改進(jìn)型胚胎冷凍存放方法對(duì)胚胎解凍的影響研究

謝麗松,岳林林,周椿昊（江西省贛州市婦幼保健院,江西 贛州 341000）

隨著近幾年體外受精胚胎移植技術(shù)的應(yīng)用比例不斷攀升，加之部分公眾對(duì)生育力保存的需求提高，胚胎冷凍已成為臨床輔助生殖的重要手段之一，其具有保存胚胎及提高累計(jì)妊娠率的作用，有利于降低多胎妊娠的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，并且對(duì)卵巢過度刺激綜合征的發(fā)生有一定的預(yù)防效果[1-2]。程序化冷凍和玻璃化冷凍是臨床常用的胚胎冷凍技術(shù)，但既往研究[3-5]中證明程序化冷凍存在操作時(shí)間長(zhǎng)、設(shè)備要求高等不足，故在臨床使用中有著較大的局限性。而玻璃化冷凍具有操作時(shí)間短、胚胎損傷小等優(yōu)勢(shì)，故現(xiàn)在均采用玻璃化冷凍方法[6]。我科始建于2003年，隨著冷凍胚胎不斷增多，胚胎冷凍管理工作也成為了實(shí)驗(yàn)室工作的重要組成部分。如何高效優(yōu)質(zhì)地進(jìn)行胚胎冷凍管理尤為重要，最開始我科在保存冷凍胚胎時(shí)使用鋁制支架，上下塑料套桿，一個(gè)支架內(nèi)存放3-4支載桿，存取過程均需要將支架提取到液氮罐以外的液氮盒內(nèi)查找需要的載桿，易受外界影響，并且容易影響同支架的其他載桿。自2016年6月起，我科將支架改良為塑料透明側(cè)開口支架，一個(gè)支架內(nèi)存放一支載桿，存取過程只看支架頭部編號(hào)即可準(zhǔn)確無(wú)誤存取，不影響其他的載桿，也不易出現(xiàn)錯(cuò)拿或勾掛其他支架的現(xiàn)象。

1 資料和方法

1.1 一般資料 納入贛州市婦幼保健院生殖與遺傳科2014年6月-2020年6月收治的600例冷凍胚胎進(jìn)行解凍移植患者的臨床資料展開回顧性分析，所有患者均行玻璃化冷凍，依據(jù)冷凍胚胎后儲(chǔ)存方法差異分為改進(jìn)型支架組（n=300）和傳統(tǒng)型支架組（n=300），具體情況見表1。兩組一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后執(zhí)行本次研究。

表1 兩組一般資料比較()

表1 兩組一般資料比較()

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1.2 選例標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者年齡處于20-40歲之間；②以往具備規(guī)律月經(jīng)周期；③入院胚胎移植前血常規(guī)及肝腎檢查無(wú)異常；④患者對(duì)本次研究的方法、過程及目的均知情且愿意配合。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往存在盆腔臟器手術(shù)史或近期服用過糖皮質(zhì)激素藥物等；②合并嚴(yán)重心、肝、腎功能不全或先天性子宮畸形者；③臨床資料缺失者。

1.3 方法 ①兩組均采用玻璃化冷凍，試劑盒為Vitrolife玻璃化冷凍試劑盒，2、3液含有冷凍保護(hù)劑（由丙二醇、乙二醇、聚蔗糖組成）。將胚胎使用冷凍載桿裝載，裝入冷凍支架內(nèi)，之后放入液氮罐中凍存。②兩組均采用玻璃化解凍，試劑盒為Vitrolife玻璃化解凍試劑盒，1、2液含有蔗糖冷凍保護(hù)劑。③改進(jìn)型支架組使用側(cè)邊開口的塑料支架，解凍時(shí)在唯一編號(hào)液氮罐提籃的分區(qū)內(nèi)即可準(zhǔn)確挑選出帶有唯一顏色和字母編號(hào)的塑料支架（見圖1）。④傳統(tǒng)型支架組采用鋁支架加塑料套管（見圖2），在挑選胚胎時(shí)需要將鋁支架提出液氮罐外進(jìn)行二次挑選，選完將剩余載桿及支架（見圖3）放回液氮罐內(nèi)。

圖1

圖2

圖3

1.4 觀察指標(biāo) ①記錄并比較兩組胚胎存活情況即胚胎解凍存活率。②統(tǒng)計(jì)兩組妊娠情況，包括移植周期妊娠率、胚胎種植率、胚胎著床率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率。③比較兩組液氮罐空間利用率、胚胎拿取時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，呈正態(tài)分布以表示，組間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組胚胎解凍存活情況比較 與傳統(tǒng)型支架組的胚胎解凍存活率93.0%（279/300）比較，改進(jìn)型支架組的胚胎解凍存活率96.67%（290/300）更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 兩組妊娠情況比較 兩組胚胎種植率、胚胎著床率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與傳統(tǒng)型支架組比較，改進(jìn)型支架組移植周期妊娠率顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組妊娠情況比較[n(%)]

