淫羊藿苷通過NO-cGMP-PKG減輕炎癥并改善射血分?jǐn)?shù)保留型心衰大鼠的心室重塑

陳麗珍，楊雷，許錦文

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203；2. 浦江縣中醫(yī)院內(nèi)二科，浙江 浦江 322200

射血分?jǐn)?shù)保留型心衰（HFPEF）已成為心力衰竭的主要形式，隨著人口的老齡化以及肥胖、糖尿病和高血壓患病率的增加，其患病率正在迅速增長[1]。心室重塑和舒張功能障礙是HFPEF 的標(biāo)志，其特征是左心室肥大，硬度升高和充盈壓增加，微血管內(nèi)皮炎癥也是影響HFPEF 發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵機(jī)制。HFPEF 患者的心功能和生活質(zhì)量嚴(yán)重受損，而且目前缺乏可以有效降低其發(fā)病率或死亡率的治療方法[2]。淫羊藿苷（ICA）是中藥淫羊藿的主要活性成分，具有抗炎、抗氧化、心臟保護(hù)等多種藥理作用[3]。ICA 通過抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的炎癥、細(xì)胞凋亡，顯著改善異丙腎上腺素誘導(dǎo)Wistar 大鼠的心力衰竭[4]。ICA 通過Apelin/Sirt3 途徑預(yù)防線粒體功能障礙，從而減弱糖尿病心肌病的發(fā)展[5]。ICA 通過調(diào)節(jié)CD147/MMP-9 通路影響心肌梗死后的心臟重塑[6]。 研究表明， 一氧化氮（NO）- 環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）-蛋白激酶G（PKG）是心臟功能的重要調(diào)節(jié)通路，HFPEF 患者的心肌勻漿中cGMP 含量和PKG生物活性顯著降低，HFPEF 大鼠中檢測(cè)到NOcGMP-PKG 途徑的缺乏，抑制該信號(hào)通路可參與HFPEF 的進(jìn)展[7-8]。NO-cGMP-PKG 通路下調(diào)可能歸因于冠狀動(dòng)脈微血管內(nèi)皮炎癥激活和亞硝化/氧化應(yīng)激引起的心肌NO 生物利用度降低[9]。但I(xiàn)CA 通過調(diào)節(jié)NO-cGMP-PKG 信號(hào)通路對(duì)HFPEF 大鼠炎癥和心室重塑的影響尚不清楚。因此，本研究探討ICA 對(duì)HFPEF 大鼠炎癥和心室重塑的影響及其作用的分子機(jī)制，以期為臨床治療HFPEF 提供一定的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF 級(jí)雄性SD 大鼠購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可編號(hào)：SCXK（滬）2020-0004，8～10 周齡，體質(zhì)量200～210 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，飼養(yǎng)溫度22 ℃，濕度55%～60%，12 h光暗循環(huán)。不禁水食。本研究經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（PZSHTCM210618001）。

