某高校細(xì)菌污染情況調(diào)查及消毒效果的比較

謝冰玉，陳玲霞，黃丹丹，林靜宇，劉倩雯，伍靜雯，柴小年，鐘有添

（1. 贛南醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室；2. 贛南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院，江西 贛州 341000）

近年來空氣微生物污染引發(fā)的呼吸疾病頻發(fā)［1］。高校微生物實驗室是學(xué)生進(jìn)行微生物學(xué)實驗的主要場所，其空氣細(xì)菌污染情況將直接影響老師和學(xué)生的身心健康。電梯和指紋打卡機均是高校中常用的公共設(shè)備。多項研究表明，電梯內(nèi)部按鈕及指紋打卡機表面存在多種病原微生物［2-4］。日常生活中，手指皮膚與外界環(huán)境接觸最多，易被環(huán)境中的細(xì)菌污染，同時手上的細(xì)菌也會污染食物、水源、物品、環(huán)境等。目前，手機的使用頻率非常高，手機表面容易藏污納垢，成為細(xì)菌滋生的溫床，且手機使用時會與手、耳朵、嘴巴、臉等部位皮膚接觸而造成交叉污染。有研究［5］發(fā)現(xiàn)，手機上的細(xì)菌有7 000多種。因此，本研究通過檢測空氣、電梯按鈕、指紋打卡機、皮膚、手機細(xì)菌污染情況，了解在新型冠狀病毒感染疫情常態(tài)化防控的狀態(tài)下，某高校實驗室空氣、公共設(shè)施以及個人衛(wèi)生情況，以便更有針對性地去改善某高校的衛(wèi)生情況。

手指皮膚以及手機的消毒在日常生活中最常見，選用合適的消毒劑也顯得非常重要。新潔爾滅、龍膽紫、碘伏、酒精是日常生活中最常用的皮膚表面化學(xué)消毒劑。中藥是中華民族的瑰寶，多項研究表明，黃芩和牡丹皮對多種革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌等具有抑制作用［6-9］。據(jù)此本研究選用新潔爾滅、龍膽紫、碘伏、酒精及中藥黃芩和牡丹皮，檢測這些材料對手指皮膚及手機上細(xì)菌的抑菌效果，為消毒劑的選用提供參考。

1 材料與方法

1.1 空氣、電梯按鈕、指紋打卡機、皮膚、手機細(xì)菌污染情況

1.1.1 檢查對象和時間空氣檢查對象為某高校8 個微生物實驗室，即采樣日上午有微生物實驗課的8個實驗室。電梯檢查對象為安裝在某高校行政樓、教學(xué)樓、科研樓及動物樓的8部電梯。指紋打卡機檢查對象為安裝在行政樓、教學(xué)樓、實驗樓、科研樓、學(xué)生宿舍、康復(fù)樓、圖書館以及食堂的8 部指紋打卡機。皮膚和手機檢查對象為某高校2020 級護(hù)理學(xué)專業(yè)8 名同學(xué)的手指皮膚和日常使用的手機。8 名同學(xué)是隨機選取當(dāng)日上微生物實驗課的4 名男生和4名女生，并告知無需刻意消毒，按正常習(xí)慣即可，目的是了解手指皮膚和手機真實細(xì)菌污染情況。采樣時間均為2022 年9 月26 日上午，天氣晴，氣溫30 ℃。

1.1.2 實驗方法

1.1.2.1 空氣中細(xì)菌檢查采用自然沉降法。采樣參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18204.3-2013《公共場所衛(wèi)生檢驗方法第3 部分：空氣微生物》中自然沉降法采樣布點要求［10］，室內(nèi)面積不足50 m2取3個采樣點，設(shè)置在室內(nèi)對角線四等分的3個等分點上。取3個直徑為9 cm的無菌瓊脂平板放置在上述采樣點，打開皿蓋，暴露時間5 min，距離地面1.5 m。蓋上皿蓋，皿底朝上放置，置37 ℃培養(yǎng)18～24 h。計算每個培養(yǎng)皿菌落數(shù)，并計算平均數(shù)。按奧梅梁斯基公式換算為單位體積空氣中的各類微生物菌落數(shù)：C=50 000 N/（At），C為空氣微生物總數(shù)濃度（cfu·m-3）；A為培養(yǎng)皿面積（cm2）；t為皿暴露時間（min）；N為平板菌落數(shù)（cfu）。采用中國科學(xué)院生態(tài)中心推薦使用的空氣微生物評價標(biāo)準(zhǔn)［11］（表1）進(jìn)行空氣微生物的污染狀況評價。

