抗-M 抗體對血型鑒定及臨床輸血的影響

李麗群

1927 年MNS 血型系統被發(fā)現, 其為被識別的第二個血型系統, 第一個是ABO 血型系統, 1933 年Johnson和Wolf 發(fā)現了抗-M 抗體, 其為自然產生, 相對常見,大部分為免疫球蛋白M(IgM) 抗體, 37℃下不活躍, 臨床忽略了其在輸血實踐中的存在, 于室溫下大部分抗-M 抗體會有鹽水凝集情況發(fā)生, 屬冷反應性的鹽水凝集素, 偶爾可在抗球蛋白階段或37℃有反應發(fā)生,可導致遲發(fā)性的溶血性輸血反應［1,2］。本文2021 年1 月～2022 年12 月發(fā)現由抗-M 抗體引發(fā)的18 例正反定型不符情況, 經對此類抗體檢測結果展開分析, 探究在臨床治療中抗-M 抗體的影響, 如何及時發(fā)現, 讓輸血安全提高, 進而對O 型紅細胞加入后的影響展開分析, 詳細報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院輸血科于2021 年1 月～2022 年12 月收集首次血型鑒定的8500 例患者, 女性居多, 年齡4～92 歲, 中位年齡58 歲, 大部分源自胃腸外科, 部分源自其他科室, 上述標本上清清亮, 未見溶血。

1.2 方法

1.2.1 血型鑒定與抗體鑒定 留取EDTA 抗凝血2 ml,使用全自動微柱凝膠卡法、手工試管法對ABO、RhD血型進行鑒定, 按照說明書或者臨床規(guī)定的相關操作方法進行鑒定。進行直接抗人球蛋白試驗(DAT)和間接抗球蛋白試驗(IAT), 包括：①使用試管法進行DAT, 將1 滴5%三洗紅細胞待檢標與1 滴免疫球蛋白G(IgG)、C3d 抗人球蛋白試劑相互混合, 進行離心后, 結果呈陰性則結束實驗, 呈陽性為進行抗-IgG、抗-C3d；②凝聚胺法：將血清分別與3 份抗體細胞、5%三洗紅細胞進行混合, 比例為2∶1, 在分別加入0.6 ml低離子液后混勻, 再將2 滴凝聚胺加入進行離心, 觀察凝集情況, 棄去上清后加入2 滴解凝聚, 輕搖后觀察1 min 內的凝集情況［3,4］。

1.2.2 不規(guī)則抗體影響實驗 ①熱放散實驗：室溫四洗后的1 ml DAT 陽性標本壓積紅細胞與1 ml 生理鹽水在水浴箱中放散, 溫度設置為56℃, 時間為10 min,離心后取出放散液進行IAT。②酸放散實驗：按照試劑說明書操作對放散液進行DAT。③吸收實驗：使用抗-M 試劑檢測陽性的O 型壓積紅細胞與標本血清混合, 比例為1∶1, 冰箱溫度設置為4℃, 吸收時間為1 h,離心后取上清, 對其進行ABO 反定型［5］。

1.2.3 配血方法 將患者的血清、5%三洗紅細胞和獻血者的血清、5%三洗紅細胞進行交叉混合(血清：紅細胞=2∶1), 使用凝聚胺法、鹽水法、手工卡式法,具體操作如上［6］。

1.2.4 抗-M 抗體效價測定 留取2～3 ml 抗凝靜脈血進行離心, 分離出血清, 使用鹽水法, 用生理鹽水倍比稀釋血清100 μl, 再加入50 μl 5% O 型健康人的M 抗原陽性紅細胞懸液, 在4、24、37 ℃環(huán)境分別放置15 min, 離心觀察并記錄紅細胞凝集情況［7］。

2 結果

2.1 血型鑒定結果 血型鑒定時借助微柱凝膠法、全自動血型儀, 結果顯示8500 份標本中, 正反定型相符8432 份, 正反定型不符68 份。僅抽取了18 份典型標本結果展開分析, 見表1。經開展反定型試管法結果可見, A、B、O 細胞管均呈陽性, 而對照管結果呈陰性。見表2。經處理后, 標本血清接受直接抗人球實驗以及抗體篩查實驗, 其對應實驗結果見表3。

表1 18 份典型標本初檢結果分析

表2 18 份典型標本血型鑒定結果

表3 18 份典型標本血型結果分析

2.2 標本交叉配血結果 在抽取的18 份典型標本中,去除標本中的2、3、6、8、9、11、12、13、15、17、18 號, 剩余7 份抗-M 抗體標本的患者行備血申請, 分別與相應血型的供血者開展配血試驗, 利用鹽水法, 篩出陰性供血者, 在借助凝聚胺配血試驗, 無凝集者提示配血成功。

2.3 實驗室結果分析 在抽取的18 份典型標本中,3 例輸血患者監(jiān)測尿常規(guī), 結果顯示膽紅素、尿膽原均呈陰性, 未見輸血不良反應。評價療效顯示輸注有效。見表4。