1.2 主要試劑與儀器淫羊藿苷（J36861），上海金穗生物科技有限公司；醋酸脫氧皮質(zhì)酮（DOCA，貨號(hào)：30856），上海貝萬塔生物科技有限公司；亞硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME，貨號(hào)：BLL-Bytd0133），上海佰利萊生物科技有限公司；HE 染色試劑盒（貨號(hào)：G1120-100）、活性氧（ROS）試劑盒（貨號(hào)：CA1410），北京Solarbio 公司；蛋白提取試劑盒（貨號(hào)：KALANG），上?？道噬锟萍加邢薰?；IL-6、IL-1β（E-EL-R0896c、E-EL-R0012c）、TNF-α（貨號(hào)：E-EL-R2856c）、cGMP（E-EL-0083c）ELISA 試劑盒，武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；NO 測(cè)定試劑盒（A013-2-1），南京建成；兔源一抗PKG（ab90502）、eNOS（ab300071）、iNOS（ab178945）、sGCα（ab154841）、GAPDH（ab9485）抗體以及辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔二抗（ab6721），美國Abcam公司；多功能全自動(dòng)酶標(biāo)儀（HBS-ScanX），南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；光學(xué)顯微鏡（CX31），日本奧林巴斯公司；小動(dòng)物超聲系統(tǒng)（Vevo 3100LT），加拿大FUJIFILM 公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物建模、分組和給藥麻醉并固定大鼠后，手術(shù)縫合線結(jié)扎整個(gè)腎動(dòng)靜脈及輸尿管，剪去腎臟，給1%鹽水飲用、同時(shí)皮下注射DOCA（25 mg/kg，4 d/次），自由飲食。4 周后檢測(cè)大鼠心功能，射血分?jǐn)?shù)（EF）大于50%且左室舒張期充盈速度比值（E/A）降低，則表明HFPEF 大鼠模型構(gòu)建成功[10]。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為Model 組、ICA 低、中、高劑量組、抑制劑組，隨機(jī)選取12 只未行手術(shù)的大鼠作為control 組，ICA 低、中、高劑量組大鼠灌胃1、5、10 mg/kg 的ICA[4]，抑制劑組大鼠灌胃10 mg/kg 的ICA 和0.5g/kg 的一氧化氮合酶（NOS）抑制劑-亞硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME）[11]，control 組和Model 組灌胃等量的生理鹽水，每天1 次，連續(xù)6 周。

1.3.2 大鼠心功能的檢測(cè)給藥結(jié)束后，麻醉大鼠，用小動(dòng)物超聲系統(tǒng)檢測(cè)大鼠左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室縮短分?jǐn)?shù)（LVFS）、左心室前/后壁厚度（LVAM/LVPW）、左心室舒張末期內(nèi)徑/收縮末期內(nèi)徑（LVEDD/LVESD）、二尖瓣舒張?jiān)缙?舒張晚期血流速度最大峰值（E/A）。

1.3.3 血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，暴露左頸總動(dòng)脈并插入導(dǎo)管至左心室腔，記錄左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末期壓力（LVEDP）及左室壓力最大上升或下降速率（+dp/dt max、-dp/dt max）。

1.3.4 HE 染色每組處死6 只大鼠，收集心臟，部分心肌組織在多聚甲醛（4%）固定過夜后，蔗糖梯度脫水，石蠟包埋后切片（3 μm）。切片經(jīng)二甲苯、乙醇脫蠟和水化，隨后進(jìn)行HE 染色，最后在顯微鏡下觀察染色結(jié)果。

1.3.5 NO、ROS、cGMP、IL-6、IL-1β、TNF-α水平檢測(cè)將大鼠心肌組織制成勻漿后，離心后取上清，根據(jù)試劑盒檢測(cè)大鼠心肌組織中NO、ROS、cGMP、IL-6、IL-1β、TNF-α 含量。

1.3.6 免疫熒光染色大鼠心肌組織經(jīng)脫水、包埋切片、脫蠟、山羊血清封閉、PBS 漂洗后加入CD31一抗抗體，4 ℃避光孵育過夜，加入生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG（H+L）二抗室溫下避光孵育1 h，經(jīng)PBS 洗滌、DAPI 避光復(fù)染5 min、封片，熒光顯微鏡觀察并拍攝照片。Image J 軟件計(jì)算CD31 平均熒光強(qiáng)度。

1.3.7 PKG、eNOS、iNOS、sGCα 蛋白表達(dá)檢測(cè)提取大鼠心肌組織蛋白，定量后進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜后室溫封閉2 h，再分別加入PKG（1∶1 000）、eNOS（1∶2 000）、iNOS（1∶2 000）、sGCα（1∶1 000）、GAPDH（1∶1 000）一抗4 ℃孵育過夜，加入二抗（1∶2 000）室溫孵育90 min。Image J 軟件分析計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Graphpad Prism 9.0 軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以（±s）表示。多組間的比較用單因素方差分析，SNK-q檢驗(yàn)用于組間的比較。組內(nèi)比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心功能比較見圖1、表1。與control組比較，Model 組大鼠LVEF、LVFS、E/A 降低，LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD 升高（P＜0.05）；與Model 組比較，ICA 低、中、高劑量組大鼠LVEF、 LVFS、 E/A 升 高 ， LVAM、 LVPW、LVEDD、LVESD 降低，其中ICA 高劑量組變化更顯著（P＜0.05）；與ICA 高劑量組比較，抑制劑組大鼠LVEF、 LVFS、 E/A 降 低 ， LVAM、 LVPW、LVEDD、LVESD 升高（P＜0.05）。