表1 空氣微生物評價標(biāo)準(zhǔn)

1.1.2.2 電梯按鈕、指紋打卡機、手機表面細(xì)菌檢查參照GB/T18204.4-2013《公共場所衛(wèi)生檢驗方法第4 部分：公共用品用具微生物》中一般要求［12］，對電梯按鈕、指紋打卡機、手機表面進(jìn)行采樣。電梯按鈕采樣部位為電梯外側(cè)按鈕上下鍵和內(nèi)側(cè)按鈕的開關(guān)鍵、數(shù)字鍵按鈕，測量采樣范圍，用無菌棉簽，直接涂抹并隨之轉(zhuǎn)動采集電梯按鈕全部表面，橫豎往返擦涂5 遍。以無菌操作剪去手接觸部分，放入10 mL無菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，吸取上述懸液1 mL 注入無菌培養(yǎng)皿中，每份樣品設(shè)置2 個平行。無菌操作傾注滅菌營養(yǎng)瓊脂，混勻，置37 ℃培養(yǎng)18～24 h。計算每個培養(yǎng)皿菌落數(shù)，并計算平均數(shù)。根據(jù)計算公式，物體表面的細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu·cm-2）=平板上的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)/采樣面積。細(xì)菌衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)評判標(biāo)準(zhǔn)參照GB15982-2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中Ⅳ類環(huán)境物體表面的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，物體表面每平方厘米培養(yǎng)出10 個以上菌落為細(xì)菌超標(biāo)［12］。指紋打卡機采樣重點為錄指紋部位，測量采樣范圍，用無菌棉簽，直接涂抹并隨之轉(zhuǎn)動采集錄指紋處全部表面，橫豎往返擦涂5 遍。手機表面采樣用無菌生理鹽水浸潤棉簽，分別在手機觸屏面、背面、側(cè)面，橫豎往返擦涂5遍，并隨時轉(zhuǎn)動棉簽，測量采樣范圍，后續(xù)操作方法及評價標(biāo)準(zhǔn)與電梯按鈕部分一致。

1.1.2.3 手指皮膚細(xì)菌檢查手指皮膚采樣參照GB15982-2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》［13］，取雙手指尖到指根部位，面積共約30 cm2。用無菌棉拭子來回涂拭2次。后續(xù)操作方法與電梯按鈕部分一致。細(xì)菌衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)評判標(biāo)準(zhǔn)參照GB15982-2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》，手衛(wèi)生合格的判斷標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)菌菌落總數(shù)≤10 cfu·cm-2［13］。

1.2 化學(xué)消毒劑和中藥抑菌作用

1.2.1 材料黃芩、牡丹皮（藥店購買）。龍膽紫、新潔爾滅、酒精、碘伏由某高校微生物實驗室提供。培養(yǎng)皿配置：蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、氯化鈉5 g、瓊脂20 g 于1 000 mL 蒸餾水中。經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121 ℃，20 min）后冷卻至45 ℃，再傾入已滅菌的直徑9 cm的平皿中以作備用。

1.2.2 實驗方法⑴藥液制備：取牡丹皮及黃芩各100 g，加蒸餾水1 000 mL，浸泡30 min，煮沸后文火煎煮30 min，重復(fù)2 次，合并濾液，濃縮至100 mL（即1 mL藥液含干藥量為1 g），置4 ℃冰箱中備用。

⑵菌液制備：按照國家衛(wèi)生健康委員會2019年發(fā)布的WS/T650-2019《抗菌和抑菌效果評價方法》［14］中5.1.1 懸液定量抑菌試驗的規(guī)定和要求進(jìn)行評價。將上述8名同學(xué)手指皮膚細(xì)菌檢測和手機表面細(xì)菌檢測的培養(yǎng)皿上的菌分別洗入盛有無菌生理鹽水的試管中，使用麥?zhǔn)媳葷岱?，配成每毫?07的菌濃度。