表4 18 份典型標本實驗室結果分析

3 討論

MNS 血型系統涵蓋了諸多紅細胞, 而一個紅細胞可涵蓋約80 萬M 抗原, 其密度十分充足, 乃病毒、細菌補體的受體?？?M 抗體中大多數為IgM 抗體, 無需補體激活, 剩余少數為IgG 型抗體血型, 而同種免疫為之誘發(fā)因素, 可引發(fā)血管外溶血反應, 可在溫度嚴格控制下檢測上述兩種類型的抗體, 以此實施鑒別［8］。本文中對抗-M 抗體產生人群展開了分析, 結果發(fā)現消化道出血、懷孕中和備孕、腫瘤患者、心臟手術患者4 類人群會有抗-M 抗體產生。而經認真調查顯示, 納入病例無輸血史, 而細菌感染史大都存在。抗-M 抗體和冷凝集素(CA)致病機制十分類似, 某些誘導因素下,低溫程度下可展現特殊效用, 其該作用十分關鍵, 而其致病性多由熱振幅(TA)決定, 也就是和抗原作用最高溫度(通常為22 ～ 30℃), 與效價無關［9］?？?M 抗體熱振幅越高, 會增加誘導核心體溫較低患者體內溶血,尤其是在各類體溫限制的手術中, 如心臟、神經手術等,其可發(fā)揮關鍵效用。因而, 術前此類患者應聯合會診,輸血科參與會診, 擬定手術策略, 確保其個體化, 避免將冷抗體激活, 致災難性事件發(fā)生, 如溶血等。提示了實際臨床檢測期間, 低溫環(huán)境下檢出抗-M 抗體的幾率相對更高［10］。

不同于CA 的是, 還有IgG 型抗-M 抗體存在,且其有IgG 同種抗體一般特性存在, 本文結果可見,18 份典型標本中, IgG 型抗-M 抗體存在11 份, 約占65.0%, 大部分為免疫性病癥、惡性腫瘤患者, 然在正常人群中其大部分為天然抗體, 說明一旦在免疫性病癥、惡性腫瘤患者體內檢測出抗-M 抗體, 在低溫、輸血治療執(zhí)行期間, 應格外重視配合型輸血、溫度等因素,若必要, 可取MN 血型同型血輸注［11］。

胎兒、新生兒HDFN 中抗-M 抗體可對紅系前體細胞產生抑制, 以致新生兒有紅細胞發(fā)育不全等情況出現, 有關資料顯示［12］, 抗-M 抗體可引發(fā)新生兒溶血病(HDN), 且無HDN 典型特征, DAT 結果呈現陰性為其具體表現, 處于新生兒期則表現為長期貧血。由于抗-M 抗體可將紅系祖細胞破壞, 極易出現孕早期流產等情況, 本文中就發(fā)現1 例妊娠中期孕婦, 由于該孕婦并未在本院繼續(xù)檢查, 因而未能繼續(xù)追蹤其結果, 有關文獻指出, IgG 型抗-M 抗體存在于血清中可引發(fā)新生兒嚴重溶血、多次死胎, 檢測直抗結果為陰性, 在給予M抗原陰性懸浮紅細胞(1單位)后, 膽紅素數值降低,Hb 升高, 二者程度均較為明顯, 病癥好轉, 提示抗-M抗體致HDFN 直抗結果最終可能為陰性, 誤診、漏診情況極易發(fā)生［13］。

本文所選微柱凝膠卡屬ABO-CDE 卡, 無O 細胞孔, A、B 細胞二者均為反定型孔。本文納入8500 份標本, 經檢測可見, 正反定型不符68 份, 從中抽取的18 份典型標本中, O 型標本2 份, 這2 份標本微住凝膠卡數值顯示, 其正反定型不符合, 經檢測有含鹽水類的不規(guī)則抗體存在, 由于常規(guī)檢測項目中并無反定型檢測O 細胞的項目, 極易出現漏診情況。人類遺傳學曾記載, 人群中P1 抗原占比約為34.28%, 而M 抗原約為70.36%, Le(a+)占比約為21.0%。需注意的是抗-Leb抗體、天然抗-M 抗體均可導致溶血性輸血反應, 獻血者血清內若含有此抗體, 則不適宜獻血［14］。

所以, 在大批量檢測血型時, 將O 細胞對照組加入能顯著升高鹽水類中不規(guī)則抗體檢出率。而實踐中,抗-M 抗體在不同條件下表現不同, 有一定差異性存在, 不同患者應給予不同管理, 明確抗-M 抗體臨床價值, 需要開展熱振幅檢測、測定抗體類別、抗體滴定等［15］。因而, 若需開展相關操作, 如移植評估等, 供體應行小規(guī)模檢測, 含抗體篩查、交叉匹配, 確保了解供體抗體的水平, 移植成功率提高。本文僅有3 例患者接受了配合型對輸注, 并取得了確切療效, 無輸血不良反應。因而, 檢測結果若顯示輸血者有潛在意義的抗體, 即使未檢測到此類抗體, 紅細胞輸注時, 還需關注確認無對應抗原, 以免再次發(fā)生免疫應答。所以, 結合抗-M 抗體自身不同特性, 事前掌握自身有無抗-M抗體, 對于疾病診斷、治療手段選擇、優(yōu)選獻血者均可發(fā)揮較好的參照效果。