表1 各組大鼠心功能比較（±s）

表1 各組大鼠心功能比較（±s）

注：①與control 組比較，P＜0.05；②與Model 組比較，P＜0.05；③與ICA 低劑量組比較，P＜0.05；④與ICA 中劑量組比較，P＜0.05；⑤與ICA 高劑量組比較，P＜0.05

組 別control 組Model 組ICA 低劑量組ICA 中劑量組ICA 高劑量組抑制劑組鼠數(shù)666666 LVEF（%）80.34±5.17 54.68±3.21①60.24±4.13②67.89±4.62②③74.38±4.87②③④59.25±3.53⑤LVFS（%）36.84±2.87 17.14±1.05①21.13±1.37②26.87±1.25②③33.48±1.57②③④20.14±1.16⑤LVAM（mm）3.05±0.13 3.94±0.16①3.65±0.14②3.34±0.13②③3.10±0.11②③④3.82±0.15⑤LVPW（mm）3.12±0.21 4.17±0.23①3.85±0.19②3.74±0.20②③3.21±0.18②③④3.82±0.19⑤LVEDD（mm）5.08±0.65 8.89±0.73①7.82±0.64②6.74±0.57②③5.62±0.41②③④7.73±0.65⑤LVESD（mm）3.12±0.21 7.83±0.56①6.54±0.43②5.32±0.37②③4.10±0.28②③④6.47±0.46⑤E/A 1.68±0.12 1.03±0.09①1.26±0.11②1.54±0.13②③1.67±0.10②③④1.14±0.09⑤

2.2 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較見表2。與control 組比較，Model 組大鼠LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max 降低，LVEDP 升高（P＜0.05）；與Model組比較，ICA 低、中、高劑量組大鼠LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max 升高，LVEDP 降低，其中ICA 高劑量組變化更顯著（P＜0.05）；與ICA 高劑量組比較，抑制劑組大鼠LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max 降低，LVEDP 升高（P＜0.05）。

表2 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表2 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注：①與control 組比較，P＜0.05；②與Model 組比較，P＜0.05；③與ICA 低劑量組比較，P＜0.05；④與ICA 中劑量組比較，P＜0.05；⑤與ICA 高劑量組比較，P＜0.05 1 mm Hg≈0.133 kPa

組 別control 組Model 組ICA 低劑量組ICA 中劑量組ICA 高劑量組抑制劑組鼠數(shù)666666 LVSP（mm Hg）133.89±10.74 81.52±6.19①90.38±7.42②102.63±7.85②③117.49±8.92②③④93.68±8.15⑤LVEDP（mm Hg）6.73±1.08 19.24±1.96①15.87±1.43②11.49±1.25②③7.38±1.04②③④16.28±1.72⑤+dp/dt max（mm Hg/s）4 325.61±187.96 2 715.48±154.62①3 128.93±162.48②3 652.17±175.63②③4 219.87±183.52②③④3 259.84±170.32⑤-dp/dt max（mm Hg/s）4 251.27±196.38 2 541.39±175.42①2 997.86±182.15②3 526.94±186.73②③4 138.72±194.29②③④3 107.58±179.46⑤

