一測(cè)多評(píng)法聯(lián)合化學(xué)計(jì)量學(xué)及熵權(quán)優(yōu)劣解距離分析綜合評(píng)價(jià)青錢柳藥材質(zhì)量

張富麗 ，管海波 ，戶軍燕 ，王志斌，趙明霞

1. 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000

2. 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院 精準(zhǔn)用藥實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450000

3. 鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院 處方前置審核中心，河南 鄭州 450000

4. 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046

青錢柳為胡桃科植物青錢柳Cyclocarya paliurus(Batal.) Iljinsk.的干燥葉[1-2]，分布于貴州、湖南、安徽、江西、浙江、福建、四川等地[3]。主要含有黃酮化合物、酚類、多糖、常量及微量元素等物質(zhì)[4-6]。具有生津止渴、祛風(fēng)止癢、消腫止痛之功，研究發(fā)現(xiàn)其通過保護(hù)胰島細(xì)胞、調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)通路、促進(jìn)葡萄糖利用等發(fā)揮改善糖代謝的作用，并通過調(diào)控脂質(zhì)代謝通路、抑制脂質(zhì)過氧化等發(fā)揮改善脂代謝的作用[7]；青錢柳三萜可降低Akt 和內(nèi)皮型一氧化氮合酶的磷酸化水平及Rho 激酶和精氨酸酶2 的表達(dá)水平，從而改善腎內(nèi)皮功能，緩解H2O2誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷[8]，還可通過PI3K/Akt/m TOR 依賴性自噬抑制NLRP3 炎癥小體的表達(dá)，從而改善由高尿酸引起的痛風(fēng)[9]；青錢柳多糖可逆轉(zhuǎn)糖尿病組小鼠體內(nèi)尿酸水平的升高[10]，進(jìn)而改善鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病腎??；其提取物還可通過脂肪自噬途徑清除肝臟脂肪，改善非酒精性脂肪肝病[11]；青錢柳還是“天然抗氧化劑”，其黃酮類成分與體內(nèi)自由基結(jié)合成的化合物，可清除自由基而達(dá)到抗氧化的效果[12]。總之青錢柳的藥用價(jià)值非常高。青錢柳未收錄于中國(guó)藥典，曾被一些地方標(biāo)準(zhǔn)收錄[13-16]，但這些標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制僅局限于顯微鑒別、薄層鑒別及其他一般的檢查項(xiàng)目，涉及的含量測(cè)定也僅有1到2 個(gè)成分的檢測(cè)，均不能全面科學(xué)地評(píng)價(jià)青錢柳整體質(zhì)量，因此開展對(duì)青錢柳整體質(zhì)量控制和品質(zhì)評(píng)價(jià)研究對(duì)確保臨床應(yīng)用療效一致性具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)收集貴州、湖南、安徽、江西、浙江、福建、四川等7 省18 批次青錢柳藥材，采用一測(cè)多評(píng)（quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS）法同時(shí)測(cè)定青錢柳中金絲桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、阿福豆苷、槲皮素、山柰酚、齊墩果酸、熊果酸、阿江欖仁酸、青錢柳苷H、科羅索酸、白樺脂酸、山楂酸和α-乳香酸的含量，借助主成分分析和正交偏最小二乘法-判別分析等方法對(duì)14 個(gè)成分測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，再結(jié)合熵權(quán)TOPSIS 法對(duì)其質(zhì)量?jī)?yōu)劣性進(jìn)行排序，旨為青錢柳的質(zhì)量評(píng)價(jià)及全面有效建立青錢柳的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 試藥與儀器

1.1 主要藥品與試劑

對(duì)照品熊果酸、槲皮素、異槲皮苷、齊墩果酸和金絲桃苷（批號(hào)分別為110742-201823、100081-201610、111809-202205、110709-202109 和111521-202310，質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為99.9%、99.1%、96.3%、95.8%和94.7%）源于中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)照品白樺脂酸、山楂酸、阿福豆苷、科羅索酸、山柰酚、α-乳香酸、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷和阿江欖仁酸（批號(hào)分別為PRF8010444、PRF908292、PRF9092622 、 PRF8092102 、 PRF23101326 、PRF8052701、PRF9113022 和PRFM2305301，質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為99.9%、99.8%、99.6%、99.6%、99.3%、99.2%、98.0%和98.0%）源于成都普瑞法科技開發(fā)有限公司；青錢柳苷H（批號(hào)WQK2204095，含量98.0%）源于四川省維克奇生物科技有限公司；青錢柳藥材采集地信息見表1；乙腈、磷酸、配流動(dòng)相用甲醇為色譜純，水為純凈水，其余試劑為分析純。

