灰裂腹魚(yú)人工繁殖技術(shù)研究

周禮敬，楊 林，李正旭，劉桂蘭

（畢節(jié)市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，貴州 畢節(jié) 551700）

灰裂腹魚(yú)（Schizothorax griseus）屬鯉科（Cyprinidae）裂腹魚(yú)亞科（Schizothoracinae）裂腹魚(yú)屬（S c h i z o t h o r a x）裂尻魚(yú)亞屬（Racoma），又名細(xì)鱗魚(yú)，屬我國(guó)特有的高原魚(yú)類(lèi)，喜歡生活在暗河、急流之中，為冷水性底棲魚(yú)類(lèi)，主要分布于金沙江、烏江、瀾滄江、龍川江、大盈江水系，在貴州分布于南盤(pán)江及烏江上游六沖河流域等[1-3]。其肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，含肉率達(dá)71.22%，肌肉營(yíng)養(yǎng)成分豐富，富含人體所必需的各種氨基酸和鐵、錳、鋅等多種礦物質(zhì)，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

灰裂腹魚(yú)對(duì)環(huán)境要求較高，生長(zhǎng)慢、懷卵量低、胚胎發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)等原因?qū)е缕渥匀毁Y源量較少。目前關(guān)于灰裂腹魚(yú)的研究報(bào)道較少，僅見(jiàn)王思宇等[4]研究評(píng)價(jià)了其肌肉營(yíng)養(yǎng)成分，何勇等[5]研究了其遺傳多樣性特征，筆者等[6]對(duì)灰裂腹魚(yú)親魚(yú)在人工繁殖后如何減少細(xì)菌性病害及提高親魚(yú)產(chǎn)后成活率作了技術(shù)性總結(jié)。本研究總結(jié)了灰裂腹魚(yú)親魚(yú)的促熟方法，提高了受精率、孵化率，選擇苗種培育開(kāi)口餌料豐富了灰裂腹魚(yú)繁殖生物學(xué)資料，可為養(yǎng)殖戶(hù)提供參考。

1 材料與方法

1.1 親魚(yú)培育

2020年10月，從烏江上游六沖河流域七星河、盤(pán)大河、總溪河等河段收集灰裂腹魚(yú)野生資源，經(jīng)馴化，2022年5月，選擇體重500 g/尾以上、年齡4齡以上的親魚(yú)進(jìn)行培育。

親魚(yú)培育池為長(zhǎng)方形，面積分別為1號(hào)池30 m2、2號(hào)池80 m2和3號(hào)池120 m2，長(zhǎng)寬比為（4～6）∶1，池深1.5 m，水深1.2 m，池水交換1～2 h/次，分別投放親魚(yú)90尾、210尾和300尾。養(yǎng)殖水源為地下涌泉水，水溫10～17 ℃，溶解氧6 mg/L以上，pH值6.8～8.5。在產(chǎn)卵前1個(gè)月用水泵沿池面沖水，加大池水流動(dòng)。

投喂沉性魚(yú)用配合飼料，飼料粒徑2.0 mm，蛋白質(zhì)含量38%，日投喂量為魚(yú)體重的4%～6%，早上8:00、中午1:00、下午6:00投喂，早晚投喂量占日投喂量的70%，中午占30%。每次投喂時(shí)間不低于20 min，早晚巡塘。

對(duì)照組為普通成魚(yú)養(yǎng)殖池，面積50～200 m2，放養(yǎng)密度8～10尾/m2，執(zhí)行常規(guī)養(yǎng)殖。

1.2 人工繁殖

1.2.1 成熟親魚(yú)雌雄鑒別 性成熟灰裂腹魚(yú)在繁殖期雄魚(yú)吻端“珠星”凸出、明顯，體表鱗片粗糙，輕壓腹部有乳白色精液流出；性成熟雌魚(yú)在繁殖期腹部膨大、屯圓、有不規(guī)則斑點(diǎn)，生殖孔微紅、略微外凸，卵巢輪廓不明顯。

