蒙成藥清肺十八味丸的質(zhì)量研究新進(jìn)展※

敖 星 王國(guó)英 籍學(xué)偉

(內(nèi)蒙古自治區(qū)藥品檢驗(yàn)研究院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

蒙醫(yī)歷史悠久,它不僅是蒙古族人民長(zhǎng)期同各種疾病斗爭(zhēng)的經(jīng)驗(yàn)總結(jié),也吸收和繼承了中醫(yī)、藏醫(yī)理論的優(yōu)秀經(jīng)驗(yàn),最終形成頗具特色的蒙醫(yī)體系[1]。清肺十八味丸是一味典型蒙醫(yī)傳統(tǒng)藥方,由人工牛黃、蒜炭、麝香、石膏、黑云香、訶子[2]、肉豆蔻、北沙參、紅花、檀香、苦參、草烏葉、甘草[3]、木香[4]、銀朱、降香、拳參、沉香18種蒙藥材配伍而成,具有清熱解毒的功效,尤其在治療呼吸系統(tǒng)疾病方面療效顯著。臨床研究表明,清肺十八味丸能有效改善老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺結(jié)核患者的肺功能,抑制炎癥反應(yīng)[5],清肺十八味丸還能有效緩解急性氣管炎患者咳嗽、咯痰、氣急等癥狀,且安全性高,不良反應(yīng)少[6]。此外,清肺十八味丸中的訶子[7]、苦參[8]、木香[9]等還有抗菌、消炎等多重功效。因此,如何保證清肺十八味丸藥品的質(zhì)量尤為重要。有學(xué)者認(rèn)為,混合檢測(cè)方法準(zhǔn)確性、可靠性、完整性較傳統(tǒng)檢測(cè)方法更高,對(duì)清肺十八味丸質(zhì)量研究有較好的指導(dǎo)意義[10-11]。本文將從化學(xué)成分、藥理活性、質(zhì)量控制應(yīng)用3個(gè)方面對(duì)清肺十八味丸的相關(guān)研究文獻(xiàn)進(jìn)行整理歸納,旨在為清肺十八味丸的質(zhì)量研究和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 清肺十八味丸化學(xué)成分分析

清肺十八味丸的藥物組成較多,故以分析方中石膏、草烏葉、紅花、蒜炭、人工牛黃等具有清熱解毒功效藥物的化學(xué)成分為主。研究發(fā)現(xiàn),清肺十八味丸中清熱解毒藥物的主要化學(xué)成分有水硫酸鈣、生物堿、羥基甲苯酸、羥基紅花黃色素、胡蒜素(A、B)、揮發(fā)油、氨基酸、蛋白質(zhì)、皂苷類化合物、苯丙素類化合物、黃酮類化合物、膽固醇、無(wú)機(jī)鹽、豬去氧膽酸、微量元素等,在這些化學(xué)成分中生物堿、揮發(fā)油、微量元素這三類物質(zhì)在藥物功效的發(fā)揮和對(duì)疾病發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸影響的過(guò)程中作用舉足輕重,故從這3類物質(zhì)對(duì)清肺十八味丸方劑的化學(xué)成分進(jìn)行探討。

