基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對接技術(shù)探討梔子抗肝纖維化的作用機(jī)制

肖琪，馬媛，陳孝強(qiáng)*，童黃錦**

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028；2.江蘇省中醫(yī)藥研究院，江蘇 南京 210028）

肝纖維化是由各種因素引起的可持續(xù)慢性肝損傷（如病毒性、自身免疫性、藥物誘導(dǎo)性、膽汁淤積性和代謝性疾?。?］。其特征是細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix， ECM）蛋白的過度積累，導(dǎo)致纖維瘢痕組織的形成和肝臟結(jié)構(gòu)的扭曲［2］。肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cells， HSCs）的激活能調(diào)節(jié)ECM的產(chǎn)生和分泌，被認(rèn)為是影響肝纖維化進(jìn)程的關(guān)鍵因素［3］。隨著肝纖維化的進(jìn)展，可能最終發(fā)展為肝硬化，其特征是肝實質(zhì)被瘢痕組織取代，并增加了患肝癌的風(fēng)險。肝纖維化和肝硬化預(yù)后不佳，死亡率高，全球每年有超過一百萬人死于這些疾病。幸運(yùn)的是，適當(dāng)?shù)母深A(yù)已顯示出逆轉(zhuǎn)肝纖維化的潛力［4］。然而，目前臨床上缺乏經(jīng)證實有效的治療肝纖維化的藥物。因此，迫切需要探索更有效的靶點和藥物，以控制肝纖維化的進(jìn)展并減輕其危害。

藥材梔子（Gardeniae Fructus）為茜草科（Rubiaceae）梔子屬（GardeniaJ. Ellis）植物梔子（Gardenia jasminoidesEllis）的干燥成熟果實，于十月中下旬采收，曬干或烘干。梔子始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，主產(chǎn)于江西、浙江、湖南等地，是衛(wèi)生部發(fā)布的首批食藥同源中藥之一，具有瀉火除煩，清熱利濕，涼血解毒等功效。在梔子中已分離的化合物主要有環(huán)烯醚萜及其苷類、有機(jī)酸及其衍生物類、黃酮類、單萜類等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實，梔子具有顯著的抗炎［5］、抗氧化［6］、保肝［7］、降脂［8］等作用，常與茵陳、金銀花等配伍治療肝纖維化以及肝內(nèi)膽汁淤積等癥。

目前梔子對肝纖維化治療的作用機(jī)制尚未見深入研究，本研究通過超高壓液相色譜-飛行時間質(zhì)譜儀（Ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole/time-of-flight mass spectrometry，UPLC-Q/TOF-MS）對梔子藥材的化學(xué)成分進(jìn)行辨識，利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)預(yù)測梔子抗肝纖維化的效應(yīng)物質(zhì)及作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用及開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-30A型超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；Triple TOF 5600串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源ESI（美國AB SCIEX公司）；Milli-Q型超純水儀（美國Millipore公司）；ME204E型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；BY-R20型醫(yī)用離心機(jī)（北京白洋醫(yī)療器械有限公司）；MS-100恒溫混勻儀（MS-100恒溫混勻儀）；KQ-500E型醫(yī)用超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

標(biāo)準(zhǔn)品槲皮素（批號：100081-200907）、東莨菪內(nèi)酯（批號：110768-200504）購自中國食品藥品檢定研究院；綠原酸（批號：Y24J7K16726）購自上海源葉生物科技有限公司；京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷（批號：J-075-160906）、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷（批號：S-060-160815）、棕櫚酸（批號：Z-032-170426）購自成都瑞芬思生物科技有限公司；咖啡酸（批號：MUST-12042403）、京尼平（批號：MUST-11122811）、梔子苷（批號：MUST-17020401）、蘆?。ㄅ枺篗UST-11040302）、齊墩果酸（批號：MUST-11090502）購自成都曼斯特生物科技有限公司；京尼平苷酸（批號：CHB151101）、新綠原酸（批號：CHB160419）、西紅花苷（MUST-22092106）、亞油酸（批號：CHB160902）、硬脂酸（批號：CHB170216）購自成都克洛瑪生物科技有限公司。以上標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于98%。

