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    平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵技術(shù)初探

    2024-03-11 06:44:24錢武兵黃建春蔡斌強(qiáng)仇陽(yáng)陽(yáng)李寅輝徐佳佳
    食用菌 2024年1期
    關(guān)鍵詞:含氮碳氮比播種量

    錢武兵 黃建春 王 倩 蔡斌強(qiáng) 仇陽(yáng)陽(yáng) 李寅輝 徐佳佳

    (1上海聯(lián)中食用菌專業(yè)合作社,上海金山 201500;2上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所,上海奉賢 201400)

    平菇在我國(guó)栽培面積廣,栽培技術(shù)成熟,產(chǎn)量高,是利用農(nóng)業(yè)廢棄物生產(chǎn)食物的優(yōu)良食用菌品種[1]。國(guó)內(nèi)平菇栽培模式從早期易受污染的床式栽培,發(fā)展到目前普遍應(yīng)用的袋式栽培,最突出的問題是機(jī)械化程度較低,生產(chǎn)效率不高。以目前應(yīng)用最廣泛且機(jī)械化程度最高的發(fā)酵料袋式栽培為例。第一,在料袋和原料準(zhǔn)備、堆制發(fā)酵、裝袋滅菌、接種、菌絲培養(yǎng)、出菇管理、采收[2]整個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)中,有許多重復(fù)性操作,如從裝袋滅菌到出菇管理環(huán)節(jié),料袋需多次搬運(yùn)、碼放;裝袋滅菌至接種結(jié)束過程中,需重復(fù)對(duì)料袋進(jìn)行封口與開口。第二,高溫滅菌時(shí)料袋的數(shù)量常受滅菌設(shè)備規(guī)模的限制,且滅菌后的料袋需要較長(zhǎng)時(shí)間冷卻。所以,目前的栽培模式制約了平菇產(chǎn)業(yè)的機(jī)械化、自動(dòng)化與規(guī)模化發(fā)展。此外,依托于該模式下的平菇發(fā)酵料栽培技術(shù)在推廣應(yīng)用過程中也存在許多問題,如發(fā)菌期間培養(yǎng)料高溫導(dǎo)致燒菌、氨質(zhì)量濃度過高抑制菌絲生長(zhǎng)、料袋污染嚴(yán)重等。

    近年來,中國(guó)已有多家雙孢蘑菇生產(chǎn)企業(yè)引進(jìn)荷蘭先進(jìn)的培養(yǎng)料三次發(fā)酵技術(shù)。三次發(fā)酵又稱“走菌”,是指將二次發(fā)酵制備的選擇性培養(yǎng)料,混入菌種后送入封閉式隧道進(jìn)行菌絲體繁殖。三次發(fā)酵時(shí),雙孢蘑菇菌絲在精準(zhǔn)調(diào)控的隧道內(nèi)發(fā)菌,控制料溫24~27 ℃,氧氣體積分?jǐn)?shù)10%左右,經(jīng)過14~17 d,菌絲即可爬滿一整倉(cāng)的培養(yǎng)料。采用培養(yǎng)料三次發(fā)酵技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是提高雙孢蘑菇產(chǎn)量,縮短栽培周期,保證發(fā)菌料的質(zhì)量并降低病蟲害侵染的風(fēng)險(xiǎn)[3-4]。

    相對(duì)于雙孢蘑菇,平菇是木質(zhì)纖維素的初級(jí)分解者,但平菇菌絲適應(yīng)性強(qiáng),可以利用更廣泛的富含纖維素、半纖維素、木質(zhì)素的農(nóng)副產(chǎn)品下腳料栽培,如棉籽殼、玉米芯及各種作物秸稈。據(jù)報(bào)道,平菇菌絲體生長(zhǎng)溫度為3~35 ℃,最適溫度為24~26 ℃[5];pH為5~9,最適pH為5.5~6.5[6]。菌絲對(duì)二氧化碳不敏感,菌絲生長(zhǎng)階段不需要光照,且菌絲未成熟時(shí)不會(huì)扭結(jié)形成子實(shí)體[7]。平菇培養(yǎng)料含水量60%~65%為宜,出菇期可適當(dāng)補(bǔ)水提高培養(yǎng)料的含水量[2,8]。因此,平菇的生物學(xué)特性與雙孢蘑菇相似,為平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵提供可能性與操作空間。筆者借鑒雙孢蘑菇培養(yǎng)料一、二、三次發(fā)酵技術(shù)流程與工藝,以探索與開發(fā)平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵技術(shù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    主要原料:干麥草、新鮮雞糞、稻殼雞糞;輔料:過磷酸鈣、尿素、生石灰、石膏、杏鮑菇菌渣;菌種:平菇栽培種2005、2150、夏灰1號(hào),由味之源菌業(yè)提供,均為棉籽殼菌種,打碎備用。

