activated protein kinase,AMPK)及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)磷酸化。但是,替格瑞洛是否通過腺苷依賴的akt/AMPK/eNOS信號(hào)通路發(fā)揮促進(jìn)心肌梗死后血管生成的作用尚無研究報(bào)道。本研究就替格瑞洛通過腺苷依賴的 akt/AMPK/eNOS信號(hào)通路調(diào)節(jié)AMI后血管新生這一問題展開深入的探討,旨在為替格瑞洛促進(jìn)AMI后血管新生尋找新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物c57BL/6純系清潔級(jí)小鼠全部購(gòu)自遼寧省長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(黔)2021-0005。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理符合相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)要求。

1.2 藥品試劑及儀器血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)抗體(武漢三鷹,19003-1-AP)、β-actin抗體(武漢三鷹,81115-1-RR)、akt抗體(武漢三鷹,10176-2-AP)、P-akt抗體(武漢三鷹,28731-1-AP)、MAPK抗體(武漢三鷹,10176-2-AP),p-MAPK抗體(武漢三鷹,28796-1-AP)、eNOS抗體(武漢三鷹,27120-1-AP)、p-ENOS抗體(武漢三鷹,28939-1-AP)、CD31抗體(武漢三鷹,28083-1-AP),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本takara),SYBR 綠色熒光 PCR 預(yù)混液(日本takara),Perifosine(美國(guó)MCE,157716-52-4),Dorsomorphin(美國(guó)MCE,866405-64-3),MRS1523(美國(guó)MCE,HY-121119),腺苷檢測(cè)試劑盒(上海初態(tài)生物,CT68427),免疫組化試劑盒(中杉金橋,PV-9000),血栓彈力圖分析儀(上海繼圣,CFMS LEPU-8880),血小板功能分析儀(上海索慮,Sonoclot SCP2),小動(dòng)物呼吸機(jī)(中國(guó)玉研儀器,V-1000),小動(dòng)物心電圖儀(中國(guó)玉研儀器,3306B)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 建立急性心肌梗死小鼠模型將小鼠使用1%戊巴比妥鈉50 mg/kg麻醉后固定于手術(shù)臺(tái),同時(shí)連接小動(dòng)物心電圖儀,在小動(dòng)物呼吸機(jī)輔助通氣下開胸,并結(jié)扎左前降支冠脈,結(jié)扎后可見心臟由暗紫色變?yōu)樯n白色,在確認(rèn)心電圖出現(xiàn)明確心肌缺血改變后即為模型建立成功。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組及小鼠飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分為五組,假手術(shù)組(Sham組)、心肌梗死即刻組(AMI 0 h組)、心肌梗死48 h組(AMI 48 h組)、心肌梗死1周組(AMI 1 W組)、心肌梗死4周組(AMI 4 W組)、心肌梗死并服用氯吡格雷組(CLOP組)、心肌梗死并服用替格瑞洛組(TIC組)、心肌梗死并服用替格瑞洛且使用Dorsomorphin組(Dorsomorphin組)、心肌梗死并服用替格瑞洛且使用Perifosine組(Perifosine組)、心肌梗死并服用替格瑞洛且使用MRS1523組(MRS1523組)。隨后根據(jù)不同分組,分別使用替格瑞洛(灌胃,300 mg/d,劑量根據(jù)氯吡格雷說明書及專家共識(shí)[5])、氯吡格雷(灌胃,90 mg/d,劑量根據(jù)氯吡格雷說明書及專家共識(shí)[5])Dorsomorphin(腹腔注射,1 mg/kg·d[6])、Perifosine (腹腔注射,20 mg/kg·d[7])、MRS1523(腹腔注射,0.1 μM/d[8])。所有小鼠在特定時(shí)間點(diǎn)取眼球血,并開胸取心臟備用。

1.3.3 酶標(biāo)法測(cè)定小鼠血清腺苷含量取小鼠眼球血,離心后得血清,并根據(jù)試劑盒說明書,使用酶標(biāo)法檢測(cè)腺苷含量。

1.3.4 免疫組織化學(xué)取小鼠心臟,4%多聚甲醛固定72 h,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋、切片,隨后操作步驟按中杉金橋( PV-9000) 試劑盒說明進(jìn)行。

1.3.5 HE染色小鼠心臟標(biāo)本石蠟包埋后切片,常規(guī)脫蠟至水。石蠟切片常規(guī)二甲苯、乙醇脫蠟至水,蘇木素染色 10 min,0.7%鹽酸乙醇分化3～5 s,流水洗滌后,伊紅液浸染 3 min。梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,光學(xué)顯微鏡下觀察分析。