1.2.2 人工催產(chǎn)及授精 2023年3月15—19日，水溫13.5～15.5 ℃時(shí)，分別從3個(gè)親魚(yú)培育池及普通成魚(yú)養(yǎng)殖池中隨機(jī)選擇性成熟親魚(yú)使用促黃體生成素釋放激素類(lèi)似物（LHRH-A2）、魚(yú)用絨毛膜促性腺激素（HCG）、馬來(lái)酸地歐酮（DOM），按雌魚(yú)每千克體重注射HCG 1 200 U +LRH-A220 μg +DOM 8 mg。雌魚(yú)采用二次注射，第一次注射劑量為總劑量的1/3，第二次注射劑量為總劑量的2/3。針距時(shí)間為48 h。雄魚(yú)在雌魚(yú)第二次注射時(shí)同步一次注射，注射劑量為雌魚(yú)總劑量的1/2。注射采用胸鰭基部胸腔注射法。將注射催產(chǎn)劑的親魚(yú)按雌雄2∶1的比例放入催產(chǎn)暫養(yǎng)池暫養(yǎng)，暫養(yǎng)池的水流速度加大到1～3 m/s，池頂加蓋防逃網(wǎng)。按照以上方法，同時(shí)從普通成魚(yú)養(yǎng)殖池中選擇親魚(yú)開(kāi)展人工催產(chǎn)對(duì)比試驗(yàn)。

距親魚(yú)第二次注射催產(chǎn)劑24 h后，需做好采卵授精準(zhǔn)備。按雌雄親魚(yú)2∶1的數(shù)量采卵、采精后使用干法人工授精[7]。同時(shí)根據(jù)卵粒數(shù)量及時(shí)加入稀釋液10～30 mL[8]，并繼續(xù)搖動(dòng)1～2 min后靜置3～5 min，讓其充分授精，用清水漂洗卵粒3～5次后轉(zhuǎn)入流水孵化。

灰裂腹魚(yú)卵為沉性微粘性卵，呈灰白色或淺黃色，吸水前卵徑1.6～2.0 mm，授精2 h后吸水膨脹達(dá)到最大，為2.3～3.2 mm。

1.2.3 人工孵化 孵化用水經(jīng)200目篩絹過(guò)濾，灰裂腹魚(yú)受精卵人工孵化采用流水孵化箱盛卵，孵化箱規(guī)格為42 cm×35 cm×25 cm，每箱放入受精卵4萬(wàn)～6萬(wàn)粒，蓋好遮陽(yáng)蓋板，調(diào)節(jié)水體流速至0.05～0.10 m/s。孵化期間及時(shí)去除發(fā)白卵或卵黃上帶白點(diǎn)的死卵，使用3 mg/L高錳酸鉀溶液浸卵20 min，1 d/次。水溫13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃）時(shí)，經(jīng)162 h孵化后開(kāi)始出膜。

受精率=（原腸中期存活授精卵數(shù)/孵化魚(yú)卵總數(shù)）×100%；孵化率=（出膜魚(yú)苗數(shù)/原腸中期存活受精卵數(shù)）×100%。

1.3 魚(yú)苗培育

初孵魚(yú)苗全長(zhǎng)7～9 mm，出膜后1周在混合營(yíng)養(yǎng)期投喂切碎的紅線(xiàn)蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料，先用3%食鹽水浸泡消毒10 min，經(jīng)充分漂洗后切碎投喂。9～12 d時(shí)卵黃吸收完畢，能自主上浮，出膜2周時(shí)投喂微粒子魚(yú)苗開(kāi)口料，投喂時(shí)把飼料拌水后捏成塊狀。當(dāng)魚(yú)苗長(zhǎng)到2 cm左右時(shí)，按每萬(wàn)尾每日投放20 g投喂斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)苗飼料進(jìn)行飼養(yǎng)，每15 d抽測(cè)1次體長(zhǎng)或體重，以便適時(shí)調(diào)整投飼量。

1.4 親魚(yú)催產(chǎn)率數(shù)據(jù)處理

親魚(yú)催產(chǎn)率的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS軟件，試驗(yàn)結(jié)果平均催產(chǎn)率（%）用“x±s”表示。組間差異性比較用單因素方差分析后用非配對(duì)試驗(yàn)樣本均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)）對(duì)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，以P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05表示差異顯著[9]。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 親魚(yú)培育

用于培育的試驗(yàn)親魚(yú)在年齡上已達(dá)到性成熟年齡要求，通過(guò)近1年的培育，在2023年3月進(jìn)行繁殖時(shí)，1號(hào)親魚(yú)池培育的雌性灰裂腹魚(yú)親魚(yú)催產(chǎn)率不足70%，2號(hào)池、3號(hào)池培育的雌性灰裂腹魚(yú)親魚(yú)催產(chǎn)率均在90%以上。對(duì)照組（普通成魚(yú)養(yǎng)殖池）培育的雌性灰裂腹魚(yú)親魚(yú)催產(chǎn)率僅為29.05%（表1）。所有雄魚(yú)經(jīng)注射一次催產(chǎn)劑均可正常排精。