    1.2 試驗(yàn)場(chǎng)地與儀器設(shè)備

    試驗(yàn)在上海聯(lián)中食用菌專業(yè)合作社完成。一次發(fā)酵槽規(guī)格為40 m×9 m×9 m,二次發(fā)酵隧道規(guī)格為40 m×9 m×9 m,方艙式可移動(dòng)低壓發(fā)酵隧道規(guī)格為12.2 m×2.4 m×2.9 m[9],三次發(fā)酵罐規(guī)格為π×(0.3 m)2×0.9 m。

    主要儀器:NIRSTMDS2500F近紅外分析儀,瑞士萬通中國(guó)有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 培養(yǎng)料三次發(fā)酵

    將干麥草捆強(qiáng)制浸泡90~120 s后解捆建堆,根據(jù)麥稈蠟質(zhì)層厚度預(yù)堆4~5 d;混料前2 d,將雞糞、石膏、石灰等輔料均勻混合后預(yù)堆。

    培養(yǎng)料一次發(fā)酵在一次發(fā)酵槽進(jìn)行。一次發(fā)酵第1天采用全自動(dòng)化皮帶式混料系統(tǒng),將原材料與拌勻的輔料混合,使用頂端投料車在發(fā)酵槽分層水平進(jìn)料?;炝虾蟮?天進(jìn)行第1次轉(zhuǎn)倉(cāng),第4天進(jìn)行第2次轉(zhuǎn)倉(cāng),第6天進(jìn)行第3次轉(zhuǎn)倉(cāng)。一次發(fā)酵共持續(xù)12 d,期間每次轉(zhuǎn)倉(cāng)時(shí)適當(dāng)補(bǔ)水,將培養(yǎng)料含水量控制在74%~78%。一次發(fā)酵期間通過高壓鼓風(fēng)機(jī)間歇鼓風(fēng),將料溫快速提升至75 ℃,然后將風(fēng)機(jī)開關(guān)頻率設(shè)定為開4 min關(guān)16 min,使料溫穩(wěn)定在75~80 ℃。

    培養(yǎng)料二次發(fā)酵在二次發(fā)酵隧道或方艙式可移動(dòng)低壓發(fā)酵隧道完成。首先啟動(dòng)10 h左右的快速循環(huán)程序,將一次發(fā)酵培養(yǎng)料平均料溫降至45 ℃,料溫溫差控制在3 ℃以內(nèi),然后以1.2~1.5 ℃/h的速度升溫,當(dāng)料溫達(dá)58 ℃后,維持8 h的巴氏殺菌,最后通過提高風(fēng)機(jī)轉(zhuǎn)速將培養(yǎng)料料溫降溫至48 ℃,直至二次發(fā)酵第5天夜間降溫至25 ℃,待第6天播種。

    培養(yǎng)料三次發(fā)酵在方艙式可移動(dòng)低壓發(fā)酵隧道內(nèi)或由三次發(fā)酵罐完成,發(fā)菌過程中由氣候控制系統(tǒng)維持料溫25~28 ℃,直至出料。

    1.3.2 試驗(yàn)配方、播種量及菌種

    表1中試驗(yàn)按時(shí)間順序依次進(jìn)行,試驗(yàn)時(shí)間為2022年6月至2023年8月。處理①的二、三次發(fā)酵均在方艙式可移動(dòng)低壓發(fā)酵隧道進(jìn)行;處理②、處理③、處理④的三次發(fā)酵在方艙式可移動(dòng)低壓發(fā)酵隧道進(jìn)行;處理⑤、處理⑥、處理⑦的三次發(fā)酵在三次發(fā)酵罐進(jìn)行,具體試驗(yàn)配方、播種量和菌種見表1。

