中藥復(fù)方制劑對雞腺胃炎的治療效果評價(jià)及機(jī)制研究

韓振興，任慶賢，孫書旺，牛紅日，鐵小東

（石家莊牧安生物科技有限公司，河北石家莊 050000）

1 前言

近年來，雞腺胃炎在我國多個地區(qū)流行，給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失。發(fā)生腺胃炎的雞只癥狀為采食量減少，生長發(fā)育緩慢，糞便中有未消化的飼料等，剖檢可見腺胃腫脹，嚴(yán)重時腺胃漿膜出現(xiàn)白色壞死，胃壁增厚，腺胃乳頭腫脹出血，腺胃黏膜呈現(xiàn)糜爛性潰瘍等。多種因素可以導(dǎo)致雞腺胃炎，主要包括非傳染性因素和傳染性因素，前者主要包括霉菌毒素致病、生物胺致病、硫酸銅致病和飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)激導(dǎo)致的發(fā)病等因素；后者則包括傳染性支氣管炎病毒、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖癥病毒、圓圈病毒III 型等，此外還包括與雞腺胃炎密切相關(guān)的沙門氏菌、大腸桿菌和梭狀芽孢桿菌等。

針對雞腺胃炎通常采用抗病毒藥物與阿莫西林、青霉素等抗微生物藥物聯(lián)合用藥的治療方案。然而，抗微生物藥物的使用容易導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，給動物疾病治療以及公共衛(wèi)生造成威脅。傳統(tǒng)中藥具有天然性、功能多樣性以及經(jīng)濟(jì)環(huán)保等優(yōu)勢，研究表明，某些中藥復(fù)方對可改善腺胃炎雞只的肌胃、腺胃的形態(tài)，提高了血清中的免疫球蛋白的含量，還能提高肉雞生產(chǎn)性能等；使用板清顆粒等藥物對腺胃炎具有一定的治療效果。以上研究提示，中藥可成為治療雞腺胃炎的潛在治療方案。

本研究采用脂多糖作為刺激物構(gòu)建雞腺胃炎模型，評價(jià)中藥復(fù)方對雞腺胃炎的治療效果，篩選具有良好治療效果的中藥組方，為雞腺胃炎的防治提供理論依據(jù)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 中藥組方藥液的制備

中藥組方包括半夏、大黃、龍膽、木香、枳實(shí)等五味中藥。將上述中藥采用水提法工藝制備提取液，按照比例稱取定量的中藥，加入蒸餾水浸泡煎煮2 次。第一次加入8 倍量蒸餾水浸泡1小時后，煎煮1 小時，濾過保留濾渣；第二次向?yàn)V渣中加入6 倍量的蒸餾水，煎煮0.5 小時，過濾去除濾渣。合并兩次濾液后，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將藥液濃縮至1 克/毫升。

2.2 雞腺胃炎模型的建立

本研究采用100 只1 日齡海蘭褐雛雞作為試驗(yàn)對象，購買于北京梅里亞維通實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，試驗(yàn)過程中，SPF 雛雞的飼養(yǎng)管理嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)動物用途與福利指南進(jìn)行。

100 只健康海蘭褐雞飼養(yǎng)至5 日齡，隨機(jī)分為5 個試驗(yàn)組，每組20 只，分別為空白對照組、模型組（5 微克/只LPS）、低劑量組（5 微克/只LPS+1 毫升/千克中藥復(fù)方制劑）、中劑量組（5 微克/只LPS+4 毫升/千克中藥復(fù)方制劑）和高劑量組（5 微克/只LPS+8 毫升/千克中藥復(fù)方制劑）。連續(xù)給藥5 天采用灌胃給予中藥復(fù)方制劑，停藥觀察5 天，將雞進(jìn)行安樂死并收集腺胃等組織并檢測相關(guān)指標(biāo)。

2.3 雞采食量和體重的測定

觀察并記錄雞只的采食量和體重等指標(biāo)，分別在1、5、10 和15 日齡每組隨機(jī)取5 只雞空腹12 小時后稱重，并記錄日供料量和剩余料量。

2.4 腺胃指數(shù)和肌胃指數(shù)的測定

試驗(yàn)結(jié)束后取雞的肌胃和腺胃，計(jì)算臟器系數(shù)。計(jì)算公式：臟器系數(shù)（%）=臟器質(zhì)量（克）/體重（克）。

2.5 腺胃中前列腺素E2（PGE2）的檢測

定量稱取腺胃組織，制備10%組織勻漿，離心取上清液，根據(jù)說明書采用PGE2 測試盒（南京建成生物工程研究所，南京） 測定腺胃中的PGE2，酶標(biāo)儀測定OD450nm 值。

2.6 腺胃中總超氧化物歧化酶（SOD）檢測

定量稱取腺胃組織，制備10%組織勻漿，離心取上清液，根據(jù)說明書采用SOD 測試盒（南京建成生物工程研究所，南京） 測定腺胃中的SOD，酶標(biāo)儀測定OD450nm 值。

2.7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

使用GraphPad Prism 5.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，P＜0.05 作為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果