甲醇、乙腈（質(zhì)譜級，湖北弗頓科學(xué)技術(shù)有限公司）；甲酸（色譜級，美國 ROE Scientific INC.）；實驗用水為超純水。

2 方法

2.1 梔子藥材的收集

梔子藥材（10批）來源于主產(chǎn)區(qū)江西、浙江等地，經(jīng)江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院陳孝強(qiáng)副主任中藥師鑒定為茜草科植物梔子（Gardenia jasminoidesEllis）的干燥成熟果實。所有樣品經(jīng)檢驗符合《中國藥典》2020版一部梔子項下規(guī)定。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備

梔子藥材粉碎，過三號篩。精密稱取粉末0.1 g，精密加入10 mL甲醇，超聲提取30 min。提取液高速離心10 min（轉(zhuǎn)速12 000 r/min），取上清液，進(jìn)樣分析前過0.22 μm微孔濾膜。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取16種標(biāo)準(zhǔn)品（槲皮素、東莨菪內(nèi)酯、綠原酸、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、棕櫚酸、咖啡酸、京尼平、梔子苷、蘆丁、齊墩果酸、京尼平苷酸、新綠原酸、西紅花苷、亞油酸、硬脂酸）適量，用甲醇溶解，配制成含各標(biāo)準(zhǔn)品約2 μg/mL混合對照品溶液。

2.3 UPLC-Q/TOF-MS分析

2.3.1 色譜條件

儀器檢測條件參考已報道的文獻(xiàn)［9］。采用Agilent Extend C18色譜柱（100 mm × 2.1 mm， 1.8 μm）。流動相A和B分別為0.05%甲酸水溶液和乙腈，流速0.3 mL/min，梯度洗脫設(shè)置為：0 ～ 10 min，5% ～20% B；10 ～ 20 min，20% ～ 50% B；20 ～ 25 min，50%～ 80% B；25 ～ 30 min，80% ～ 100% B；30 ～ 32 min，100% B。柱溫為35℃，進(jìn)樣量為2 μL。

2.3.2 質(zhì)譜條件

離子源為ESI，采集模式為正負(fù)離子模式。儀器參數(shù)設(shè)置如下：離子化電壓+5 500 V / -4 500 V，離子化溫度550℃，去簇電壓 ± 60 V，補(bǔ)償電壓 ± 10 V。一級和二級的掃描范圍分別為m/z100 ～ 1 500和50 ～ 1 000。質(zhì)譜儀每3 h進(jìn)行一次自動校準(zhǔn)。

2.4 梔子中化學(xué)成分的鑒定與活性成分的篩選

利用MS-DIAL軟件對質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，同時根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品提供的保留時間、二級碎片信息，將匹配度大于80%且保留時間一致的結(jié)果作為梔子藥材中鑒定得到的化合物。

根據(jù)TCMSP（https：//tcmspw.com/tcmsp.php）提供的藥物ADME參數(shù)對上述化合物作進(jìn)一步篩選，這些參數(shù)包括口服生物利用度（Oral bioavailability，OB）、藥物相似性（Drug-likeness， DL）和人高加索結(jié)腸腺癌滲透性（Human caucasian colon adenocarcinoma， Caco-2）。OB、DL和Caco-2的閾值分別設(shè)置為20%、0.1和-5.15［10］。此外，根據(jù)文獻(xiàn)報道將梔子中具有抗肝纖維化活性的化合物納入范圍。