1.1 生物堿 生物堿是清肺十八味丸方劑發(fā)揮藥理作用的關(guān)鍵活性成分,多種藥物中均含有生物堿?，F(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí),生物堿是草烏葉的主要活性成分,含有去氧烏頭堿、烏頭堿、新烏頭堿、北草烏葉總生物堿等多重生物堿類物質(zhì)[12]。Yu H L等[10]運(yùn)用光譜分析法從草烏葉乙醇提取物中提取出C19-烏頭堿型二萜生物堿、8-乙氧基-14-苯甲?；瘸煞?。紅花藥理活性較為豐富,含化合物200多種,除黃酮類、木質(zhì)素類、有機(jī)酸類、甾體類化合物外,生物堿含量同樣豐富,高達(dá)13種,以5-羥色胺衍生物、抗氧化血清素衍生物為主,如N-(p-香豆酰輔酶)色胺、N-阿魏酰章魚胺-色胺、N-[2-[5-(β-D-葡糖氧基)-1H-靛基質(zhì)-3-yl]乙基]阿魏酸酰胺等[13-14]。除此,紅花還含有5-羥色胺吲哚類衍生物等生物堿,多以單分子結(jié)構(gòu)的方式存在,少為二聚體,如吲哚環(huán)和對(duì)羥基桂皮酰胺的基團(tuán)[15]。Hiroji S等[16]證實(shí),5-羥色胺吲哚類衍生物是一種天然抗氧化物質(zhì),極性較小,多存于紅花油、紅花籽粕之中,是天然的抗氧化物質(zhì)?？鄥⒅械纳飰A成分也在不斷被發(fā)現(xiàn),喹諾里西啶類是其主要成分,少數(shù)為哌啶類和甾體類,根據(jù)生物堿結(jié)構(gòu)骨架可分成苦參堿型(以苦參生物堿為主)、臭豆堿型、金雀花堿型、吲哚型、羽扇豆堿型等[17-24]類型。此外,清肺十八味丸方劑中除上述藥物中含有豐富的生物堿外,拳參[25]、甘草[26]、木香[27]等也都含有豐富的生物堿。

1.2 揮發(fā)油 檀香的化學(xué)成分多達(dá)200多種,以檀香揮發(fā)油為最多,單萜類、木質(zhì)素類物質(zhì)次之[25],除此之外檀香中還含有酚酸類[29-30]、脂肪酸類[31]成分。檀香揮發(fā)油中含有大量倍半萜類化合物,達(dá)148種,如檀香醇(α、β)、佛手烯、喇叭醇、沒藥烯醇、反式-α-香檸檬烯等,其中檀香醇(α、β)在調(diào)節(jié)胃腸道功能、抗腫瘤、抗癌等方面效果顯著,是其發(fā)揮治療作用的主要成分[28]。紅花的化學(xué)成分較多,揮發(fā)油成分主要為倍半萜類化合物,其中又以長(zhǎng)春花甙、二氫紅花菜豆酸-3-O-β-D-葡萄糖為主[32]?？鄥⒅袚]發(fā)油的成分占有一定比例,有學(xué)者鑒定出47種之多,結(jié)構(gòu)類型以烯烴為主,烷烴、醇類次之,還包含酚類、酸類、醛類、酮類等類型[33-35]。黑云香的揮發(fā)油種類也很豐富,劉淑琴[36]通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)在黑云香中鑒定出22個(gè)組分(尚有28種無(wú)法準(zhǔn)確定性),占揮發(fā)油組分總量的69.24%。主要化學(xué)成分有4,6,6-三甲基-(1S)-雙環(huán)[3,1,1]-3-庚烯-2-酮、(1S-endo)-1,7,7-三甲基雙環(huán)[2,2,1]-3-庚醇、冰片等。肉豆蔻的種仁與假種皮皆可入藥,不僅含有苯丙素、黃銅、酚類等化合物,同樣也含有揮發(fā)油。Lima R K等[37]采用水蒸氣蒸餾法和GC-MS鑒定后發(fā)現(xiàn),肉豆蔻中共含有24種揮發(fā)油類化合物,主要成分由高到低為萜烯-4-醇、香檜烯、γ-松油烯。趙祥升等[38]也在肉豆蔻的葉片和種仁中發(fā)現(xiàn)了揮發(fā)油,前者共計(jì)46種,后者共計(jì)41種,兩者的主要成分均為單萜類和芳香類化合物,化學(xué)成分基本相同,只是含量存在一定偏差。