    表1 平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵試驗(yàn)配方、播種量及菌種

    1.3.3 菌絲恢復(fù)及出菇管理

    平菇三次培養(yǎng)料出料后,裝入塑料袋(45 cm×45 cm)壓實(shí),轉(zhuǎn)運(yùn)至菇房,袋口朝下放置,并在其上扎6~8個(gè)通氣孔,選擇幾袋插上溫度計(jì)。因?yàn)槿瘟铣隽蠒r(shí),培養(yǎng)料中的菌絲被拉斷,恢復(fù)生長(zhǎng)時(shí)料溫會(huì)迅速升高,要尤其注意該階段(持續(xù)8 d左右)料溫的控制。當(dāng)料溫快速上升時(shí),降低空氣溫度,使料溫維持在25~28 ℃;當(dāng)菌絲滿袋出現(xiàn)黃水時(shí),每袋劃1~2處小口,然后噴水增濕,降溫,拉大溫差,提高新風(fēng)比例,催蕾。平菇原基形成后,根據(jù)菌種特性將空氣溫度調(diào)整至出菇溫度,空氣相對(duì)濕度控制為80%~90%。采收后,停水養(yǎng)菌4~6 d,再次轉(zhuǎn)入常規(guī)出菇管理;轉(zhuǎn)潮期間,對(duì)失水嚴(yán)重的打包料適當(dāng)補(bǔ)水。

    1.3.4 考察內(nèi)容及方法

    對(duì)發(fā)酵過程中培養(yǎng)料的理化參數(shù)進(jìn)行跟蹤,并統(tǒng)計(jì)發(fā)菌時(shí)間與出菇產(chǎn)量。

    培養(yǎng)料取樣方法:進(jìn)料(出料)過程中,取發(fā)酵槽(隧道)總長(zhǎng)度的三分之一,二分之一以及三分之二的培養(yǎng)料充分混合。

    圖1 平菇三次培養(yǎng)料裝袋栽培

    培養(yǎng)料理化性質(zhì)測(cè)定方法:取部分充分混合的培養(yǎng)料,用剪刀將過長(zhǎng)的麥秸稈剪成小于2 cm的小段;將預(yù)處理的樣品按儀器使用規(guī)程裝入NIRSTMDS2500F近紅外分析儀的樣品杯中,裝樣量控制在100~150 g,360°旋轉(zhuǎn)測(cè)定,掃描8次;再換另一樣品杯,重復(fù)上述操作。經(jīng)處理共得16組理化數(shù)據(jù),取平均值。

    發(fā)菌時(shí)間統(tǒng)計(jì)方法:從播種至菌絲爬滿整個(gè)培養(yǎng)料用時(shí),即發(fā)菌天數(shù)(d)=三次發(fā)酵結(jié)束日期-三次發(fā)酵開始日期。

    產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)方法:隨機(jī)標(biāo)記5袋三次培養(yǎng)料,稱量質(zhì)量;并在出菇期間記錄標(biāo)記的每袋三次培養(yǎng)料所采收的平菇子實(shí)體質(zhì)量,即袋產(chǎn)量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料關(guān)鍵理化參數(shù)變化

    測(cè)定不同發(fā)酵階段培養(yǎng)料的干物質(zhì)量、pH、灰分、總揮發(fā)性氮、含氮量、碳氮比,結(jié)果見圖2-7(其中灰分、總揮發(fā)性氮、含氮量為平菇培養(yǎng)料干物質(zhì)中的含量)。

    圖2 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料干物質(zhì)含量

    總的來說,采用此套培養(yǎng)料發(fā)酵工藝流程,以一次發(fā)酵、二次發(fā)酵、三次發(fā)酵結(jié)束當(dāng)天為時(shí)間節(jié)點(diǎn),所有處理平菇培養(yǎng)料發(fā)酵過程中關(guān)鍵理化參數(shù)的變化趨勢(shì)一致。需要指出的是,由于混料當(dāng)天,培養(yǎng)料混合尚不均勻,經(jīng)三次轉(zhuǎn)倉(cāng)后一次料才逐漸均勻穩(wěn)定,因此混料當(dāng)天的個(gè)別培養(yǎng)料樣品理化參數(shù)數(shù)值存在一定偏差。