1.3.6 Masson染色小鼠心臟標(biāo)本石蠟包埋后切片,常規(guī)脫蠟至水,重鉻酸鉀染色,鐵蘇木素染色,麗春紅酸性品紅染色,磷鉬酸染色,苯胺藍(lán)染色,1%冰醋酸分化,常規(guī)脫水、透明、封片,光學(xué)顯微鏡下觀察分析。

1.3.7 Western blot檢測(cè)組織細(xì)胞中相關(guān)蛋白表達(dá)通過使用混合有1%蛋白酶抑制劑和磷酸化酶抑制劑的RIPA(碧云天,中國(guó))從心臟組織細(xì)胞中分離蛋白質(zhì),并通過BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒(碧云天,中國(guó))檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度。將裂解液與5份SDS樣品緩沖液混合并煮沸10 min。將裂解液樣品在6%和12%SDS-PAGE上分離,并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。在室溫下用5%牛奶封閉溶液封閉印跡1 h,然后用合適的一抗孵育過夜。用TBST多次洗滌后,將膜與HRP標(biāo)記的二抗進(jìn)一步孵育1 h。用ECL Western blot檢測(cè)試劑(碧云天,中國(guó))對(duì)印跡進(jìn)行可視化顯影,并用GEL成像系統(tǒng)(Bio-Rad,美國(guó))進(jìn)行成像。通過軟件Image J分析蛋白質(zhì)的定量。

1.3.8 RT-PCR檢測(cè)組織/細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)各組心肌組織或細(xì)胞均使用Trizol法提取總RNA,根據(jù)說明書,使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將對(duì)應(yīng)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄;用不同基因的特異性引物對(duì)cDNA進(jìn)行qRT-PCR,使用SYBR試劑盒在Eppendorf MasterCycler RealPlex4(Eppendor,Wesseling Berzdorf,德國(guó))上進(jìn)行PCR反應(yīng),ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)水平;使用β-actin對(duì)靶基因的表達(dá)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。VEGF:正義鏈為5’-GCA GAC TAT TCA GCG GAC TCA-3’,反義鏈為5’-CCG TTG GCA CGA TTT AAG AGG-3’;β-actin引物序列見生工試劑盒說明書。

2 結(jié) 果

2.1 AMI模型中VEGF存在差異性表達(dá)圖1A所示為各組心電圖情況,心肌梗死后各組的ST段明顯上抬,提示造模成功;圖1B所示,AMI 1 W和AMI 4 W組可見明顯的局部心肌損害、肌纖維碎裂;而在Masson染色的檢測(cè)中,圖1C～D所示,AMI 4 W組可見明顯的膠原沉積,提示纖維化形成;與之對(duì)應(yīng)的,在AMI 4 W組中,VEGF的蛋白水平(圖1E～F)和mRNA水平(圖1G)表達(dá)也明顯下降。故而我們選擇4周作為評(píng)估時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)研究。

注:A.各組AMI模型心電圖;B.各組AMI大鼠心臟HE染色;C.各組AMI大鼠心臟Masson染色;D.通過Masson染色評(píng)估膠原沉積的統(tǒng)計(jì)圖;E.Western bolt評(píng)估各組大鼠心肌內(nèi)VEGF的蛋白表達(dá)水平;F.圖E中VEGF蛋白水平相對(duì)值統(tǒng)計(jì)圖;G.RT-PCR評(píng)估各組大鼠心肌內(nèi)VEGF的mRNA表達(dá)水平。與Sham組相比,aP<0.05;AMI 0 h組相比,bP<0.05;與AMI 48 h組相比,cP<0.05;與AMI 1 W組相比,dP<0.05。

2.2 替格瑞洛對(duì)AMI模型小鼠的心肌保護(hù)作用為了解替格瑞洛在AMI后對(duì)梗死心肌內(nèi)對(duì)血管生成的影響,我們選取了目前國(guó)內(nèi)外較為公認(rèn)的氯吡格雷作為陽(yáng)性對(duì)照組。如圖2A所示,在HE染色中,與AMI組相比,氯吡格雷組(CLOP組)和替格瑞洛組(TIC組)的局部心肌損害、肌纖維碎裂有所減輕。如圖2B～C所示,在Masson染色中,與AMI組相比,CLOP組和TIC組的膠原蛋白沉積率明顯下降(P<0.05)。在更進(jìn)一步的腺苷表達(dá)檢測(cè)(圖2D)中,CLOP組和TIC組表達(dá)均相對(duì)比AMI組明顯上升(P<0.05);而在血栓彈力圖檢測(cè)(圖2E)和血小板聚集率檢測(cè)(圖2F)中,CLOP組和TIC組表達(dá)均相對(duì)比AMI組明顯下降(P<0.05)。結(jié)果提示替格瑞洛和氯吡格雷均可改善AMI后的心肌纖維化,或與其可抑制腺苷表達(dá)有關(guān),并同時(shí)還可調(diào)節(jié)血小板活性及血栓形成。