1.3 微量元素 石膏的化學(xué)成分以水合硫酸鈣(CaSO4·2H2O)為主,同時(shí)還含有多種微量元素,主要包括鈣、鈉、鎂、鋁、鉻、錳、鋅等15種微量元素[39-41]。蒜炭作為一種常見蒙藥,藥物活性極其豐富,研究表明其含有豐富的微量元素,包括鋅、鎂、銅、鐵、鋁、汞、錳等[42]。銀朱也是蒙醫(yī)中的常用藥物,約44%的蒙藥中有配伍,以鮮紅、疏松者為上,主要化學(xué)成分2種,一是硫磺,二是硫化汞(α、β),其中α-硫化汞是銀朱的主要成分,除此之外還含有單質(zhì)硫、砷、硒等雜質(zhì),因?yàn)槭芘谥乒に嚨挠绊?銀朱化學(xué)成分和外觀會(huì)發(fā)生變化,故應(yīng)用時(shí)應(yīng)重視[43]。麝香中的微量元素含量較低,約3.62%,除鈣、鈉、鎂、鉀、鐵、鋁外,還有硫酸鹽、磷酸鹽等[44]。人工牛黃的化學(xué)成分種類繁多,主要成分除了含有膽紅素、去氧膽酸、豬膽酸、牛羊膽酸、膽固醇等,還含有豐富的鈣、鐵、銅、鎂、鉀、鈉、磷等微量元素[46-47]。

2 藥理活性分析

2.1 生物堿的藥理活性 傳統(tǒng)蒙醫(yī)理論認(rèn)為,草烏葉味辛、澀,性平,有小毒,功效眾多,既可清熱解毒又可止痛。據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》和《內(nèi)蒙古藥材標(biāo)準(zhǔn)》記載,草烏葉可與麝香、麥冬、烏頭等配伍發(fā)揮鎮(zhèn)痛、消炎、降壓、麻醉、抗癌等藥效,蒙醫(yī)多用于發(fā)熱、泄瀉、頭痛、流行性感冒等病癥的治療。草烏葉別名甘露葉、榜嘎菌納布其等,據(jù)統(tǒng)計(jì)目前300多種蒙藥成方中,應(yīng)用草烏葉的達(dá)20多種[48]。生物堿作為草烏葉的有效成分之一,主要發(fā)揮抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱的功效[11]。烏力吉特古斯等[49]證實(shí),在草烏葉眾多生物堿中,草烏葉總堿的抗炎作用最顯著,但會(huì)受藥物濃度的影響,草烏葉煎劑的濃度越高(濃度：50%>25%)抗炎作用越顯著,高濃度的草烏葉煎劑的草烏葉總堿(0.05%)在用藥后4 h即可參與抗炎,消腫率達(dá)35%,與低濃度的草烏葉煎劑相比顯著更高。草烏葉的鎮(zhèn)痛作用主要與草烏葉總生物堿相關(guān),濃度為25%的草烏葉煎劑可有效抑制小白鼠的扭體運(yùn)動(dòng)[50]。草烏葉的解熱作用與生物堿息息相關(guān),脂溶性烏頭堿有顯著的解熱之效,但由于加熱之后易水解,故掌握草烏葉的最佳煎煮時(shí)間和最佳劑量極為關(guān)鍵[51]。紅花的生物堿種類較多,主要以5-羥色胺衍生物為主,藥理活性涉及抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗菌、抗疲勞等方面[15]。研究數(shù)據(jù)表明,紅花中的生物堿亞精胺類衍生物能選擇性抑制腦組織中的S6細(xì)胞或突觸體中5-羥色胺的攝取,通過(guò)對(duì)5-羥色胺傳遞的調(diào)節(jié),改善神經(jīng)性疾病[52]。體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),紅花中生物堿抗氧化血清素類衍生物對(duì)心臟具有保護(hù)作用[53]。目前木香中的生物堿主要包括蘆丁、紫羅蘭醇(α、β)、香豆精A、β-谷甾醇、clemaphnol A等,其中蘆丁藥理活性較為多樣,如抗炎、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡、抗腫瘤等,蘆丁可通過(guò)調(diào)節(jié)活性氧(ROS)含量和氧化激酶的活性,抑制萬(wàn)古霉素所致的細(xì)胞凋亡[54],減輕硝普鈉誘導(dǎo)的PC12神經(jīng)細(xì)胞損傷,對(duì)神經(jīng)元有保護(hù)作用[55]。β-谷甾醇也是一種較好的抗炎物質(zhì),可抑制Toll 樣受體4(TLR4)、MyD88、白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶(IRAK1)的過(guò)度表達(dá),降低白細(xì)胞介素6(IL-6)、IL-1β水平,對(duì)細(xì)胞炎癥信號(hào)通路起到抑制作用[56]。苦參含有多種化學(xué)成分,生物堿是其主要結(jié)構(gòu)類型之一,有抗炎、抗菌、清熱之效。研究表明,苦參堿可通過(guò)腫瘤壞死因子(TNF)信號(hào)通路作用于TNF、IL-6、牛胱天蛋白酶3(CASP3)等炎性因子,抗炎作用較好,在新型冠狀病毒肺炎治療方面效果顯著[22]?？鄥⒅械幕惫麎A具有抗炎作用,可抑制柯薩奇病毒對(duì)宿主細(xì)胞的附著和穿刺[57]。