表1 灰裂腹魚(yú)親魚(yú)催產(chǎn)情況

試驗(yàn)組的催產(chǎn)率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；2 號(hào)池、3 號(hào)池的催產(chǎn)率均顯著高于1 號(hào)池（P＜0.05）；2號(hào)池與3號(hào)池間差異不顯著（P＞0.05）。

從163尾產(chǎn)卵親魚(yú)中隨機(jī)抽測(cè)了15尾親魚(yú)，體長(zhǎng)為28.5～39.3 cm，平均34.8 cm；體質(zhì)量為592～1 283 g，平均985 g。絕對(duì)懷卵量為6 425～14 108粒，平均11 334粒/尾，相對(duì)懷卵量為84～141粒，平均125粒/g。

2.2 人工繁殖

3月18—22日試驗(yàn)組分3批次共催產(chǎn)灰裂腹魚(yú)雌魚(yú)187尾，產(chǎn)卵163尾，獲卵粒184.7萬(wàn)粒。在水溫13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃）時(shí)，受精卵經(jīng)162 h孵化開(kāi)始出膜，出膜持續(xù)時(shí)長(zhǎng)34 h。在胚胎發(fā)育到原腸中期時(shí)抽測(cè)統(tǒng)計(jì)，最高受精率為82.6%，最低受精率為70.2%，平均受精率為78.4%；在出膜完畢時(shí)抽測(cè)統(tǒng)計(jì)，最高孵化率為71.3%，最低孵化率為58.1%，平均孵化率為67.2%。共孵出魚(yú)苗97.2萬(wàn)尾（表2）。

表2 灰裂腹魚(yú)人工繁殖情況

2.3 魚(yú)苗培育

灰裂腹魚(yú)出膜期仔魚(yú)全長(zhǎng)7～9 mm，出膜后第1～2 d都是臥于孵化箱底部。出膜3 d后胚體平直，卵黃囊呈棒狀，血液變紅沿胚體一周循環(huán)。出膜后4～5 d時(shí)腰點(diǎn)出現(xiàn)（鰾形成），魚(yú)苗常扎堆集中在孵化箱角落處，部分可間歇性躍起。出膜1周后魚(yú)苗開(kāi)始上孵，此時(shí)投喂切碎的紅線(xiàn)蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料。出膜2周時(shí)改喂微粒子魚(yú)苗開(kāi)口料，當(dāng)魚(yú)苗長(zhǎng)到2 cm左右時(shí)，按每萬(wàn)尾每日投放20 g斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)苗飼料進(jìn)行飼養(yǎng)，隨著魚(yú)苗生長(zhǎng)逐步加大投喂量。經(jīng)過(guò)60 d培育，獲得全長(zhǎng)2.3～3.5 cm魚(yú)苗64.8萬(wàn)尾，魚(yú)苗培育成活率66.7%。

3 討論

3.1 環(huán)境條件對(duì)親魚(yú)培育的影響

親魚(yú)培育質(zhì)量是魚(yú)類(lèi)人工繁殖的關(guān)鍵，若越冬前投喂的飼料不能滿(mǎn)足其性腺發(fā)育需要，在繁殖期就會(huì)常常出現(xiàn)親魚(yú)成熟不足或懷卵量明顯減少的現(xiàn)象；若越冬后仍大量投喂脂肪含量高的飼料，則容易造成脂肪過(guò)多，導(dǎo)致不能正常產(chǎn)卵[10]。野外環(huán)境下親魚(yú)總是自主去尋找最適宜于自身發(fā)育、索餌、越冬等的河流環(huán)境。使用流水池塘，溶解氧在6.5 mg/L以上，常年水溫12～18 ℃，適合于昆明裂腹魚(yú)的生長(zhǎng)與發(fā)育[11]?；伊迅刽~(yú)人工養(yǎng)殖條件下，選用常年水溫10～17 ℃的水環(huán)境，雖然與天然環(huán)境相比缺少了夏季的高溫期與冬季的低溫期，缺少了急流、險(xiǎn)灘等天然環(huán)境，但培育能取得成功說(shuō)明選擇環(huán)境恰當(dāng)，且試驗(yàn)組3個(gè)親魚(yú)培育池培育的親魚(yú)催產(chǎn)率明顯高于對(duì)照組。通過(guò)對(duì)比人工催產(chǎn)成熟親魚(yú)的產(chǎn)卵情況發(fā)現(xiàn)，1號(hào)池培育的親魚(yú)催產(chǎn)率明顯低于2號(hào)池和3號(hào)池。3個(gè)親魚(yú)培育池選用的培育親魚(yú)、水源、流速、飼料、放養(yǎng)密度等基本一致，但1號(hào)池僅30 m2，而2號(hào)池為80 m2，3號(hào)池為120 m2，這說(shuō)明親魚(yú)培育池過(guò)小不利于親魚(yú)培育。研究發(fā)現(xiàn)，適合灰裂腹魚(yú)親魚(yú)培育的魚(yú)池面積應(yīng)在50 m2以上、水深1.2 m以上。在產(chǎn)卵前模仿野生環(huán)境用加大沖水刺激性腺發(fā)育，提高繁殖效率，這與陳禮強(qiáng)[12]研究細(xì)鱗裂腹魚(yú)人工繁殖時(shí)加快性腺發(fā)育的方法基本一致。

