PTEN和PAX-2在子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變和非腫瘤性子宮內(nèi)膜增生鑒別診斷中的應(yīng)用價值分析

郜慶祖，王鑫宇，曲 雪，朱建雯

（揚州洪泉醫(yī)院病理科，江蘇 揚州 225200）

子宮內(nèi)膜增生性病變包括單純性增生（伴或不伴非典型性）、復(fù)雜性增生（伴或不伴非典型性）、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變（Endometrial Intraepithelial Carcinoma，EIN）、子宮內(nèi)膜癌等一系列病變[1-2]。不伴有非典型性的單純性增生和復(fù)雜性增生為非腫瘤性子宮內(nèi)膜增生（Non Tumor Endometrial Hyperplasia，NTEH）。伴有非典型性的子宮內(nèi)膜增生一部分為反應(yīng)性的，一部分則為腫瘤性的，屬于EIN。子宮內(nèi)膜增生不伴非典型性為非腫瘤性病變，不易發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌，而EIN 是腫瘤性病變，發(fā)展成癌的比例高，因此二者的鑒別有重要意見[3-4]。磷酸酶和張力蛋白質(zhì)脫酰酶（PTEN）、編碼膀胱和上尿路皮上細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子（PAX-2）在子宮內(nèi)膜病變和腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用較為顯著[5-6]。為了分析二者在子宮內(nèi)膜病變組織和正常組織中的表達(dá)形式及臨床病理特征等問題，本研究特將2020 年8 月至2023 年7 月我院病理科存檔的子宮內(nèi)膜標(biāo)本作為研究對象，分析PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 鑒別診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2020 年8 月至2023 年7 月我院病理科存檔的手術(shù)切除子宮標(biāo)本和診刮子宮內(nèi)膜標(biāo)本，其中NTEH50 例，年齡28 ～63 歲，平均（42.53±5.13）歲。EIN62 例，年齡27 ～63 歲，平均（42.83±5.28）歲。全部患者對研究知情，并簽署同意書，研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合異常子宮出血臨床診斷者；（2）均在本院接受檢查且疑似子宮內(nèi)膜病變者；（3）病歷資料完整無誤者；（4）陰道不規(guī)則出血及貧血者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重心腎功能障礙者；（2）患有精神疾病，無法正常溝通、交流者；（3）合并婦科腫瘤疾病者；（4）短期內(nèi)接受激素治療者；（5）使用宮內(nèi)節(jié)育環(huán)者；（6）合并血液系統(tǒng)疾病者。

1.3 方法

所有樣本均進(jìn)行PTEN 和PAX-2 免疫組化檢查及常規(guī)病理檢查，所有標(biāo)本均在40 g/L 甲醛溶液中固定，石蠟包埋、切片后進(jìn)行檢查，病理切片由兩位具有高級職稱的病理專家閱片做出診斷。試劑均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，PTEN 和PAX-2 為兔抗人多克隆體抗體。免疫組化檢查：對病理組織進(jìn)行石蠟包埋、切片（4 μm），粘在防脫載玻片上，恒溫箱60 ℃烘烤30 min 后放置在二甲苯溶液Ⅰ、Ⅱ中浸泡30 min，梯度酒精脫水各5 min。用磷酸鹽緩沖溶液洗滌3 次，5 min/次。3%過氧化氫滅活內(nèi)源性過氧化物酶，用磷酸鹽緩沖溶液再次洗滌3 次，5 min/次。使用枸櫞酸鹽高壓鍋加熱至沸騰的抗原修復(fù)步驟，持續(xù)10 min，在室溫下冷卻，隨后采用磷酸鹽緩沖溶液洗滌，共洗滌3 次，5 min/次。滴加第一抗體，室溫孵育60 min，然后采用磷酸鹽緩沖溶液洗滌（0.01 mol/L磷酸鹽緩沖粉+1000 mL 純凈水，pH 值為7.2 ～7.4之間），洗滌3 次，5 min/ 次。滴加第二抗體，室溫孵育20min，再次采用磷酸鹽緩沖溶液洗滌，洗滌3次。使用顯色劑（DAB）底物進(jìn)行顯色，置于室溫下觀察顯色情況，顯色反應(yīng)持續(xù)5 ～10 min。隨后，終止顯色反應(yīng)，并進(jìn)行蘇木素染色5 min。蒸餾水沖洗后，進(jìn)行鹽酸乙醇分化，再次置于蒸餾水中沖洗。隨后在氨水中返藍(lán)，進(jìn)行梯度乙醇脫水，接著進(jìn)行梯度二甲苯透明，最后使用中性樹膠進(jìn)行封片。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）觀 察PAX-2、PTEN 在EIN 和NTEH 中 的不同表現(xiàn)形式。（2）比較PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 中的表達(dá)情況，以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 診斷中的應(yīng)用情況，進(jìn)而分析兩者診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果之間的接近程度。（3）觀察PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 診斷中的應(yīng)用價值，包括靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 25.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用% 表示，行χ2 檢驗；計量資料符合正態(tài)分布，用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PAX-2、PTEN 在EIN 和NTEH 中的不同表現(xiàn)形式