表1 青錢柳藥材信息Table 1 Medicinal materials information of C. paliurus

1.2 主要儀器

Thermo Ultimate 3000 型高效液相色譜儀（美國(guó)Thermo Fisher 公司），2695 型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters 公司）；XS205Du 型電子分析天平（瑞士梅特勒公司），4020P 型超聲波清洗器（韓國(guó)JAC 公司）；色譜柱Venusil MP C18、Waters Xbridge C18、Boston Boschrom C18，規(guī)格均為（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

2 方法與結(jié)果

2.1 混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱取14 個(gè)對(duì)照品各適量，用75%甲醇制備金絲桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、阿福豆苷、槲皮素、山柰酚、齊墩果酸、熊果酸、阿江欖仁酸、青錢柳苷H、科羅索酸、白樺脂酸、山楂酸和α-乳香酸質(zhì)量濃度分別為4.812、6.190、1.128、2.870、0.412、0.158、0.104、1.470、0.048、0.232、0.890、0.072、0.630 和0.308 mg/mL 的混合對(duì)照品母液，精密吸取該母液1 mL，置20 mL 量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取粉碎的青錢柳粉末約1 g，精密稱定，于25 mL 量瓶中，加溶劑20 mL，超聲處理45 min，放至常溫，溶劑定容，搖勻，即得。

2.3 色譜條件

色譜柱：Venusil MP C18柱，柱溫30 ℃；流動(dòng)相乙腈（A）-0.2%磷酸梯度洗脫（0～11 min，17.0%A；11～34 min，17.0%～40.0% A；34～66 min，40.0%～65.0% A；66～75 min，65.0%～17.0% A）；檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm（0～35 min 檢測(cè)金絲桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、阿福豆苷、槲皮素和山柰酚）、210 nm（35～43 min 檢測(cè)齊墩果酸、熊果酸、阿江欖仁酸、青錢柳苷H、科羅索酸、白樺脂酸、山楂酸和α-乳香酸），體積流量1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。

2.4 HPLC 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性試驗(yàn) 取“2.1”和“2.2”項(xiàng)下2 種溶液，按上述色譜條件測(cè)定。曲線圖譜（圖1）顯示供試品溶液中14 種成分的出峰位置與對(duì)照品基本一致，且色譜峰對(duì)稱性好，與相鄰色譜峰分離度符合《中國(guó)藥典》2020 年版要求，理論板數(shù)按各成分計(jì)均大于5 000。

圖1 混合對(duì)照品 (A) 和青錢柳樣品 (B) 的HPLC 色譜圖Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed control substance (A) and C. paliurus sample (B)

2.4.2 線性回歸試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品母液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 和5.0 mL，分別用上述溶劑定容至20 mL 量瓶，搖勻制得系列濃度從低到高的混合對(duì)照品溶液1～6。精密吸取溶液1～6 各10μL，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對(duì)照品質(zhì)量濃度對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)及回歸方程。詳見表2。

表2 青錢柳中各成分的線性回歸結(jié)果Table 2 Results of linear regression of each constituent in C. paliurus