2.3 各組大鼠心肌組織HE 染色圖見圖2。control組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞排列緊密有序、細(xì)胞核清晰；Model 組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重，細(xì)胞排列松散混亂、充血明顯、有炎性細(xì)胞浸潤現(xiàn)象；ICA 低、中、高劑量組與Model 組比較，大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)受損減輕，細(xì)胞排列較有序、充血及炎性細(xì)胞浸潤相對(duì)減輕，ICA 高劑量大鼠心肌組織病理改變最為明顯；抑制劑組與ICA 高劑量組比較，大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)受損加重、細(xì)胞排列相對(duì)松散、充血及炎性細(xì)胞浸潤加重。

圖2 各組大鼠心肌組織HE 染色圖（×200）

2.4 各組大鼠心肌組織中NO、cGMP、ROS 水平比較見表3。與control 組比較，Model 組大鼠心肌組織中NO、cGMP 水平降低，ROS 水平升高（P＜0.05）；與Model 組比較，ICA 低、中、高劑量組大鼠心肌組織中NO、cGMP 水平升高，ROS 水平降低，其中ICA 高劑量組變化更顯著（P＜0.05）；與ICA 高劑量組比較，抑制劑組大鼠心肌組織中NO、cGMP 水平降低，ROS 水平升高（P＜0.05）。

表3 各組大鼠心肌組織中NO、cGMP、ROS 水平比較（±s）

表3 各組大鼠心肌組織中NO、cGMP、ROS 水平比較（±s）

注：①與control 組比較，P＜0.05；②與Model 組比較，P＜0.05；③與ICA 低劑量組比較，P＜0.05；④與ICA 中劑量組比較，P＜0.05；⑤與ICA 高劑量組比較，P＜0.05

組 別control 組Model 組ICA 低劑量組ICA 中劑量組ICA 高劑量組抑制劑組鼠數(shù)666666 NO（μmol/mL）39.68±2.05 12.37±1.13①17.46±1.24②23.39±1.53②③32.51±1.85②③④18.37±1.46⑤cGMP（pmol/mL）45.68±3.27 19.46±1.48①25.73±1.63②31.52±2.41②③38.29±3.16②③④27.15±1.74⑤ROS（ng/mL）45.13±2.57 87.45±5.39①76.61±4.65②63.27±3.79②③49.85±3.24②③④75.89±4.68⑤

2.5 各組大鼠心肌組織中IL-6、IL-1β、TNF-α 水平比較見表4。與control 組比較，Model 組大鼠心肌組織中IL-6、IL-1β、TNF-α 水平升高（P＜0.05）；與Model 組比較，ICA 低、中、高劑量組大鼠心肌組織中IL-6、IL-1β、TNF-α 水平降低，其中ICA 高劑量組變化更顯著（P＜0.05）；與ICA 高劑量組比較，抑制劑組大鼠心肌組織中IL-6、IL-1β、TNF-α 水平升高（P＜0.05）。

表4 各組大鼠心肌組織中IL-6、IL-1β、TNF-α 水平比較（±s）

表4 各組大鼠心肌組織中IL-6、IL-1β、TNF-α 水平比較（±s）

注：①與control 組比較，P＜0.05；②與Model 組比較，P＜0.05；③與ICA 低劑量組比較，P＜0.05；④與ICA 中劑量組比較，P＜0.05；⑤與ICA 高劑量組比較，P＜0.05

組 別control 組Model 組ICA 低劑量組ICA 中劑量組ICA 高劑量組抑制劑組鼠數(shù)666666 IL-6（pg/mL）70.58±8.41 348.92±17.86①281.78±15.39②212.29±13.76②③113.62±11.94②③④293.15±16.24⑤IL-1β（pg/mL）101.52±12.14 486.73±22.38①389.65±21.46②302.47±19.83②③160.49±17.98②③④375.48±20.95⑤TNF-α（pg/mL）51.29±6.38 292.82±16.21①230.74±13.48②154.81±14.07②③72.54±9.26②③④218.42±12.73⑤

2.6 各組大鼠CD31 表達(dá)比較見圖3、表5。與control 組比較，Model 組大鼠心肌組織中CD31 表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與Model 組比較，ICA 低、中、高劑量組大鼠心肌組織中CD31 表達(dá)水平升高，其中ICA 高劑量組變化更顯著（P＜0.05）；與ICA 高劑量組比較，抑制劑組大鼠心肌組織中CD31 表達(dá)水平降低（P＜0.05）。