2.2 揮發(fā)油的藥理活性 揮發(fā)油是檀香的主要活性成分,因具有行氣止痛、散寒調(diào)中的功效,而廣泛用于心血管、腸道、癌癥等疾病的治療。郭建生等[58-59]發(fā)現(xiàn),檀香揮發(fā)油對(duì)小鼠回腸平滑肌具有雙向調(diào)節(jié)作用,可降低組胺,拮抗乙酰膽堿、氯化鋇等所致的離體腸痙攣。檀香揮發(fā)油中含有豐富的萜類化合物,研究發(fā)現(xiàn)檀香揮發(fā)油對(duì)2,2-二羥甲基丁酸(DMBA)引發(fā)的皮膚癌有預(yù)防作用,經(jīng)檀香揮發(fā)油預(yù)處理之后,雄性CD-1小鼠乳頭狀癌的發(fā)生率得到了有效抑制,且對(duì)正常細(xì)胞不會(huì)造成明顯的損傷[60-62]?？鄥⒌膿]發(fā)油成分含量雖低,但種類豐富,生物學(xué)功能強(qiáng)大。王華等[63]研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)苦參蟲揮發(fā)油干預(yù)之后,可明顯減輕因巴豆油所致的小鼠耳朵腫脹,和因雞蛋清、右旋糖酐、瓊脂及甲醛等致炎物質(zhì)所致的大鼠足腫脹,說(shuō)明苦參蟲揮發(fā)油抗炎作用顯著。此外,苦參揮發(fā)油中的月桂酸能有效降低前列腺癌患者的BDKRB2基因表達(dá),修復(fù)其信號(hào)通路,從而抑制腫瘤形成[64]。Patro B S等[65]研究發(fā)現(xiàn),肉豆蔻的揮發(fā)油活性成分可阻止鐵離子和2,2’-偶氮二異丁基脒二鹽酸鹽誘導(dǎo)的小鼠肝臟線粒體脂質(zhì)的過(guò)氧化,原因可能與其對(duì)自由基和螯合鐵離子有較好的清除能力有關(guān)。此外,肉豆蔻揮發(fā)油還有很好的抗癌作用,對(duì)乳腺癌表皮皮膚癌細(xì)胞株具有明顯的細(xì)胞毒性,也可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞株的體外增長(zhǎng)[66-68]。