2.5 梔子抗肝纖維化潛在作用靶點的篩選

通過化合物數(shù)據(jù)庫Pubchem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）獲取梔子中活性成分的結(jié)構(gòu)與SMILES式，并將其導(dǎo)入藥物靶點數(shù)據(jù)庫Swiss Target Prediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）和Drugbank（https：//www.drugbank.com/），搜索成分靶點，設(shè)置物種為“Homo sapiens”，置信度 ＞ 0，利用Uniprot（https：//www.uniprot.org/）將靶點名稱校準(zhǔn)為官方名稱，這些靶點經(jīng)合并去重后作為梔子活性成分的靶點。

同時，通過人類基因數(shù)據(jù)庫GeneCards（https：//www.genecards.org/）和孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫OMIM（https：//omim.org/）進(jìn)行檢索，設(shè)置檢索詞“hepatic fibrosis”，設(shè)置物種為“Homo sapiens”，獲得與肝纖維化相關(guān)的疾病靶點。利用Venny 2.1（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）對梔子中活性成分的靶點與肝纖維化的靶點取交集，得到梔子抗肝纖維化的潛在作用靶點。

2.6 梔子抗肝纖維化的“活性成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

為構(gòu)建“活性成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)圖，將梔子抗肝纖維化的活性成分及其與潛在靶點的對應(yīng)關(guān)系導(dǎo)入生物信息學(xué)分析軟件Cytoscape 3.8.2（https：//cytoscape.org/）。在這個網(wǎng)絡(luò)中，化合物和靶點分別由節(jié)點代表，并用邊表示它們之間的相互作用。采用Cyto NCA對網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析，通過參考拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)對比化合物在網(wǎng)絡(luò)中的重要性計算節(jié)點的度值。

2.7 梔子抗肝纖維化潛在作用靶點的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將梔子抗肝纖維化的潛在靶點上傳至STRING 12.0數(shù)據(jù)庫（https：//www.string-db.org/），設(shè)定物種為“Homo sapiens”，置信度閾值為 ≥ 0.9。利用生成的PPI圖，以度值為依據(jù)篩選出核心靶點。

2.8 梔子抗肝纖維化的GO功能富集和KEGG通路富集分析

將梔子抗肝纖維化的潛在靶點導(dǎo)入生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫David（https：//david-d.ncifcrf.gov/）分別進(jìn)行基因功能（Gene ontology， GO）富集分析和京都基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes， KEGG）信號通路富集。物種選擇“Home sapiens”，設(shè)定閾值p＜ 0.05，按基因命中個數(shù)簡單排序。篩選出前10條與肝纖維相關(guān)的生物學(xué)條目和前20條信號通路，并通過OmicStudio云平臺（https：//www.omicstudio.cn/tool）進(jìn)行可視化處理。

2.9 分子對接的驗證

利用ChemDraw 19.0（美國PerkinElmer公司）將梔子抗肝纖維化的核心成分轉(zhuǎn)化為3D結(jié)構(gòu)，并從RCSB PDB蛋白數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org/）下載核心靶點的相應(yīng)3D結(jié)構(gòu)。通過PyMOL 2.3.4軟件（美國Schro?dinger公司）對核心靶蛋白進(jìn)行初步處理，包括去除溶劑分子等。隨后，使用AutoDock 4.2分子對接軟件（http：//autodock.scripps.edu/）對核心靶蛋白和活性化合物進(jìn)行加氫處理和加電荷處理，并將它們保存為“pdbqt”格式的文件。最后，使用Vina插件完成核心成分和靶點的對接。

3 結(jié)果

3.1 梔子中活性成分的篩選

通過譜庫檢索、標(biāo)準(zhǔn)品和文獻(xiàn)信息［9］比對，共鑒定出梔子藥材中72個化合物。根據(jù)OB ≥ 20%、DL ≥ 0.1和Caco-2 ≥ -5.15的條件篩選出18個活性成分。此外，通過文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)梔子苷、蘆丁、西紅花苷等9個化合物雖未滿足篩選條件，但具有抗肝纖維化的活性，如梔子苷能通過減輕氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡，調(diào)節(jié)整體代謝，從而減輕肝纖維化［11］。蘆丁能通過抑制肝星狀細(xì)胞激活、促進(jìn)其凋亡從而治療肝纖維化［12］。西紅花苷通過lnc-LFAR1/MTF-1/GDNF途徑抑制小鼠肝星狀細(xì)胞的激活［13］。最終得到27個活性成分，詳細(xì)信息見表1。