表5 各組大鼠CD31 表達(dá)比較（±s）

表5 各組大鼠CD31 表達(dá)比較（±s）

注：①與control 組比較，P＜0.05；②與Model 組比較，P＜0.05；③與ICA 低劑量組比較，P＜0.05；④與ICA 中劑量組比較，P＜0.05；⑤與ICA 高劑量組比較，P＜0.05

組 別control 組Model 組ICA 低劑量組ICA 中劑量組ICA 高劑量組抑制劑組鼠數(shù)666666 CD31（平均熒光強(qiáng)度）21.48±1.67 3.25±0.68①7.83±0.92②12.96±1.28②19.21±1.57②③④5.23±0.64⑤

圖3 各組大鼠免疫熒光檢測(cè)CD31 的表達(dá)

2.7 各組大鼠心肌組織中PKG、eNOS、iNOS、sGCα 蛋白表達(dá)比較見圖4、表6。與control 組比較，Model 組大鼠心肌組織中PKG、eNOS、sGCα 蛋白表達(dá)水平降低，iNOS 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與Model 組比較，ICA 低、中、高劑量組大鼠心肌組織中PKG、eNOS、sGCα 蛋白表達(dá)水平升高，iNOS 蛋白表達(dá)水平降低，其中ICA 高劑量組變化更顯著（P＜0.05）；與ICA 高劑量組比較，抑制劑組大鼠心肌組織中PKG、eNOS、sGCα 蛋白表達(dá)水平降低，iNOS 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。

表6 各組大鼠心肌組織中PKG、eNOS、iNOS、sGCα 蛋白表達(dá)比較（±s）

表6 各組大鼠心肌組織中PKG、eNOS、iNOS、sGCα 蛋白表達(dá)比較（±s）

注：①與control 組比較，P＜0.05；②與Model 組比較，P＜0.05；③與ICA 低劑量組比較，P＜0.05；④與ICA 中劑量組比較，P＜0.05；⑤與ICA 高劑量組比較，P＜0.05

組 別control 組Model 組ICA 低劑量組ICA 中劑量組ICA 高劑量組抑制劑組鼠數(shù)666666 PKG 1.83±0.19 0.35±0.04①0.68±0.07②1.21±0.13②③1.65±0.15②③④0.72±0.09⑤eNOS 1.49±0.11 0.32±0.05①0.67±0.08②1.08±0.10②③1.35±0.12②③④0.70±0.08⑤iNOS 0.24±0.03 1.78±0.14①1.30±0.11②0.84±0.09②③0.35±0.04②③④1.16±0.10⑤sGCα 1.67±0.18 0.29±0.03①0.60±0.07②0.94±0.08②③1.42±0.13②③④0.37±0.04⑤

圖4 Western blot 檢測(cè)PKG、eNOS、iNOS、sGCα 蛋白表達(dá)

3 討論

HFPEF 的特征是嚴(yán)重的左心室收縮和舒張僵硬、左心室充盈壓升高、動(dòng)脈順應(yīng)性降低、左心房高壓、肺靜脈瘀血和微血管功能障礙等[12]。內(nèi)皮炎癥、心室重塑與HFPEF 的發(fā)展密切相關(guān)，但潛在機(jī)制尚不清楚。