2.3 微量元素的藥理活性 微量元素含量雖在人體內(nèi)極低,但其生物學(xué)功能極其重要,微量元素失衡與疾病的發(fā)生息息相關(guān)。石膏是治療熱病之要藥,具有解熱、抗炎的功效[40]。夏怡等[41]研究發(fā)現(xiàn),石膏可顯著促進(jìn)小鼠的腸蠕動(dòng),且在復(fù)方中的療效較單方更顯著,認(rèn)為石膏中的CaSO4·2H2O經(jīng)胃酸作用可增加機(jī)體的血液濃度,抑制肌肉興奮性,有鎮(zhèn)靜、解痙的功效。趙嬌[69]研究認(rèn)為,鈣離子(Ca2+)單用時(shí)石膏的清熱作用會(huì)受阻,但若Ca2+與復(fù)方中的其他成分共同存在時(shí),其清熱效果可明顯提高,由此推斷石膏的清熱作用可能是其他雜質(zhì)、微量元素和CaSO4·2H2O等共同作用的結(jié)果。蒜炭是大蒜經(jīng)武火煅成的碳化物之一,蒙名為賽日木斯格,含有豐富的微量元素,其中鋅能增強(qiáng)細(xì)胞抗病能力,對(duì)免疫系統(tǒng)、防御功能和抗體形成有促進(jìn)作用,銅及血漿銅藍(lán)蛋白有氧化活性,可增強(qiáng)機(jī)體抗病能力,鐵可促進(jìn)淋巴細(xì)胞生成,增加外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)量,提高IL-2水平[42]。牛黃含有鈣、鐵、鈉、銅、鉀、鎂、磷等微量元素,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,國(guó)內(nèi)用藥史已超兩千年,但因稀少目前臨床上多以人工牛黃代替。研究證實(shí),牛黃及其替代品在中樞神經(jīng)、心血管、消化、血液循環(huán)、免疫等系統(tǒng)疾病的治療中效果顯著[46],其微量元素的藥理活性與石膏、蒜炭等相似。