⑶抑菌效果測定：采用紙片擴散法［15］。用無菌棉簽分別蘸取上述菌液均勻涂布于整個平板表面，然后用無菌鑷子夾取直徑6 mm的圓形濾紙片，分別蘸取上述消毒液和中藥，貼在已涂布好菌液的培養(yǎng)基表面，每個紙片的距離約為3 cm，對照的生理鹽水紙片最先放在中央，并注明標(biāo)記，同時做3份。將培養(yǎng)基置于37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。圓紙片上沾有化學(xué)消毒劑以及中藥，由于擴散作用，圓紙片的周邊一定范圍內(nèi)，細(xì)菌的生長也將會受到抑制，在經(jīng)過24 h 培養(yǎng)后將形成一個抑菌圈。用尺子測量抑菌圈的直徑并以毫米為單位記錄結(jié)果。最終可以根據(jù)抑菌圈大小來判定抑菌效果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理使用GraphPad prism 9.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析及作圖。

2 結(jié)果

2.1 空氣、皮膚、手機、電梯按鈕、指紋打卡機細(xì)菌檢測情況

2.1.1 空氣細(xì)菌檢測結(jié)果共檢測8個實驗室，其中有1個實驗室為清潔（實驗室5，2.4×103cfu·m-3），6 個實驗室為較清潔（實驗室1～3，6～8，其中最低為3.3×103cfu·m-3，最高為4.3× 103cfu·m-3）。1個實驗室為微污染（實驗室4，6.2×103cfu·m-3）。見圖1A。

圖1 空氣、電梯按鈕、指紋打卡機、皮膚、手機細(xì)菌檢測情況

2.1.2 電梯按鈕細(xì)菌檢測結(jié)果共檢測8部電梯，其中有7 部電梯為細(xì)菌超標(biāo)（電梯1，3～8，最低為23.9 cfu·cm-2，最高為58.0 cfu·cm-2），1 部電梯為未超標(biāo)（電梯2，7.5 cfu·cm-2）。見圖1B。

2.1.3 指紋打卡機細(xì)菌檢測結(jié)果共檢測8臺指紋打卡機，其中2臺指紋打卡機為細(xì)菌超標(biāo)（指紋打卡機5 和8，12.2 cfu·cm-2和28.0 cfu·cm-2）。6 臺指紋打卡機為未超標(biāo)（指紋打卡機1～4，6～7，其中最低為2.0 cfu·cm-2，最高為7.5 cfu·cm-2）。見圖1C。

2.1.4 手指皮膚細(xì)菌檢測結(jié)果共有8 名同學(xué)受檢，其中有3 名同學(xué)手指皮膚細(xì)菌超標(biāo)（同學(xué)6～8，最高為28.9 cfu·cm-2，最低為14.0 cfu·cm-2），5 名同學(xué)未超標(biāo)（同學(xué)1～5，最高為5.6 cfu·cm-2，最低為3.8 cfu·cm-2）。見圖1D。

2.1.5 手機細(xì)菌檢測結(jié)果共檢測8 部手機，其中2 部超標(biāo)（手機7～8，50.0 cfu·cm-2，18.0 cfu·cm-2），6 部未超標(biāo)（手機1～6，最高為5.7 cfu·cm-2，最低為0.1 cfu·cm-2）。見圖1E。

2.2 化學(xué)消毒劑與中藥的抑菌作用

2.2.1 化學(xué)消毒劑和中藥對手指皮膚抑菌效果

新潔爾滅＞黃芩＞龍膽紫＞牡丹皮＞碘伏＞酒精，即新潔爾滅效果最好（圖2A）。

圖2 化學(xué)消毒劑與中藥的抑菌作用比較

2.2.2 化學(xué)消毒劑和中藥對手機抑菌效果龍膽紫＞新潔爾滅＞黃芩＞碘伏＞牡丹皮＞酒精，即龍膽紫效果最好（圖2B）。

3 討論

本研究對某高校8個微生物實驗室進(jìn)行了空氣細(xì)菌污染檢測，結(jié)果顯示，1 個實驗室為清潔（實驗室5），6 個實驗室為較清潔（實驗室1～3，6～8），1 個實驗室為微污染（實驗室4）。提示某高校微生物實驗室的空氣細(xì)菌污染情況總體為較清潔，其原因是每次實驗課后會對實驗室進(jìn)行紫外燈照射消毒，且照射完會開窗通風(fēng)，因此實驗室內(nèi)空氣質(zhì)量較好。但個別實驗室仍存在微污染的情況，可能原因是該實驗室紫外燈照射時間和強度不夠?qū)е孪静粡氐祝赏ㄟ^增加紫外燈照射的強度和時間，并結(jié)合二氧化氯熏蒸以增強消毒效果。有研究［16］發(fā)現(xiàn)，空氣細(xì)菌污染情況除受到微生物來源、通風(fēng)情況等影響外，還與相對濕度有關(guān)。如果遇到下雨天或潮濕天氣，可開空調(diào)除濕，以降低實驗室內(nèi)濕度，減少細(xì)菌繁殖。目前實驗室多采用掃地的方式，揚塵會增加空氣細(xì)菌數(shù)量，可以改為濕抹布拖地并及時開窗通風(fēng)，以減少空氣中細(xì)菌數(shù)量。