注:A.建立各組模型后取心肌組織行HE染色;B.各組Masson染色;C.Masson染色評(píng)估膠原沉積的統(tǒng)計(jì)圖;D.各組中腺苷值統(tǒng)計(jì)圖;E.各組中血栓彈力的統(tǒng)計(jì)圖;F.各組中血小板活性率的統(tǒng)計(jì)圖。Sham表示假手術(shù)組;AMI表示AMI后4周組;CLOP表示AMI并使用氯吡格雷灌胃治療4周組;TIC表示AMI并使用替格瑞洛灌胃治療4周組。與Sham組相比,aP<0.05;與AMI組相比,bP<0.05;與CLOP組相比,cP<0.05。

2.3 替格瑞洛可促進(jìn)VEGF表達(dá)在進(jìn)一步的研究中,我們還評(píng)估了替格瑞洛和氯吡格雷對(duì)于AMI后局部心肌細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響。如圖3A-B所示,在免疫組化檢測(cè)局部心肌細(xì)胞中VEGF表達(dá)里,與AMI組相比,CLOP組和TIC組中的VEGF表達(dá)均明顯上調(diào)(P<0.05)。通過Western blot檢測(cè)各組中VEGF蛋白水平表達(dá)情況(圖3C～D),結(jié)果也與免疫組化結(jié)果基本一致。而在VEGF的mRNA水平表達(dá)檢測(cè)中,RT-PCR結(jié)果也證實(shí),與AMI組相比,CLOP組和TIC組中的VEGF的mRNA表達(dá)也明顯上調(diào)(P<0.05)。我們的結(jié)果證實(shí),在AMI中,替格瑞洛可明顯促進(jìn)VEGF的蛋白和mRNA水平表達(dá)。

注:A.免疫組化檢測(cè)各組大鼠模型中心肌組織內(nèi)VEGF表達(dá);B.免疫組化中VEGF陽(yáng)性值統(tǒng)計(jì)圖;C.Western blot檢測(cè)各組中VEGF蛋白水平表達(dá)情況;D.Western blot結(jié)果中VEGF相對(duì)表達(dá)量統(tǒng)計(jì)圖;E.RT-PCR檢測(cè)各組中VEGF mRNA表達(dá)情況統(tǒng)計(jì)圖。Sham表示假手術(shù)組;AMI表示急性心肌梗死后4周組;CLOP表示急性心肌梗死并使用氯吡格雷90 mg/d灌胃治療4周組;TIC表示急性心肌梗死并使用替格瑞洛300 mg/d灌胃治療4周組。與Sham組相比,aP<0.05;與AMI組相比,bP<0.05;與CLOP組相比,cP<0.05。

2.4 替格瑞洛通過調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)保護(hù)心肌為了解替格瑞洛促進(jìn)AMI后VEGF表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)局部心肌內(nèi)血管新生的機(jī)制,我們初步評(píng)估了AMPK/AKT軸對(duì)心肌梗死后血栓彈力、血小板活性及腺苷濃度表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。在HE染色結(jié)果中(圖4A)我們發(fā)現(xiàn)無論抑制AMPK活性、AKT活性,還是抑制腺苷受體表達(dá),均會(huì)減少替格瑞洛對(duì)于心肌損害的保護(hù)作用。在Masson染色中(圖4B～C),與TIC組相比,Perifosine組(akt抑制劑)、Dorsomorphin組(AMPK抑制劑)和MRS1523組(腺苷受體抑制劑)的膠原沉積均明顯上調(diào)(P<0.05),提示無論抑制akt、AMPK還是腺苷受體,均會(huì)減少替格瑞洛對(duì)于AMI后心肌纖維化的保護(hù)作用。在腺苷的檢測(cè)中(圖4D),與TIC組相比,Perifosine組、Dorsomorphin組和MRS1523組的腺苷濃度均明顯上調(diào)(P<0.05)。在血栓彈力圖檢測(cè)(圖4E)、血小板活性檢測(cè)(圖4F)中,與TIC組相比,Perifosine組、Dorsomorphin組和MRS1523組的血栓彈力圖數(shù)值、血小板活性均明顯下降(P<0.05)。