2.4.3 精密度試驗(yàn) 取青錢柳（S1）樣品制成的供試品溶液1 份，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果金絲桃苷等14 個(gè)成分峰面積的RSD 值依次為0.66%、0.52%、1.06%、0.83%、1.38%、1.54%、1.67%、0.71%、1.68%、1.46%、1.15%、1.65%、1.22%和1.39%，表明儀器精密度良好，可以滿足試驗(yàn)檢測(cè)。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取青錢柳（S1）樣品按“2.2”項(xiàng)下方法制成的供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、5、9、14、20 和24 h 時(shí)，按2.3 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果金絲桃苷等14 個(gè)成分峰面積的RSD 值依次為1.01%、0.95%、1.58%、1.05%、1.61%、1.55%、1.85%、1.12%、1.91%、1.78%、1.46%、1.63%、1.55%和1.71%，表明青錢柳供試品溶液24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取青錢柳（S1）樣品6 份，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，各精密吸取10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄金絲桃苷等14個(gè)成分的峰面積，加載2.4.2 項(xiàng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用外標(biāo)法計(jì)算14 個(gè)成分的含量，計(jì)算各成分含量的RSD值依次為1.09%、0.91%、1.28%、1.16%、1.76%、1.85%、1.79%、1.32%、1.96%、1.76%、1.27%、1.85%、1.67%和1.80%，表明重復(fù)性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知14 個(gè)成分含量的青錢柳（S1）細(xì)粉9 份，每份約0.5 g，精密稱定，分別按已知各成分含量的80%、100%、120% 3 個(gè)水平加入混合對(duì)照品溶液（每mL 含3.192 mg 金絲桃苷、4.503 mg 槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、0.814 mg異槲皮苷、1.957 mg 阿福豆苷、0.218 mg 槲皮素、0.084 mg 山柰酚、0.059 mg 齊墩果酸、0.997 mg 熊果酸、0.027 mg 阿江欖仁酸、0.138 mg 青錢柳苷H、0.482 mg 科羅索酸、0.041 mg 白樺脂酸、0.359 mg山楂酸和0.168 mg α-乳香酸），每個(gè)水平各3 份，再按“2.2”項(xiàng)方法制得加樣供試品溶液，各精密吸取10 μL，分別注入液相色譜儀，計(jì)算14 種成分的平均加樣回收率100.08%、100.14%、99.46%、99.74%、97.59%、97.89%、96.94%、99.56%、97.16%、98.63%、99.52%、96.97%、99.03%和98.42%；RSD分別為0.63%、0.87%、1.29%、0.68%、1.32%、1.03%、1.44%、1.27%、1.48%、1.51%、0.99%、1.36%、1.52%和1.55%，表明本實(shí)驗(yàn)方法具有良好的回收率。

2.5 一測(cè)多評(píng)法的建立[17]

2.5.1 相對(duì)校正因子（f）的計(jì)算 取“2.4.2”項(xiàng)6個(gè)混合對(duì)照品溶液，以熊果酸為參照物，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，依公式計(jì)算，結(jié)果見表3。

表3 青錢柳中各種成分的f 值Table 3 f value of each component in C. paliurus

f為相對(duì)校正因子、ρi和Ai分別為內(nèi)參物質(zhì)量濃度和峰面積、ρs和As為其他待測(cè)成分質(zhì)量濃度和峰面積

2.5.2f耐用性考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液，選用Thermo Ultimate 3000 型和2695 型HPLC 系統(tǒng)與和Venusil MP C18色譜柱、Waters Xbridge C18色譜柱、Boston Boschrom C18色譜柱，體積流量為（1.0±0.2）mL/min，柱溫（30±5）℃等條件，分別考察色譜系統(tǒng)及色譜柱、體積流量和柱溫的改變對(duì)f的影響。每次進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積。結(jié)果見表4～6，表明儀器與色譜柱、體積流量和柱溫的改變對(duì)所建立的f均無較大影響。

表4 不同色譜柱對(duì)f 的影響Table 4 Effect of different chromatographic columns on f

表5 不同體積流量對(duì)f 的影響Table 5 Effec of different volume flow rates on f

表6 不同柱溫對(duì)f 的影響Table 6 Effect of different column temperatures on f

2.5.3 相對(duì)保留時(shí)間的測(cè)定 記錄“2.5.2”項(xiàng)下不同HPLC 儀與不同色譜柱時(shí)14 個(gè)成分的保留時(shí)間，以熊果酸為內(nèi)參物，采用相對(duì)保留時(shí)間值（t）法對(duì)色譜峰進(jìn)行定位。結(jié)果各成分t值的RSD均≤1.87%（表7），表明各待測(cè)成分的t值波動(dòng)較小，無顯著差異，可以對(duì)青錢柳中多組分色譜峰進(jìn)行準(zhǔn)確定位。

表7 各待測(cè)成分的相對(duì)保留時(shí)間值Table 7 t of each component to be tested

2.6 含量測(cè)定

取18 批青錢柳（S1～S18），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液（每批平行制備3 份），取各供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定金絲桃苷等14 個(gè)成分的峰面積，加載“2.4.2”項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用外標(biāo)法計(jì)算青錢柳中14 種成分的含量；再以熊果酸為內(nèi)參物，運(yùn)用“2.5.1”項(xiàng)下所得f的均值，采用QAMS 法計(jì)算各組分含量。對(duì)每一成分2 種方法所得含量數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)（表8）。結(jié)果P＞0.05，表明2 種方法差異不明顯。