2.3 兩組液氮罐空間利用率及胚胎拿取時(shí)間比較 與傳統(tǒng)型支架組比較，改進(jìn)型支架組每個(gè)吊桶分三區(qū)，每區(qū)可放50根，每個(gè)吊桶可盛放150根載桿。而傳統(tǒng)型鋁制支架吊桶不分區(qū)，可放20根鋁桿。以每桿3-4根載桿計(jì)，約放80根載桿；而且相較于傳統(tǒng)型支架需要全部解凍完支架內(nèi)胚胎才能拿出支架，改進(jìn)型支架一個(gè)載桿一個(gè)支架用完則提籃內(nèi)空間空余可立即填補(bǔ)，大大地提高了液氮罐的空間利用率。傳統(tǒng)型支架拿取時(shí)一個(gè)支架對(duì)應(yīng)多桿胚胎，必須同時(shí)找對(duì)支架與載桿，且找到之后還需將剩余胚胎放回原位，而改進(jìn)型則一個(gè)支架對(duì)應(yīng)一桿胚胎，找出后也不需要再放回液氮罐，大大節(jié)省了胚胎的拿取時(shí)間。本次研究中，改進(jìn)型支架組的胚胎拿取時(shí)間為（7.38±1.69）min，明顯少于傳統(tǒng)型支架組的（11.79±1.72）min，組間差異顯著（P＜0.05）。

3 討論

隨著醫(yī)學(xué)及科技的日益進(jìn)步，生殖技術(shù)的發(fā)展也得到明顯提高，進(jìn)而使得試管嬰兒也逐漸普遍起來(lái)，故將剩余的胚胎進(jìn)行冷凍及儲(chǔ)藏也是臨床中重要的工作之一[7-8]。傳統(tǒng)的冷凍胚胎儲(chǔ)存方法需要借助鋁制支架及塑料套管進(jìn)行存放，且其操作過程較為復(fù)雜，挑選鋁制支架時(shí)容易將旁邊的支架一同帶出，給工作帶來(lái)很大不便，特別是取出胚胎時(shí)需將整個(gè)支架連同其他的載桿拿出液氮罐外進(jìn)行二次挑選，在實(shí)施該操作時(shí)可能存在一定的安全隱患，因此臨床上還需尋找一種更加方便且精準(zhǔn)的胚胎冷凍儲(chǔ)存方法[9]。基于此，本次研究探討改進(jìn)型胚胎冷凍存放方法對(duì)胚胎解凍的影響，以期為胚胎解凍移植的實(shí)施提供可靠的臨床依據(jù)。

本次研究顯示：與傳統(tǒng)型支架組比較，改進(jìn)型支架組胚胎解凍存活率顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩組胚胎種植率、胚胎著床率、流產(chǎn)率、活產(chǎn)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與傳統(tǒng)型支架組比較，改進(jìn)型支架組移植周期妊娠率顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與傳統(tǒng)型支架組比較，改進(jìn)型支架組液氮罐空間利用率增高，胚胎拿取時(shí)間顯著縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。改進(jìn)型胚胎冷凍存放方法采用側(cè)邊開口的塑料支架，一個(gè)支架存貯一個(gè)冷凍載桿，在解凍操作中精準(zhǔn)定位，方便查找及提取，避免操作人員操作過程中帶出其他人的胚胎，提高了操作的安全性[10-11]。與改進(jìn)型支架組比較，傳統(tǒng)型支架會(huì)占用較大的存儲(chǔ)空間，需要將同一個(gè)儲(chǔ)存單元內(nèi)所有胚胎解凍完才能提出支架，以備再次使用此空間[12-14]。改進(jìn)型支架組一支架一載桿，用完一桿空間即可填補(bǔ)空余，液氮罐空間利用率顯著增高，精準(zhǔn)定位讓胚胎拿取時(shí)間顯著縮短，表明改進(jìn)型胚胎冷凍存放方法用于胚胎解凍患者可簡(jiǎn)化操作步驟，提高液氮罐空間利用率，節(jié)約了液氮的用量，節(jié)省了冷凍室的面積，同時(shí)也節(jié)省了工作人員查找胚胎的時(shí)間，有效地提高了工作效率，并使得實(shí)際工作變得安全、方便[15-16]。

綜上所述，改進(jìn)型胚胎冷凍存放方法用于胚胎解凍患者不會(huì)對(duì)圍產(chǎn)結(jié)局造成影響，具有較高的臨床價(jià)值。但本研究為回顧性分析，仍存在一定不足之處，如樣本選擇存在時(shí)間限制，且研究樣本均來(lái)源于同一地區(qū)，可能會(huì)造成結(jié)果存在一定偏倚，使研究結(jié)論的臨床推廣受到一定限制，因此后續(xù)仍需展開多中心研究，以繼續(xù)為胚胎移植患者冷凍載桿的選擇提供參考。