心室重塑是影響HFPEF 患者心臟功能和預(yù)后的重要病理生理機(jī)制。本研究采用皮下注射DOCA 建立HFPEF 大鼠模型并對(duì)其研究發(fā)現(xiàn)，Model 組大鼠LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP 升高，LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max降低，Model 組大鼠出現(xiàn)左心室肥厚、心室增大、心室舒張功能障礙，提示，HFPEF 大鼠模型構(gòu)建成功。近年來，安全有效的中藥成分逐漸進(jìn)入人們的視野，是治療HFPEF 的一個(gè)方向。ICA 具有良好的心臟保護(hù)作用。ICA 通過激活sirtuin-1/FOXO1 信號(hào)來保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺血/再灌注誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷[13]。研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的ICA 以劑量依賴性方式抑制大鼠的心臟重塑[6]。Song YH 等[14]研究發(fā)現(xiàn)，ICA通過調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax 軸和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9 的活性并減少心肌凋亡，顯著改善異丙腎上腺素誘導(dǎo)的充血性心力衰竭大鼠心功能障礙和心肌重塑。鹿角方能改善慢性心力衰竭患者的心臟功能，而ICA 是鹿角方的主要活性成分[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，ICA 能降低LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP，升高LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dt max，ICA 可顯著改善HFPEF 大鼠的心臟功能及心室重塑。

微血管內(nèi)皮炎癥可能是HFPEF 的關(guān)鍵分子機(jī)制。促炎細(xì)胞因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）已被證明可以刺激微血管內(nèi)皮細(xì)胞中ROS 的產(chǎn)生。ROS 的過量產(chǎn)生導(dǎo)致NO 生物利用度降低，從而降低鄰近心肌細(xì)胞中cGMP 以及PKG 的濃度[16]。NO 可由eNOS 催化L-精氨酸生成，通過血管外擴(kuò)散到血管平滑肌細(xì)胞中，可與其受體結(jié)合，促進(jìn)sGC-cGMP-PKG 通路的活性，引起血管平滑肌松弛和血管舒張。抑制NO-cGMP-PKG 通路可能會(huì)增加舒張期的被動(dòng)張力、心肌肥大和僵硬，導(dǎo)致舒張功能障礙，因此，NO-cGMP-PKG 通路介導(dǎo)微血管內(nèi)皮炎癥在HFPEF的治療中具有重要價(jià)值[17]。研究表明，達(dá)格列凈（鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2 抑制劑）可以通過抑制主動(dòng)脈交感神經(jīng)張力和調(diào)節(jié)NO-cGMP-PKG 通路來降低炎癥反應(yīng)，并逆轉(zhuǎn)HFPEF 期間的左心室重塑[18]。在心肌中，激活的NO-cGMP-PKG 通路通常具有抗肥大、抗纖維化和血管生成作用，從而抑制心臟重塑。iNOS 是內(nèi)皮功能障礙和血管炎癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，CD31 是血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的標(biāo)志物，HFPEF 小鼠心肌組織中iNOS 上調(diào)表達(dá)，CD31 下調(diào)表達(dá)[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，在HFPEF 大鼠心肌組織中，IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS 炎性因子與氧化應(yīng)激產(chǎn)物ROS 水平顯著升高，NO、cGMP 水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα 蛋白表達(dá)水平顯著降低，ICA 可降低IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS 炎癥因子水平，升高NO、cGMP 水平、CD31、PKG、eNOS、sGCα 表達(dá)，改善微血管內(nèi)皮炎癥。L-NAME 作為NOS 的抑制劑，會(huì)引起內(nèi)皮功能障礙及炎癥反應(yīng)[20]。在本研究中，L-NAME 抑制NO-cGMP-PKG 通路激活的同時(shí)，顯著逆轉(zhuǎn)ICA 對(duì)炎癥反應(yīng)的抑制作用，減輕對(duì)心臟功能及心室重塑的改善作用。提示，ICA 可能通過激活NO-cGMP-PKG 通路，減輕炎癥反應(yīng)、改善心室重塑。

綜上所述，ICA 可能通過激活NO-cGMP-PKG通路，減輕炎癥反應(yīng)、改善心室重塑。本研究為治療HFPEF 提供了理論和藥物參考。然而本研究尚存在不足之處，僅驗(yàn)證NO-cGMP-PKG 信號(hào)通路，未對(duì)其他靶點(diǎn)、途徑進(jìn)行驗(yàn)證，后續(xù)研究將會(huì)進(jìn)一步明確ICA 在HFPEF 中的作用機(jī)理。