表8 青錢柳中14 種成分含量測(cè)定結(jié)果及比較 (n＝3)Table 8 Content determination results and comparison of 14 components in C. paliurus (n＝3)

2.7 化學(xué)計(jì)量學(xué)方法的建立[18]

2.7.1 主成分分析（principal component analysis，PCA） 以18 批青錢柳中14 個(gè)成分QAMS 法計(jì)算的含量數(shù)據(jù)為變量構(gòu)建14×18 階矩陣，采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件提取主成分，得各主成分方差分析表（表9）和成分矩陣表（表10）。選取特征值大于1的公因子為主成分，結(jié)果前2 個(gè)主成分的方差貢獻(xiàn)率分別為69.443%和20.155%，特征值分別為9.722和2.822，累積方差貢獻(xiàn)率為89.598%，表明前2 個(gè)主成分因子能夠解釋14 個(gè)成分89.598%的原始變量。由表10 可知，第1 主成分主要反映金絲桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、阿福豆苷、槲皮素、山柰酚、熊果酸、青錢柳苷H、科羅索酸、山楂酸和α-乳香酸等成分的綜合信息，第2 主成分則集中了齊墩果酸、阿江欖仁酸和白樺脂酸的信息。為查找18 批青錢柳的相關(guān)性與差異性，將14×18階矩陣導(dǎo)入SIMCA 14.1 軟件構(gòu)建PCA 模型（圖2），結(jié)果18 批樣品被分為3 類，其中S1～S8 為一組，S9～S12 為一組，S13～S18 為一組，表明不同產(chǎn)地青錢柳的質(zhì)量存在差異。

圖2 18 批青錢柳的PCA 得分圖Fig. 2 PCA score chart of 18 batches of C. paliurus

表9 18 批青錢柳主成分分析結(jié)果Table 9 Results of principal component analysis of 18 batches of C. paliurus

表10 青錢柳中14 種成分的初始因子載荷矩陣Table 10 Primary factor loading matrix of 14 components in C. paliurus

2.7.2 正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis，OPLSDA） 為挖掘14 個(gè)指標(biāo)成分中哪些成分是引起青錢柳產(chǎn)品質(zhì)量差異的主要潛在標(biāo)志物，繼續(xù)運(yùn)用SIMCA 14.1 軟件建立OPLS-DA 模型（圖3），結(jié)果18 批樣品聚類更明顯，其中S9、S10、S11 和S12位于得分圖右方；S3、S2、S5、S7、S4、S8、S6 和S1 位于得分圖中上方；S18、S13、S17、S15、S14和S16 位于得分圖左下方。結(jié)合變量重要性投影（VIP）法，以1 為VIP 的閾值為篩選標(biāo)準(zhǔn)[19]，篩選引起青錢柳樣品質(zhì)量差異的主要潛在標(biāo)志物，VIP值越大，表明該成分對(duì)青錢柳組間質(zhì)量差異的影響越大，18 批青錢柳各成分VIP 圖見圖4。其中VIP槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷＝1.869 0、VIP金絲桃苷＝1.720 9、VIP熊果酸＝1.352 4、VIP阿福豆苷＝1.269 5、VIP異槲皮苷＝1.010 9，表明這5 個(gè)成分是影響青錢柳產(chǎn)品質(zhì)量的主要潛在標(biāo)志物。

圖3 18 批青錢柳樣品的OPLS-DA 模型得分圖Fig. 3 Score chart of OPLS-DA model of 18 batches of C.paliurus samples

圖4 18 批青錢柳的VIP 圖Fig. 4 VIP image of 18 batches of C. paliurus

2.8 熵權(quán)TOPSIS 法（entropy weight-TOPSIS，EW-TOPSIS）分析[20]

以18 批青錢柳中14 種成分QAMS 法含量檢測(cè)數(shù)據(jù)為變量建立初始化決策矩陣，采用越大越優(yōu)型指標(biāo)計(jì)算公式，對(duì)原始含量數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理（表11）。

表11 18 批青錢柳中各指標(biāo)歸一化處理結(jié)果Table 11 Results of normalization treatment for each index of 18 batches of C. paliurus

Xij和Yij分別為原始含量數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)歸一化后數(shù)據(jù)，max(xj)和min（xj）分別為各成分含量數(shù)據(jù)的最大值和最小值