試驗(yàn)組親魚(yú)培育養(yǎng)殖密度為2.5～3.0尾/m2，明顯低于對(duì)照組8～10尾/m2的養(yǎng)殖密度。此外，試驗(yàn)組親魚(yú)培育池池水交換率較高，在產(chǎn)卵前1個(gè)月每2 d用水泵抽水沿池面沖水1次，加大池水流動(dòng)，促進(jìn)了親魚(yú)性腺發(fā)育，更有助于卵的成熟。

3.2 促進(jìn)灰裂腹魚(yú)人工繁殖的環(huán)境因素

魚(yú)類(lèi)促性腺激素（GTH）的分泌受促性腺激素釋放激素（GnRH）和多巴胺（DA）的雙重調(diào)節(jié)，GnRH能促進(jìn)GTH的釋放誘導(dǎo)排卵，而DA對(duì)GTH則是抑制作用[13-14]。注射外源性激素可誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)排卵，但要使其順利產(chǎn)卵，常常還需要適宜的外部環(huán)境因素，如大流速的水流、合適的水溫等。試驗(yàn)采用外源性激素（HCG和LRH-A2）和DA的拮抗物馬來(lái)酸地歐酮（DOM）三種特質(zhì)按雌魚(yú)每千克體重注射HCG 1 200 U +LRH-A220 μg +DOM 8 mg劑量，取得了較好的催產(chǎn)效果?；伊迅刽~(yú)在注射催產(chǎn)素后因體內(nèi)短時(shí)間激素水平升高，雌雄親魚(yú)均表現(xiàn)出異常興奮，一是有相互追逐現(xiàn)象，二是特別愛(ài)跳躍，因此要加蓋防逃網(wǎng)，勤觀察、勤檢查，防止親魚(yú)跳出催產(chǎn)暫養(yǎng)池造成損失。

人工授精時(shí)有效地延長(zhǎng)精子成活時(shí)間及劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)間對(duì)提高受精率有極大促進(jìn)作用，0.8%NaCl溶液激活四川裂腹魚(yú)的精子讓其受精率大幅度提高[15]，參照DB42/T 1857—2022《齊口裂腹魚(yú)人工繁殖技術(shù)規(guī)范》[8]，在灰裂腹魚(yú)人工繁殖時(shí)使用0.45%的生理鹽水激活液激活精子，其平均受精率達(dá)到78.4%。

在孵化水溫為13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃）時(shí)，灰裂腹魚(yú)受精卵孵化所需時(shí)間為162 h。與同期繁殖的昆明裂腹魚(yú)168 h[11]、四川裂腹魚(yú)158 h[16]相當(dāng)。長(zhǎng)時(shí)間的孵化會(huì)造成工作量增加，也會(huì)給各種病害的發(fā)生帶來(lái)更多機(jī)會(huì)。孵化期的水溫、死卵為水霉菌的繁殖帶來(lái)了有利時(shí)機(jī)。為防止死卵著生水霉感染正常發(fā)育的受精卵，采用以下方法：一是及時(shí)去除死卵防止水霉病，但該方法工作量較大；二是孵化期間使用3 mg/L高錳酸鉀溶液浸卵20 min，1 d/次。