    在培養(yǎng)料發(fā)酵不同階段,各組別平菇培養(yǎng)料的干物質(zhì)含量均呈上升趨勢(shì)(圖2),即隨著發(fā)酵進(jìn)程培養(yǎng)料中的含水量不斷下降。除處理①外,其他處理平菇二次料的干物質(zhì)含量相近,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%~32%。三次發(fā)酵結(jié)束后,平菇三次料的干物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%~43%,其中處理⑦干物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,為42.5%,可能原因是其在三次發(fā)酵時(shí)(2023年6月4日至2023年6月17日),鼓入的新風(fēng)較為干燥,導(dǎo)致培養(yǎng)料水分流失較多。

    各處理平菇培養(yǎng)料的pH在培養(yǎng)料發(fā)酵過程中均呈下降趨勢(shì)(圖3)。一次至二次發(fā)酵結(jié)束,pH下降較小,二次料的pH為7.8~8.1,各處理間十分相近。三次發(fā)酵過程中,隨著平菇菌絲生長(zhǎng),pH大幅降低,除處理⑦pH為5.6外,其他處理pH在6.1~6.8,處理⑦的pH最低,可能與其低含水量有關(guān)。

    圖3 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料pH

    平菇培養(yǎng)料灰分含量在培養(yǎng)料發(fā)酵過程中不斷上升。至三次發(fā)酵結(jié)束,除處理①外,其他處理三次料灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)均在32%以上。處理①三次料灰分質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低,僅為26%(圖4),可能與該處理培養(yǎng)料未使用雞糞有關(guān)。

    圖4 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料灰分含量

    所有處理平菇培養(yǎng)料中的總揮發(fā)性氮含量變化情況相似(圖5)。二次發(fā)酵結(jié)束后,除處理⑦[總揮發(fā)性氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.36 mg/(100 g)]外,其他處理二次料中可揮發(fā)性氮接近于0,表明培養(yǎng)料中的氨氣排盡,可以正常播種。三次發(fā)酵完成后,培養(yǎng)料中的總揮發(fā)性氮含量略有上升,表明三次發(fā)酵過程中產(chǎn)生了一定量的銨根離子或者氨氣,這可能與平菇菌絲分解利用氮源物質(zhì)進(jìn)行生長(zhǎng)有關(guān)。處理⑦平菇三次料的總揮發(fā)性氮含量最高,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.06 mg(/100 g)。

    圖5 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料總揮發(fā)性氮含量

    由圖6可知,在培養(yǎng)料發(fā)酵進(jìn)程中,所有處理培養(yǎng)料的含氮量不斷上升。由于處理①配方中氮源物質(zhì)占比極小,所以整個(gè)發(fā)酵過程中其培養(yǎng)料含氮量低于其他處理,三次發(fā)酵結(jié)束時(shí)含氮量?jī)H為0.89%;而其他處理配方中的氮源比例相近,發(fā)酵過程中含氮量變化趨勢(shì)基本一致,二次料含氮量在1.8%~2.2%,三次料含氮量穩(wěn)定在2.1%~2.4%。

    圖6 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料氮含量

    由圖7可知,在培養(yǎng)料發(fā)酵過程中,平菇培養(yǎng)料碳氮比不斷下降。由于處理①配方中含氮量低,所以整個(gè)發(fā)酵過程中其培養(yǎng)料碳氮比明顯高于其他處理,三次料碳氮比高達(dá)41.6。處理②、處理③、處理④、處理⑤、處理⑥、處理⑦碳氮比變化趨勢(shì)基本一致,二次發(fā)酵結(jié)束后培養(yǎng)料碳氮比略低于20,其中處理⑦最低,為14.8,三次料碳氮比穩(wěn)定在13~16。

    圖7 不同發(fā)酵階段平菇培養(yǎng)料碳氮比

    2.2 平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵發(fā)菌時(shí)間

    試驗(yàn)比較了接種后平菇菌絲在培養(yǎng)料中的發(fā)菌時(shí)間(圖8)。使用平菇菌種2005,播種量為3%時(shí),28 d完成發(fā)菌。使用平菇菌種2150,播種量為5%時(shí),24~25 d完成發(fā)菌;播種量增加至20%時(shí),僅需14 d菌絲即可爬滿整個(gè)培養(yǎng)料。使用菌種夏灰1號(hào),播種量20%,在第13天即可完成發(fā)菌。結(jié)果表明:平菇2005、2150和夏灰1號(hào)3個(gè)菌種均可在平菇三次發(fā)酵培養(yǎng)料上正常發(fā)菌并吃料,且播種量越大,發(fā)菌時(shí)間越短。