某高校公用電梯按鈕絕大多數(shù)存在細(xì)菌污染超標(biāo)情況（8部電梯有7部超標(biāo)），指紋打卡機也存在超標(biāo)情況（8 部指紋打卡機有2 部超標(biāo)）。電梯按鈕比指紋打卡機細(xì)菌污染超標(biāo)情況更嚴(yán)重，可能原因是電梯的使用對象是全校所有師生，使用頻率更高，而指紋打卡機的使用對象為教職工，僅上下班打卡使用。雖然學(xué)校每天早上8點會對電梯及指紋打卡機等公共設(shè)備進(jìn)行1 次消毒，且在電梯及指紋打卡機旁放置了手部消毒劑，但此次檢測結(jié)果提示，以上措施并未起到防止電梯按鈕和指紋打卡機傳播病原微生物的效果?？赡茉蛴校好刻煜?次達(dá)不到效果；師生使用電梯及指紋打卡機后可能并未嚴(yán)格進(jìn)行消毒；手部消毒液存在交叉按壓導(dǎo)致交叉污染。針對上述因素，可以采取以下改善措施：⑴增加消毒頻率，比如早、中、晚均開展消毒或根據(jù)使用頻率增加消毒次數(shù)；⑵通過張貼手衛(wèi)生宣傳報等方式增強師生衛(wèi)生意識；⑶采用感應(yīng)式手消毒液替代按壓式消毒液；⑷定期開展效果監(jiān)測；⑸個人可采用牙簽、紙巾等無接觸使用電梯按鈕的方式來降低感染風(fēng)險［2］。

學(xué)生手指皮膚細(xì)菌檢測結(jié)果（8名同學(xué)中有3名超標(biāo)）及手機細(xì)菌檢測結(jié)果（8部手機中有2部超標(biāo)）均有超標(biāo)現(xiàn)象。說明仍有部分同學(xué)手衛(wèi)生和手機衛(wèi)生情況糟糕，衛(wèi)生意識需加強。手污染也是造成電梯按鈕和指紋打卡機以及手機污染的主要原因。針對手污染，學(xué)生們可隨身自備手消毒劑進(jìn)行消毒，養(yǎng)成使用抑菌洗手液經(jīng)常洗手的好習(xí)慣。注意手衛(wèi)生的同時也需經(jīng)常給手機進(jìn)行消毒，可采用含氯消毒劑或75%酒精對手機及手機殼的表面及邊緣進(jìn)行擦拭消毒，不在吃飯和上廁所時看手機，不與他人分享手機，使用手機前后勤洗手，有條件可定期更換手機殼，以此來減少手機的污染。

總之，某高校公共設(shè)施、學(xué)生手衛(wèi)生以及個人手機衛(wèi)生仍有超標(biāo)現(xiàn)象，學(xué)校相關(guān)部門應(yīng)加強相關(guān)知識普及和健康教育，師生個人需增強自我衛(wèi)生意識并自覺執(zhí)行。

化學(xué)消毒劑與中藥的抑菌作用結(jié)果顯示，對于手指皮膚及手機上的細(xì)菌，新潔爾滅、龍膽紫、黃芩消毒效果均排在前3 位，碘伏、牡丹皮、酒精消毒效果排在后3 位，本結(jié)果可為日常手部皮膚和手機消毒劑的選擇提供參考。值得一提的是，中藥黃芩對手指皮膚和手機上的細(xì)菌均顯示較好的消毒效果。文獻(xiàn)報道黃芩對葡萄球菌、鏈球菌、銅綠假單胞菌、白假絲酵母菌有抑制作用［6，17］，而這些細(xì)菌也是皮膚表面主要存在的細(xì)菌，間接說明黃芩對手部皮膚有抑菌作用，這與本研究結(jié)果相一致。有些化學(xué)消毒劑對人體會造成一定損害，而中草藥因為毒副作用小、來源廣、價格低廉等優(yōu)點越來越受重視［18-21］，本研究可為中藥消毒劑的開發(fā)提供參考。