3.3 胚胎發(fā)育

胚胎發(fā)育結(jié)果顯示，在水溫13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃）的情況下，灰裂腹魚(yú)卵在孵化4 h后出現(xiàn)卵裂溝，開(kāi)始進(jìn)入細(xì)胞分裂期。大部分未受精的卵也能正常完成細(xì)胞分裂，部分受精卵及未受精的卵主要死亡時(shí)期在囊胚階段，即受精后的第2天。原腸期可作為灰裂腹魚(yú)胚胎發(fā)育拐點(diǎn)，胚胎發(fā)育順利通過(guò)原腸中期后便很少死亡，大部分可正常發(fā)育到魚(yú)苗孵出?；伊迅刽~(yú)胚胎發(fā)育較為同步，從受精到孵出歷時(shí)162 h，積溫2 400 ℃· h。

胚胎發(fā)育具有種的特異性，主要是種的遺傳因素來(lái)決定，受精卵的發(fā)育速率受環(huán)境因子影響較大[17]?；伊迅刽~(yú)的卵呈圓球形，灰白色或淺黃色，為沉性卵，微粘性，初孵仔魚(yú)全長(zhǎng)7～9 mm，心跳劇烈，血液循環(huán)明顯。在水溫13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃）的情況下孵化歷時(shí)162 h出苗，這與同科同屬的拉薩裂腹魚(yú)[18]胚胎發(fā)育所需時(shí)間相差較大。

3.4 仔稚幼魚(yú)期魚(yú)苗培育

灰裂腹魚(yú)初孵仔魚(yú)全長(zhǎng)7～9 mm，全身透明，體視顯微鏡下可見(jiàn)此時(shí)心臟跳動(dòng)頻率達(dá)到150次/min左右，血液僅在心臟部位和尾部為紅色，其余部位無(wú)色。初孵仔魚(yú)第1～2 d都是臥于孵化箱底部。出膜3 d后胚體平直，全身血液變紅。出膜4～5 d后魚(yú)鰾開(kāi)始形成，部分可間歇性躍起，體表色素開(kāi)始出現(xiàn)，各鰭呈透明狀，無(wú)鰭條，營(yíng)養(yǎng)來(lái)源全部依靠卵黃囊。出膜1周后魚(yú)苗開(kāi)始上孵，此時(shí)腸道通暢，下頜、鰓蓋可正常開(kāi)合，鰓絲變紅，卵黃囊吸收基本完成，魚(yú)苗處于混合營(yíng)養(yǎng)期，投喂切碎的紅線(xiàn)蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料。仔魚(yú)的開(kāi)口時(shí)間、餌料的適口性、營(yíng)養(yǎng)性及投喂方法，是影響仔魚(yú)成活和生長(zhǎng)的關(guān)鍵技術(shù)[19]。紅線(xiàn)蟲(chóng)作為大多數(shù)魚(yú)類(lèi)的開(kāi)口餌料，其營(yíng)養(yǎng)豐富、全面，且適口性好，經(jīng)切斷后未被魚(yú)苗吃下的還能成活，不易污染水質(zhì)。出膜2周時(shí)魚(yú)苗各器官已形成，改喂微粒子魚(yú)苗開(kāi)口料，當(dāng)魚(yú)苗長(zhǎng)到2 cm左右時(shí)，按每萬(wàn)尾每日投放20 g斑點(diǎn)叉尾鮰魚(yú)苗飼料進(jìn)行飼養(yǎng)，后期隨著魚(yú)苗生長(zhǎng)逐步加大投喂量。

4 結(jié)語(yǔ)

本研究從親魚(yú)培育、雌雄鑒別、采卵授精及人工孵化、苗種培育等方面詳細(xì)介紹了灰裂腹魚(yú)人工繁殖的技術(shù)要求，投喂蛋白質(zhì)含量38%全價(jià)配合飼料可以滿(mǎn)足灰裂腹魚(yú)親魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需求，成熟灰裂腹魚(yú)的絕對(duì)懷卵量為6 425～14 108粒（平均11 334粒/尾），相對(duì)懷卵量為84～141粒（平均125粒/g）；受精卵在孵化水溫為13.5～15.5 ℃（平均14.8 ℃）時(shí)，經(jīng)歷162 h孵化開(kāi)始出膜，所需積溫2 400 ℃·h，初孵魚(yú)苗全長(zhǎng)7～9 mm，使用紅線(xiàn)蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料，經(jīng)2次轉(zhuǎn)食，培育60 d后全長(zhǎng)可達(dá)2.3～3.5 cm。