表1 梔子中活性成分基本信息Tab.1 Basic information of active components in Gardeniae Fructus

3.2 梔子抗肝纖維化潛在作用靶點的獲取

通過Swiss Target Prediction和DrugBank共篩選出445個活性成分靶點。經(jīng)GeneCards和OMIM收集到6 454個肝纖維化相關(guān)靶點。取交集后獲得梔子抗肝纖維化的潛在靶點331個。

3.3 梔子抗肝纖維化的“活性成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

構(gòu)建的“活性成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)見圖1。該網(wǎng)絡(luò)由355個節(jié)點（24個成分和331個靶點）、946條邊組成，度值大于兩倍中位數(shù)的成分有8個，這些成分為梔子抗肝纖維化的核心成分。其中槲皮素、亞油酸、γ-亞麻酸、艾黃素、9-反式棕櫚烯酸度值排名前5，分別為99、85、82、80、80。

圖1 梔子抗肝纖維化的“活性成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)Fig. 1 “Active ingredients potential targets” network of Gardeniae Fructus against hepatic fibrosis

3.4 梔子抗肝纖維化潛在作用靶點的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

經(jīng)STRING獲取梔子抗肝纖維化潛在作用靶點的相互作用關(guān)系，見圖2。該網(wǎng)絡(luò)包含331個節(jié)點，971條邊，節(jié)點平均度值為5.87，度值大于兩倍中位數(shù)的靶點有77個，這些靶點為梔子抗肝纖維化的核心靶點。其中酪氨酸蛋白激酶SRC（Tyrosine-protein kinase SRC， SRC）、絲裂原活化蛋白激酶3（Mitogen-activated protein kinase 3， MAPK3）、絲裂原活化蛋白激酶1（Mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與活化轉(zhuǎn)錄因子3（Signal transducer and activator of transcription 3， STAT3）、熱休克蛋白90α家族A類成員1（Heat shock protein 90 alpha family class A member 1， HSP90AA1）度值排名前5，分別為55、50、48、44、44。

圖2 梔子抗肝纖維化潛在靶點的PPI網(wǎng)絡(luò)Fig. 2 PPI network of potential targets of Gardeniae Fructus against hepatic fibrosis

3.5 梔子抗肝纖維化的GO功能富集和KEGG通路富集分析

GO富集得到生物過程（Biological process， BP）相關(guān)條目699條，主要涉及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞增殖的正調(diào)控等。細(xì)胞組分（Molecular function， MF）相關(guān)條目173條，主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、ATP結(jié)合、鋅離子結(jié)合等。分子功能（Cellular component， CC）相關(guān)條目95條，主要涉及質(zhì)膜、胞漿、細(xì)胞質(zhì)等。各個項目排名前10的條目見圖3。

圖3 GO功能富集分析（前10）Fig. 3 GO functional enrichment analysis （top 10）

KEGG富集結(jié)果顯示，梔子抗肝纖維化主要與以下通路相關(guān)：代謝通路、癌癥通路、神經(jīng)活性配體受體相互作用、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（Phosphatidylinositol 3 kinase-protein kinase B，PI3K-Akt）信號通路、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化等。排名前20的信號通路見圖4。

圖4 KEGG通路富集分析（前20）Fig. 4 KEGG pathway enrichment analysis （top 20）

3.6 分子對接的驗證

梔子抗肝纖維化排名前5的核心成分與靶點對接結(jié)果見圖5A，結(jié)合能均小于0，說明這些成分與靶點能自發(fā)結(jié)合。槲皮素、艾黃素與大多數(shù)靶點結(jié)合能較低，結(jié)合活性較強(qiáng)，該結(jié)果與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選的結(jié)果一致，進(jìn)一步驗證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測靶點的可靠性。分子對接情況見圖5B。