PAX-2、PTEN 在EIN 和NTEH 中的不同表現(xiàn)形式見圖1。

圖1 PAX-2、PTEN 在EIN 和NTEH 中的不同表現(xiàn)形式

2.2 PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 中的表達(dá)情況

PAX-2 在子宮內(nèi)膜病變中的陰性率高于PTEN，且陰性率更接近病理診斷結(jié)果。PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 中的表達(dá)情況見表1。

表1 PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 中的表達(dá)情況（例）

2.3 PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 診斷中的應(yīng)用價值

PAX-2 在子宮內(nèi)膜病變診斷中的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率均高于PTEN。詳見表2。

表2 PTEN、PAX-2 在EIN 和NTEH 診斷中的應(yīng)用價值（%）

3 討論

近些年流行病學(xué)相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈逐漸增高的趨勢，發(fā)病年齡也越來越年輕化[7]。子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的分子生物學(xué)特性研究可以在疾病的早期診斷、治療中提供參考，對早期預(yù)防和治療疾病具有積極意義。NTEH 和EIN 是兩種不同性質(zhì)的子宮內(nèi)膜病變，子宮內(nèi)膜增生是一種非腫瘤性病變，其特征為子宮內(nèi)膜增生超過正常界限，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜厚度增加，當(dāng)增生過程中未出現(xiàn)細(xì)胞學(xué)上的非典型性改變時，稱為子宮內(nèi)膜增生不伴非典型性[8-9]。NTEH 患者在臨床上無明顯癥狀，可能會出現(xiàn)異常子宮出血、月經(jīng)不規(guī)律等癥狀，癌變的發(fā)生率相對較低，通常被認(rèn)為是良性病變，荷爾蒙療法（如口服避孕藥或黃體酮替代治療）、手術(shù)干預(yù)（如刮宮）可能在本病的治療中發(fā)揮作用[10]。EIN 是一種癌前病變，與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系密切。EIN 被定義為局限性子宮內(nèi)膜上皮異常增生，其特征包括腺體密集，腺體與間質(zhì)比例增加，結(jié)構(gòu)的不規(guī)則性、不均勻性和細(xì)胞異質(zhì)性[11-12]。EIN與子宮內(nèi)膜增生癥狀相似，會伴隨異常子宮出血、月經(jīng)不規(guī)律等癥狀，是一種癌前病變，可增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險，且15% ～30% 的患者最終病情會發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌。

本研究通過對NTEH 和EIN 中PAX-2、PTEN的表達(dá)形式進(jìn)行觀察與分析發(fā)現(xiàn)，PAX-2 和PTEN 在大多數(shù)EIN 中表達(dá)缺失，PAX-2 的正常腺體核強(qiáng)陽性與EIN 腺體對比明顯。PTEN 在多數(shù)EIN 中表達(dá)缺失（完全不著色），間質(zhì)細(xì)胞強(qiáng)陽性，正常腺體微弱陽性，非腫瘤性病變與EIN 差異小，不易觀察[13]。另外，本研究結(jié)果顯示，PAX-2 在NTEH 和EIN 鑒別中的陰性率高于PTEN，且陰性率檢測結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)的檢測結(jié)果較為接近，可見該檢測方式在子宮內(nèi)膜病變的診斷中具有較高的應(yīng)用價值。PAX-2 與PTEN表達(dá)的缺失與NTEH 和EIN 之間具有較大的關(guān)聯(lián)，其中PTEN 作為抑癌基因，具有細(xì)胞增生負(fù)調(diào)節(jié)的作用。PAX-2 的缺失與NTEH 和EIN 之間也具備一定的關(guān)系[14]。因為PAX-2 是一種轉(zhuǎn)錄因子，對胚胎發(fā)育和細(xì)胞命運具有一定的決定性作用，因此PAX-2 異常極易引起細(xì)胞的增殖和分化。PTEN 作為一種腫瘤抑制基因，主要負(fù)責(zé)細(xì)胞生長、分化與凋亡的調(diào)控，該指標(biāo)的缺失極易引發(fā)子宮內(nèi)膜癌等疾病的發(fā)生。因此，PTEN 的缺失與子宮內(nèi)膜增生、瘤變具有一定的關(guān)聯(lián)性。但二者相比之下，PAX-2 與NTEH 和EIN 之間的關(guān)聯(lián)性更為顯著，在子宮內(nèi)膜病變的診斷中具有更佳的指導(dǎo)作用。盡管如此，要想將PAX-2 檢測在NTEH 和EIN 鑒別中廣泛應(yīng)用，還需要在未來的研究中納入更多樣本量展開分析，探討該檢測方式在子宮內(nèi)膜病變診斷、治療中的應(yīng)用價值，并探究該檢測方式是否可作為治療效果評估的生物標(biāo)志物。

綜上所述，在NTEH 和EIN 的鑒別診斷中，PAX-2 的準(zhǔn)確率、靈敏度和特異度均高于PTEN，可以在子宮內(nèi)膜病變的早期診斷中作為指導(dǎo)和輔助診斷方式，為臨床醫(yī)生提供有效參考。