3 質(zhì)量控制應(yīng)用分析

前文以化學(xué)成分、藥理活性為基礎(chǔ),分別從生物堿、揮發(fā)油、微量元素3方面對(duì)清肺十八味丸進(jìn)行了分析,同樣對(duì)其質(zhì)量控制、真?zhèn)舞b別也將從生物堿、揮發(fā)油、微量元素的角度出發(fā)闡述。目前,蒙藥生物堿、揮發(fā)油、微量元素含量的檢測(cè)較常用的是高效液相色譜(HPLC)法。有學(xué)者通過(guò)HPLC測(cè)定蒙藥材草烏葉中有效成分的含量,但其準(zhǔn)確性可受藥物不同采收期的影響,如草烏葉中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、北草烏堿的含量會(huì)隨著采收期的延長(zhǎng)呈現(xiàn)出先減后增的趨勢(shì),最佳采收期為花蕾期[70],且采收過(guò)早或過(guò)晚草烏葉的毒性均高于花蕾期[71]。β-谷甾醇是紅花中的一種生物堿,朱婕欣等[72]研究表明利用HPLC法可對(duì)其很快完成檢測(cè),且可行性高,穩(wěn)定性好。荊敏琪等[73]對(duì)苦參單煎液、藜蘆單煎液與不同配伍比例合煎液進(jìn)行HPLC法測(cè)定,找出了氧化苦參堿、苦參堿的變化規(guī)律,為中藥的“十八反”提供了科學(xué)依據(jù),初步闡述了苦參方劑中生物堿配伍的禁忌機(jī)制。甘草含有一定量的生物堿,盧瑞琦[74]利用HPLC法對(duì)烏頭湯中的總生物堿部位的特征圖譜分析發(fā)現(xiàn),鹽酸黃麻堿、總生物堿部位在一定范圍內(nèi)可抑制大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(RA)增殖,并建立了HPLC譜圖分析條件,方法可行。彭程等[34]通過(guò)對(duì)苦參與荊芥、蛇床子、黃柏、地龍、車前草等配伍的生物堿成分分析后認(rèn)為,配伍苦參可能導(dǎo)致生物堿發(fā)生改變,導(dǎo)致氧化苦參堿轉(zhuǎn)化為苦參堿,同時(shí)找出了苦參方揮發(fā)油的主要成分有胡薄荷酮、薄荷酮等,確定了揮發(fā)油在配伍后的成分及量的變化情況,明確了苦參方劑配伍后有效成分的基本變化規(guī)律。針對(duì)牛黃的化學(xué)成分檢測(cè),柳溫曦等[75]認(rèn)為,因?yàn)榕｜S成分復(fù)雜,HPLC-UV、HPLC-ELSD法在質(zhì)量控制、真?zhèn)舞b別方面存在一定局限性,故而推薦使用靈敏性、選擇性更高的液相-質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用法,盡管如此,該研究同樣肯定了HPLC-UV、HPLC-ELSD法在牛黃測(cè)定中的良好成效,可將HPLC法作為牛黃化學(xué)成分檢測(cè)的專屬性檢測(cè)方法之一。周瑛等[76]利用HPLC-ICP-MS法順利實(shí)現(xiàn)了對(duì)食品中的硒和砷的測(cè)定,獲得了二者的生物有效性相關(guān)數(shù)據(jù),證明硒、砷及其他微量元素參與了生物體的代謝活動(dòng)。國(guó)外學(xué)者Suzuki K T等[77-78]通過(guò)HPLC-ICP-MS法測(cè)定了砷在生物體內(nèi)的基本形態(tài)與代謝過(guò)程。Infante HG等[79]利用HPLC-ICP-MS法對(duì)體內(nèi)的硒的分布情況進(jìn)行針對(duì)性研究時(shí),找到了癌細(xì)胞。周坤等[80]證實(shí)UPLC-Q-Exactive Qrbitrap-MS在訶子和毛訶子的化學(xué)成分識(shí)別與鑒定方面有明顯的優(yōu)勢(shì),操作簡(jiǎn)單,耗時(shí)短,其高分辨質(zhì)譜給出的分子離子峰和碎片離子峰數(shù)據(jù)可為兩者的質(zhì)量控制及藥效闡明提供參考依據(jù)。但目前專門將HPLC法應(yīng)用于清肺十八味丸中藥物微量元素分析的文獻(xiàn)則幾乎沒有涉獵。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述,清肺十八味丸的藥物種類繁多,大致可分為植物、動(dòng)物和礦物三類,是治療呼吸道疾病的常用藥物之一,其清熱、止咳、祛痰的功效在一定程度上與藥物中的生物堿、揮發(fā)油及微量元素等息息相關(guān),但這3類化學(xué)成分的藥理活性是否存在相關(guān)性,仍有待進(jìn)一步研究證實(shí)。HPLC法是一種簡(jiǎn)單、快速,準(zhǔn)確的測(cè)定方法,在清肺十八味丸相關(guān)藥物的生物堿、揮發(fā)油測(cè)定中優(yōu)勢(shì)明顯,真實(shí)、宏觀、整體、綜合,信息量豐富,能明顯觀測(cè)相關(guān)藥物中的生物堿及揮發(fā)油的整體成分變化規(guī)律,通過(guò)有效成分的追蹤,化學(xué)成分的定向轉(zhuǎn)移和不同提取工藝的鑒別,為藥材中生物堿的整體質(zhì)量控制提供參考依據(jù),但在清肺十八味丸相關(guān)藥物微量元素的檢測(cè)方面卻鮮有涉獵,這無(wú)疑需要彌補(bǔ),以便為清肺十八味丸整體質(zhì)量的控制提供依據(jù),滿足蒙醫(yī)對(duì)清肺十八味丸的質(zhì)量控制要求,提高蒙成藥質(zhì)量,避免相關(guān)藥物生物堿、揮發(fā)油、微量元素結(jié)構(gòu)測(cè)定的技術(shù)瓶頸。