圖5 化合物與靶點分子對接結(jié)果Fig. 5 Docking results of compound and target

4 討論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，梔子具有抗炎、抗氧化、保肝、利膽等藥理作用。梔子抗肝纖維化的功效物質(zhì)及作用機(jī)制尚未見深入研究。本研究采用UPLC-Q/TOF-MS技術(shù)檢測識別出梔子中化合物74個，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法篩選出梔子抗肝纖維化的活性成分27個，潛在作用靶點331個，其中核心成分8個，核心靶點77個，涉及生物功能967條和信號通路164條，表明梔子抗肝纖維化具有多成分、多靶點的的特點。

梔子抗肝纖維化的“活性成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果顯示，在27個活性成分中，槲皮素、亞油酸、γ-亞麻酸、艾黃素、9-反式棕櫚烯酸、甘草次酸、鄰苯二甲酸二丁酯、齊墩果酸的度值大于兩倍中位數(shù)，對整個網(wǎng)絡(luò)具有重要的貢獻(xiàn)意義［14］，推測這8個成分是梔子抗肝纖維化的主要功效物質(zhì)。實驗研究顯示，槲皮素具有較強(qiáng)的抗炎和抗氧化能力［15］，對四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠有抑制和肝保護(hù)作用。它能通過上調(diào)白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10， IL-10）和血紅素氧化酶-1（Heme oxygenase-1，HO-1）的表達(dá)從而抑制NOD樣受體蛋白3（NOD-like receptor protein 3， NLRP3）炎癥小體激活和炎癥因子分泌，進(jìn)而發(fā)揮對急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用［16］。亞油酸具有很強(qiáng)的抗炎活性［17］，且能通過腸道菌群抑制肝星狀細(xì)胞中的TGF-β信號傳導(dǎo)改善肝纖維化［18］。γ-亞麻酸雖不能直接干預(yù)肝纖維化，但其可通過減少脂肪沉積而改善非酒精性脂肪肝，這一作用可能是通過調(diào)控LKB1-AMPK-mTOR通路發(fā)揮的［19］。艾黃素是一種天然黃酮，具有具有抗氧化、抗炎活性，動物實驗表明其對四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化有保護(hù)作用［20］。甘草次酸可通過靶向活化HSC中的PRDX1/2從而引起ROS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡以改善肝纖維化［21］。另外，肝細(xì)胞鐵死亡會誘發(fā)肝纖維化，有報道發(fā)現(xiàn)齊墩果酸能通過調(diào)節(jié)ROS/鐵過載抑制氯化汞誘導(dǎo)的肝鐵死亡［22］。關(guān)于梔子中其他成分抗肝纖維化的研究報道較少，限制了對其功效物質(zhì)的進(jìn)一步驗證。