3.1 采食量和體重測定結(jié)果

給予LPS 刺激物1 天后，空白對照組的雞只糞便排泄正常，呈現(xiàn)顆粒狀，模型組的雞只出現(xiàn)拉稀現(xiàn)象。

各試驗(yàn)組的雞只生產(chǎn)性能表現(xiàn)出差異。試驗(yàn)第5 天，各組的增重沒有明顯差異。試驗(yàn)的第10 天空白對照組、模型組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的平均日增重分別為6.6 克、2.05克、2.98 克、4.38 克和5.45 克，中藥低劑量組、中藥劑量組和中藥高劑量組的日增重顯著高于模型組 （P＜0.05）； 料肉比分別為2.3、5.04、3.79、2.95 和2.62，中藥低劑量組、中藥劑量組和中藥高劑量組的料肉比顯著低于模型組（P＜0.05）。試驗(yàn)的第15 天呈現(xiàn)相似的結(jié)果。

3.2 腺胃指數(shù)和肌胃指數(shù)的測定結(jié)果

停藥5 天后，將雞只處死后摘取腺胃和肌胃，計(jì)算不同組別的腺胃指數(shù)和肌胃指數(shù)。模型組的腺胃指數(shù)較空白對照組顯著增大（0.81vs0.684，P＜0.01），同時，使用低劑量、中劑量和高劑量的中藥復(fù)方治療后腺胃指數(shù)分別為0.78、0.74 和0.72，與模型組相比較顯著降低（P＜0.05），并隨著劑量的增加腺胃指數(shù)減小。同時，肌胃指數(shù)也呈現(xiàn)相同的趨勢。

3.3 雞腺胃組織中的PGE2 水平測定結(jié)果

試驗(yàn)雞只停藥5 天后，模型組的腺胃組織中的PGE2 水平較空白對照組顯著下降（P＜0.01），同時，使用低劑量中藥復(fù)方、中劑量中藥復(fù)方和高劑量中藥復(fù)方治療的各組雞只腺胃組織中的PGE2 不斷上升，分別為119.37±16.37 皮克/毫升、127.58±27.68 皮克/毫升和138.9±29.42 皮克/毫升。

3.4 雞腺胃組織中SOD 活性測定結(jié)果

停藥5 天后，模型組雞只的腺胃組織中SOD 活性（218.59±14.57 U/mgprot）較空白對照組（406.34±21.72 U/mgprot）顯著降低（P＜0.01），同時，給予低劑量中藥復(fù)方、中劑量中藥復(fù)方和高劑量中藥復(fù)方治療組的腺胃組織中SOD 活性分別為301.83±29.48 U/mgprot、321.55±24.16 U/mgprot 和358.16±26.41 U/mgprot，較模型組顯著增加，且腺胃組織中SOD 活性隨著中藥復(fù)方制劑給藥量的增加而增加。

4 討論

雞腺胃炎是一種常見的傳染性疾病，給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重威脅。腺胃是雞體內(nèi)重要的消化器官，能夠分泌胃酸和胃蛋白酶，對食物中的蛋白質(zhì)類物質(zhì)的分解具有重要意義。當(dāng)發(fā)生腺胃炎時，胃酸和胃蛋白酶的分泌受到影響，影響飼料消化及營養(yǎng)物質(zhì)吸收，造成雞群出現(xiàn)生長發(fā)育不良、飼料消化不良等疾病。

本試驗(yàn)采用半夏、大黃、龍膽、木香、枳實(shí)等五味中藥進(jìn)行組方，測定中藥組方對LPS 誘導(dǎo)的雞腺胃炎的治療效果。半夏具有調(diào)節(jié)胃腸、化淤消滯和溫胃利膽的作用，用于胃部疾病和痰熱導(dǎo)致的胃脘部脹痛以及胃潰瘍等。龍膽具有保肝、健胃和抗菌消炎的作用，主要用于治療炎癥、消化不良和胃部感染等。大黃能夠促進(jìn)胃腸蠕動，增加胃腸部黏膜的血液循環(huán)利于胃炎及胃潰瘍的恢復(fù)。木香在抗炎、抗?jié)兒蜏p輕胃腸道平滑肌痙攣等方面發(fā)揮重要的作用，研究表明，木香可以調(diào)節(jié)和改善胃蛋白酶的分泌和活性，達(dá)到保護(hù)胃黏膜的作用。枳實(shí)是一味性溫味辛的重要，具有消積導(dǎo)滯、化瘀散痞的功效，研究表明，枳實(shí)具有殺滅幽門螺旋桿菌的作用，進(jìn)而改善胃腸道功能。

在本研究中，用LPS 處理雞只后，腺胃腫大，腺胃指數(shù)顯著增加，說明經(jīng)LPS 刺激后雞的腺胃受到損傷，發(fā)生腺胃炎。此外，模型組的腺胃組織中PGE2 和SOD 水平顯著降低，說明腺胃炎的發(fā)生可能跟氧化應(yīng)激相關(guān)。這與王酉馨的研究結(jié)果一致，因此，在治療雞腺胃炎時需要考慮消除氧化應(yīng)激的因素，以便提高治療雞腺胃炎的效果。使用中藥復(fù)方制劑治療后，治療組的臨床癥狀和相關(guān)指標(biāo)較模型組明顯緩解，表明中藥復(fù)方制劑對LPS 誘導(dǎo)的雞腺胃炎具有治療作用，并且隨著中藥復(fù)方制劑用量的增加而呈現(xiàn)出治療效果增強(qiáng)的現(xiàn)象。此外，中藥復(fù)方制劑組雞只腺胃組織中的PGE2 和SOD 的水平和活性升高，表明中藥復(fù)方制劑通過抗氧化活性進(jìn)而發(fā)揮對胃損傷的保護(hù)作用。