注:A.各組大鼠模型中心肌組織的HE染色;B.各組大鼠模型中心肌組織的Masson染色;C.Masson染色評(píng)估膠原沉積的統(tǒng)計(jì)圖;D.各組中腺苷值統(tǒng)計(jì)圖;E.各組中血栓彈力的統(tǒng)計(jì)圖;F.各組中血小板活性率的統(tǒng)計(jì)圖。Sham表示假手術(shù)組;AMI表示急性心肌梗死后4周組;TIC表示急性心肌梗死并使用替格瑞洛300 mg/d灌胃治療4周組;Perifosine表示急性心肌梗死后同時(shí)使用300 mg/d替格瑞洛及akt抑制劑Perifosine20 mg/kg·d灌胃治療4周組;Dorsomorphin表示急性心肌梗死后同時(shí)使用300 mg/d替格瑞洛及AMPK抑制劑Dorsomorphin 1 mg/kd·d灌胃治療4周組;MRS1523表示急性心肌梗死后同時(shí)使用300 mg/d替格瑞洛及腺苷受體抑制劑MRS1523 0.1μM /kg·d灌胃治療4周組。與Sham組相比,aP<0.05;與AMI組相比,bP<0.05;與TIC組相比,cP<0.05;與Perifosine組相比,cP<0.05;與Dorsomorphine組相比,dP<0.05。

2.5 替格瑞洛可通過akt/AMPK/eNOS信號(hào)通路調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)我們檢測(cè)了akt/AMPK /eNOS軸對(duì)心肌梗死后局部心肌VEGF表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。通過免疫組化(圖5A～B)和Western blot(圖5C～D)檢測(cè)了各組中VEGF蛋白水平表達(dá)情況。與TIC組相比,Perifosine組、Dorsomorphin組和MRS1523組的VEGF蛋白水平表達(dá)均明顯上調(diào)(P<0.05)。與AMI組相比,替格瑞洛可明顯上調(diào)p-AKT/AKT(圖5E)和p-eNOS/eNOS(圖5G)比值(P<0.05),下降p-AMPK/AMPK(圖5F)比值(P<0.05),提示替格瑞洛可明顯改善由AMI導(dǎo)致的局部心肌細(xì)胞內(nèi)AMPK/AKT/eNOS軸的活化。另外在VEGF的mRNA水平表達(dá)中,我們也得出了和蛋白水平一致的結(jié)果。結(jié)果表明,替格瑞洛可通過調(diào)節(jié)AMPK/AKT/eNOS軸,進(jìn)而調(diào)節(jié)心肌梗死后局部心肌細(xì)胞內(nèi)VEGF的表達(dá)。