通過分析梔子抗肝纖維化潛在作用靶點的蛋白相互作用發(fā)現(xiàn)，度值排名前5位的靶點有SRC、MAPK3、MAPK1、STAT3、HSP90AA1。研究結(jié)果顯示，在硫代乙酰胺誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型和肝硬化患者中，SRC表達(dá)上調(diào)。抑制SRC可以降低原代肝星狀上皮細(xì)胞α-平滑肌肌動蛋白的表達(dá)，并且還能抑制轉(zhuǎn)化生長因子β（Transforming growth factor β， TGF β）誘導(dǎo)的肝細(xì)胞結(jié)締組織生長因子的表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)表明，SRC在肝臟纖維化中起著重要的作用，抑制SRC過度表達(dá)可在一定程度上阻止肝纖維化進(jìn)程［23］。MAPK1和MAPK3是MAPK信號通路的成員。在肝組織受損時，MAPK信號通路會被激活。外來調(diào)節(jié)激酶1/2（Extracellular signal-regulated kinase 1/2， ERK1/2）通路在干預(yù)肝纖維化中可能發(fā)揮作用，其中p-Erk1/2的下調(diào)可能與抑制HSC增殖以及相關(guān)基因表達(dá)有關(guān)［24］。與此同時，激活JNK和p38信號通路會促進(jìn)HSC的增殖［25］。綜上所述，MAPK在肝纖維化進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。STAT3通過參與肝星狀細(xì)胞的增殖和活化，進(jìn)而參與肝纖維化的發(fā)展。在肝細(xì)胞中，適度表達(dá)的STAT3有助于促進(jìn)肝細(xì)胞再生和肝臟修復(fù)。然而，過度表達(dá)的STAT3會導(dǎo)致肝星狀細(xì)胞的活化和過度增殖，從而引發(fā)肝纖維化乃至肝臟癌變的可能［26］。作為HSP90的一個亞型，HSP90AA1的主要功能是促進(jìn)目標(biāo)蛋白的成熟和結(jié)構(gòu)維護(hù)。它參與ATP酶活性有關(guān)的功能循環(huán)，以維持蛋白的正常功能發(fā)揮。此外，HSP90AA1還能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期促進(jìn)細(xì)胞增殖，并促進(jìn)細(xì)胞遷移［27］。由此可見，上述關(guān)鍵靶點均與肝纖維化相關(guān)。

GO功能富集結(jié)果表明，梔子主要調(diào)節(jié)與肝纖維化發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞增殖正調(diào)控、細(xì)胞凋亡過程負(fù)調(diào)控、G蛋白偶聯(lián)受體信號通路、炎癥反應(yīng)等過程。KEGG富集結(jié)果表明，梔子通過多種途徑在肝纖維化的治療中發(fā)揮作用。值得關(guān)注的是，單個成分可能調(diào)控多個途徑發(fā)揮作用，如核心成分中的槲皮素可能作用于代謝通路、PI3K-Akt信號通路、Rap1信號通路等。而同一途徑可能受到多個成分調(diào)控，如PI3K-Akt信號通路受到8個核心成分共同調(diào)控。已有報道證明，PI3K-Akt信號通路［28］、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化［29］、Rap1信號通路［30］、MAPK信號通路［31］、鈣信號通路［32］、Ras信號通路［33］與肝纖維化治療密切相關(guān)，進(jìn)一步驗證了網(wǎng)絡(luò)預(yù)測的準(zhǔn)確性。

分子對接結(jié)果顯示，排名前5的核心成分與靶點對接情況較好，能自由結(jié)合。從成分角度分析，槲皮素、艾黃素與大部分結(jié)合能較低；從靶點角度分析，MAPK3、MAPK1與大多數(shù)成分對接有較低的結(jié)合能。該結(jié)果提示梔子可能通過槲皮素、艾黃素等化合物作用于MAPK3等靶點發(fā)揮抗肝纖維化的功效。

5 結(jié)論

本研究利用UPLC-Q/TOF-MS、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)，初步闡明了梔子多成分、多靶點、多通路協(xié)同抗肝纖維化的作用機(jī)制。梔子可能通過槲皮素、亞油酸等活性成分作用于靶點，如MAPK3和MAPK1參與調(diào)控PI3K-Akt信號通路、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化以及MAPK信號通路等通路。這種調(diào)控產(chǎn)生了抗炎效應(yīng)、抑制肝星狀細(xì)胞活化并促進(jìn)其凋亡等，從而發(fā)揮抗肝纖維化的作用。這項研究為開發(fā)梔子治療肝纖維化的新藥提供了參考依據(jù)。此外，因為該研究依靠數(shù)據(jù)庫分析較多，存在一定的局限性，在后續(xù)的研究中將結(jié)合體內(nèi)外實驗進(jìn)行進(jìn)一步的驗證。