    圖8 不同處理的發(fā)菌時(shí)間

    圖9 處理⑤三次發(fā)酵罐中發(fā)菌16 d菌絲狀態(tài)

    2.3 產(chǎn)量

    由表2可知,處理①、處理②、處理③、處理④、處理⑤、處理⑥的平菇三次料的生物學(xué)效率為49.5%~63.4%,其中處理⑤生物學(xué)效率最高,為63.4%,與處理②、處理③、處理⑥均存在顯著差異;處理②最低,為49.5%,但與處理①、處理③、處理⑥不存在顯著差異。除處理①與處理⑦(未采集到產(chǎn)量數(shù)據(jù)),其他處理二次料干物質(zhì)含量相近,處理⑤三次料干物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低,為30.1%,處理②最高,為35.9%。據(jù)此推測(cè)在一定范圍內(nèi),三次料干物質(zhì)含量越低,生物學(xué)效率越高,這可能與三次發(fā)酵過程中水分損失程度有關(guān)。發(fā)酵中水分損失越少,表明發(fā)菌時(shí)隧道系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)多且充分。經(jīng)計(jì)算,平菇三次料總體生物學(xué)效率約為56%,對(duì)比發(fā)酵熟料或熟料袋栽技術(shù)(以棉籽殼為主料,生物學(xué)效率可達(dá)100%),其生物學(xué)效率明顯偏低,其原因可能是以干麥草作為主料,出菇后期營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)不足。

    表2 各處理平菇三次料產(chǎn)量與生物學(xué)效率

    除處理⑦外,其他處理均有出菇,表明播種時(shí)采用合適的菌種,平菇三次發(fā)酵技術(shù)可支持平菇生產(chǎn)。

    處理⑦三次發(fā)酵時(shí)可正常發(fā)菌,出料菌絲拉斷后亦可以正常恢復(fù),但遲遲未扭結(jié)出菇,之后菌絲開始衰敗,這可能與其三次料的碳氮比過低和pH過低有關(guān),影響了其向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)換。

    3 小結(jié)與討論

    試驗(yàn)表明平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵的可行性,且選用合適的菌種時(shí),平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵技術(shù)支持平菇周年生產(chǎn)。三次發(fā)酵取代袋栽接種后的發(fā)菌過程,提高生產(chǎn)效率及培養(yǎng)料的穩(wěn)定性。主要體現(xiàn)在:第一,節(jié)省袋栽培養(yǎng)料高溫滅菌后的冷卻時(shí)間;第二,先發(fā)菌再裝袋,避免重復(fù)開口與封口的麻煩;第三,在發(fā)酵隧道或者設(shè)備內(nèi)菌絲萌發(fā)及生長(zhǎng)更容易同步;第四,發(fā)菌料裝袋的過程會(huì)將菌絲拉斷,菌絲恢復(fù)后更加健壯,有利于出菇產(chǎn)量提高。

    試驗(yàn)部分培養(yǎng)料為雙孢蘑菇生產(chǎn)用培養(yǎng)料,并不能充分滿足平菇的營(yíng)養(yǎng)需求,后續(xù)將進(jìn)行配方試驗(yàn),同時(shí),同步篩選更適合三次發(fā)酵的平菇菌種,優(yōu)化發(fā)酵過程及栽培技術(shù),提高平菇的產(chǎn)量。

    平菇培養(yǎng)料三次發(fā)酵技術(shù)的開發(fā)與完善,將會(huì)使平菇生產(chǎn)更有利于機(jī)械化,節(jié)省大量的勞力;并且,發(fā)菌在隧道中完成,提高菇房的周轉(zhuǎn)利用率。此外,后續(xù)可以借鑒雙孢蘑菇打包料模式,形成一個(gè)規(guī)模較大的集中料場(chǎng),建立集中料場(chǎng)輻射多個(gè)菇廠的新型產(chǎn)業(yè)模式或布局,促進(jìn)平菇生產(chǎn)模式的創(chuàng)新。

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