再以“2.7.2”項(xiàng)中各成分的VIP 值作為各指標(biāo)權(quán)重（Wj），運(yùn)用公式Zij＝Y(jié)ij×Wj構(gòu)建加權(quán)決策矩陣（表12），得最優(yōu)方案Zj+＝1.720 9、1.869 0、1.010 9、1.269 5、0.488 8、0.378 1、0.543 0、1.352 4、0.445 8、0.833 6、0.673 5、0.583 2、0.663 3 和0.527 9，最劣方案Zj-均為0。采用評(píng)價(jià)指標(biāo)與正負(fù)理想解距離計(jì)算公式，計(jì)算理想解方案（Di+）和負(fù)理想解方案（Di-）及各評(píng)價(jià)指標(biāo)的評(píng)分（Ci），結(jié)果見表13。

表12 18 批青錢柳加權(quán)矩陣Table 12 Weighting matrix of 18 batches of C. paliurus

表13 18 批青錢柳藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)排序Table 13 Relative ordering of quality evaluation of 18 batches of C. paliurus medicinal materials

EW-TOPSIS 分析結(jié)果顯示，Ci排名前6 位的依次為S16、S14、S15、S13、S17 和S18，分別來自貴州和四川，Ci值均大于0.6，表明這2 個(gè)產(chǎn)區(qū)所得青錢柳整體質(zhì)量最佳。

3 討論

3.1 供試品提取方法的確定

本實(shí)驗(yàn)在制備供試品溶液時(shí)，同時(shí)以色譜峰豐度、峰形、分離度、雜質(zhì)數(shù)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別考察了不同濃度的甲醇溶液采用超聲或加熱回流，提取30、45、60 min 時(shí)的提取效果，結(jié)果顯示75%甲醇超聲提取45 min 時(shí)得到的14 種成分色譜峰響應(yīng)值較大、峰形、分離度較好，雜質(zhì)較少。

3.2 色譜條件的確定

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)14 個(gè)指標(biāo)成分溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，觀察各成分光譜曲線中的最大吸收，結(jié)合中國(guó)藥典及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[21-22]，最終確定采用360 nm檢測(cè)金絲桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、阿福豆苷、槲皮素和山柰酚，210 nm 檢測(cè)齊墩果酸、熊果酸、阿江欖仁酸、青錢柳苷H、科羅索酸、白樺脂酸、山楂酸和α-乳香酸，各成分在該條件下響應(yīng)值較大，峰形尖銳，青錢柳供試品溶液在該條件下檢測(cè)時(shí)基線相對(duì)平穩(wěn)，且各成分分離度良好。本實(shí)驗(yàn)在篩選流動(dòng)相時(shí)，首先考察了基礎(chǔ)流動(dòng)相系統(tǒng)：甲醇-水和乙腈-水，結(jié)果乙腈-水系統(tǒng)洗脫效果較好，但金絲桃苷色譜峰與槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷不能完全分離，遂加入磷酸溶液（0.05%、0.1%、0.2%）進(jìn)行調(diào)節(jié)，結(jié)果以乙腈-0.2%磷酸溶液作為流動(dòng)相系統(tǒng)時(shí)，洗脫效果最佳。

3.3 質(zhì)量分析結(jié)果評(píng)價(jià)

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-QAMS 法對(duì)18 批青錢柳中14 個(gè)成分進(jìn)行定量測(cè)定，再結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)中常用的PCA 和OPLS-DA 法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果18 批不同產(chǎn)地青錢柳明顯聚為3 類，呈現(xiàn)一定的產(chǎn)區(qū)差異。OPLS-DA 分析發(fā)掘出影響青錢柳產(chǎn)品質(zhì)量的主要潛在標(biāo)志物為槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、金絲桃苷、熊果酸、阿福豆苷和異槲皮苷。EW-TOPSIS結(jié)果顯示貴州和四川地區(qū)所得青錢柳整體質(zhì)量較好，其次為湖南、江西和安徽。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立的方法可操作性強(qiáng)，有效降低了檢驗(yàn)成本，有利于多指標(biāo)成分定量控制模式的普及應(yīng)用，也為該藥材的道地性研究提供了基礎(chǔ)，有助于青錢柳優(yōu)質(zhì)種源的研究與開發(fā)。同時(shí)中藥材質(zhì)量受產(chǎn)地土壤、氣候、海拔、水質(zhì)、生態(tài)環(huán)境等多因素影響[23]，后續(xù)將擴(kuò)大樣品采集地，收集土壤、氣候、海拔等參數(shù)，進(jìn)一步挖掘影響產(chǎn)品質(zhì)量差異性因素。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突