3 討 論

既往的研究[1]顯示,AMI患者良好的側(cè)支循環(huán)提供的殘余血流能夠有效減少梗死面積、改善左心收縮功能,側(cè)支循環(huán)的缺失與心肌梗死后早期心源性休克密切相關(guān)。而AMI早期側(cè)支循環(huán)的建立,能夠進(jìn)一步降低心肌梗死面積和心肌缺血面積,從而改善心肌梗死患者的預(yù)后[2]。PLATO試驗(yàn)[3]證實(shí),與氯吡格雷(另一種P2Y12-ADP受體拮抗劑)相比,替格瑞洛在不增加主要出血的情況下,進(jìn)一步降低急性冠脈綜合征患者的心血管死亡/心肌梗死/卒中復(fù)合終點(diǎn)事件風(fēng)險(xiǎn)達(dá)16%,同時(shí)顯著降低心血管死亡達(dá)21%。而另一項(xiàng)體外試驗(yàn)[4]進(jìn)一步顯示替格瑞洛能夠抑制人紅細(xì)胞對(duì)腺苷的吸收,其可能的機(jī)制是抑制了平衡型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1的活性。腺苷是人體內(nèi)的一種重要生物活性物質(zhì),發(fā)揮著重要的病理生理調(diào)節(jié)功能,具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈[9]、抑制血小板聚集[10]、抑制炎癥反應(yīng)[11]、改善冠狀動(dòng)脈缺血再灌注損傷[12]等作用。在血管損傷后血管修復(fù)過程中腺苷引起內(nèi)皮祖細(xì)胞的遷移與數(shù)量增加,而且這種效應(yīng)呈濃度依懶性(腺苷濃度在1 nM/L至10 μM/L)[13]。內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移是血管生成過程中的關(guān)鍵步驟。腺苷能夠誘導(dǎo)心肌血管平滑肌細(xì)胞和心肌成肌細(xì)胞的VEGF mRNA的表達(dá),增加VEGF蛋白濃度,從而介導(dǎo)了血管生成[13]。此外,有研究[14]發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)腺苷可以通過調(diào)節(jié)表觀遺傳編程來促進(jìn)血管生成。因此,替格瑞洛具有潛在的通過增加腺苷濃度促進(jìn)血管生成的能力。但目前尚無研究證實(shí)替格瑞洛能否促進(jìn)心肌梗死后血管生成,其作用機(jī)制也有待進(jìn)一步研究。2013年一項(xiàng)基于健康成人的研究[15]顯示,與氯吡格雷相比,替格瑞洛顯著增加腺苷誘導(dǎo)的冠脈血流速度。此外,有研究[16]顯示冠心病患者服用替格瑞洛21 d后血管功能和內(nèi)皮功能得到改善。近期,研究者在豬動(dòng)物模型上的研究[17]結(jié)果發(fā)現(xiàn),替格瑞洛通過腺苷依賴的機(jī)制降低心肌梗死后的心肌損傷及水腫形成。以上這些研究表明,替格瑞洛可能通過腺苷依賴的機(jī)制發(fā)揮了更大的心臟保護(hù)作用。本研究在基于前述研究理論的基礎(chǔ)上證實(shí),替格瑞洛可促進(jìn)AMI后小鼠心肌組織細(xì)胞內(nèi)的VEGF蛋白水平和mRNA水平表達(dá),而在使用腺苷受體抑制劑MRS1523后可明顯抑制替格瑞洛對(duì)于VEGF的上調(diào)作用。本研究同時(shí)還初步探討了替格瑞洛可通過促進(jìn)AMI后小鼠體內(nèi)腺苷濃度,進(jìn)而促進(jìn)心肌組織內(nèi)VEGF的表達(dá),這或許與其促進(jìn)血管新生,并進(jìn)一步調(diào)節(jié)AMI后的心肌組織修復(fù)有關(guān)。

血管新生是一個(gè)多信號(hào)介導(dǎo)、多細(xì)胞參與調(diào)控的過程。akt/AMPK/eNOS信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、遷移、蛋白合成及血管生成等過程中起著十分重要的作用[18]。在心肌梗死再灌注損傷小鼠動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中,研究者發(fā)現(xiàn)腺苷及其受體通過akt信號(hào)通路發(fā)揮減少心肌再灌注損傷[19]。而替格瑞洛則可通過腺苷依賴的機(jī)制促進(jìn)akt、AMPK及eNOS磷酸化[20]。但是替格瑞洛是否通過akt/AMPK/eNOS信號(hào)通路促進(jìn)心肌梗死后血管生成從而發(fā)揮更大的心臟保護(hù)作用尚不清楚。本研究通過akt抑制劑Perifosine和AMPK抑制劑Dorsomorphin,初步探討了akt/AMPK在AMI后小鼠心肌組織細(xì)胞中對(duì)于VEGF表達(dá)的影響。本研究證實(shí)akt/AMPK/eNOS軸的磷酸化水平與AMI后小鼠體內(nèi)腺苷水平密切相關(guān),并進(jìn)一步影響后AMI后小鼠心肌組織中VEGF蛋白水平和mRNA水平表達(dá)。

綜上所述,本研究證實(shí)替格瑞洛可通過調(diào)節(jié)AMI后小鼠體內(nèi)腺苷表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)心肌組織細(xì)胞內(nèi)VEGF的表達(dá),與受損心肌的恢復(fù)與血管狀態(tài)密切相關(guān),對(duì)于促進(jìn)血管新生、恢復(fù)AMI梗死區(qū)域的血供和挽救病理性損害的心肌細(xì)胞具有極其重要的意義。

利益沖突說明/Conflict of Intetests

所有作者聲明不存在利益沖突。

倫理批準(zhǔn)及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通過貴州省人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批[倫理號(hào):倫審(動(dòng)物)2022-018],動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不涉及知情同意。

作者貢獻(xiàn)/Author Contributions

何尤夫、劉微提出主要研究目標(biāo),負(fù)責(zé)研究的構(gòu)思與設(shè)計(jì),研究的實(shí)施,撰寫論文,并對(duì)文章整體負(fù)責(zé),監(jiān)督管理;劉德斌、向世菊進(jìn)行數(shù)據(jù)的收集與整理;李玲、姚琦進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,圖、表的繪制與展示;劉微進(jìn)行論文的修訂、文章的質(zhì)量控制與審查。