天花粉多糖對(duì)正常大鼠鎮(zhèn)痛作用的研究

呂 航,王紫怡,付立波,李佳林

(長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130032)

疼痛是一種極其復(fù)雜的體驗(yàn),在感知覺(jué)方面以及情感方面都有涉及[1]。疼痛產(chǎn)生的原因眾多,多種疾病都會(huì)因組織損傷產(chǎn)生相應(yīng)部位的疼痛,這也成為了病人就醫(yī)的主要原因,而沒(méi)有組織損傷則大多與心理因素有關(guān)。隨著科技進(jìn)步和研究深入,我們逐步發(fā)現(xiàn)了疼痛的機(jī)理是中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)外周傷害性刺激的反應(yīng),隨著研究逐步加深,出現(xiàn)了較為成體系的治療藥物,主要分為西藥和中成藥兩大類(lèi)。其中,西藥應(yīng)用較為廣泛,而在中成藥方面的研究相對(duì)較少。

天花粉是葫蘆科植物栝樓(TrichosantheskirilowiiMaxim)的干燥根。天花粉多糖是天花粉的主要活性成分,從天花粉中提取到的多糖含有兩組組分[2],是由6種單糖構(gòu)成的雜多糖,其提純以水提醇沉法為主[3]。生理功能主要為抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)[4]。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)天花粉多糖的研究主要集中于提純和生理功能的研究,尚沒(méi)有研究表明其是否具有鎮(zhèn)痛效果,故此次實(shí)驗(yàn)選擇天花粉多糖進(jìn)行痛覺(jué)方面的研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)器材

Randall-Selitto痛覺(jué)測(cè)試儀(壓板):出自意大利UGO;YLS-6B熱板儀:出自上海曼普生物公司;YP1201N電子天平:出自上海精科實(shí)業(yè)集團(tuán);注射器:出自江西洪達(dá)醫(yī)療器械集團(tuán)有限公司;灌胃針:出自上海玉研科學(xué)儀器有限公司;燒杯:出自浙江潤(rùn)蘭科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和動(dòng)物

天花粉蛋白粗提物:西安瑞英生物科技有限公司;生理鹽水:廣州零界醫(yī)藥有限公司;雄性Wistar大鼠6只:長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠灌胃

準(zhǔn)備灌胃針頭,用左手小指和無(wú)名指抓住大鼠尾巴,另外三指按住大鼠頸部,保持大鼠的頭部和頸部成一條直線,方便灌胃針頭順利進(jìn)入并將對(duì)大鼠的傷害降到最低。灌胃針從大鼠嘴角進(jìn)入,能夠壓住舌頭并抵住上顎,將灌胃針頭輕輕向內(nèi)推進(jìn),有刺空感說(shuō)明針頭順利通過(guò)食管進(jìn)入食道,此時(shí)可以進(jìn)行灌胃藥液推進(jìn)[5]。注意若無(wú)刺空感,不可強(qiáng)行將藥物灌胃,可以重新找準(zhǔn)位置將灌胃針頭插入。

2.2 行為學(xué)測(cè)痛

行為學(xué)測(cè)痛包括熱板測(cè)試和壓板測(cè)試兩部分。正式實(shí)驗(yàn)前,需對(duì)大鼠進(jìn)行為期至少7天的訓(xùn)練使大鼠熟悉測(cè)試內(nèi)容,做到人鼠配合默契。正式實(shí)驗(yàn)注射藥物前,進(jìn)行三輪測(cè)試求取平均值作為基礎(chǔ)對(duì)照值,分別灌胃生理鹽水,5,20,80 mg/mL的天花粉多糖水溶液,在灌胃后的5,10,15,20,30,45,60 min的7個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)測(cè)量大鼠后爪縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw Withdrawal Latencies,HWL)。

2.3 數(shù)據(jù)處理

將記錄的時(shí)間數(shù)據(jù)輸入Excel表格進(jìn)行初步計(jì)算,以“均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”形式表示,使用Origin9.1軟件作圖。數(shù)據(jù)整合分析使用SPSS 26.0軟件,其中組內(nèi)對(duì)比采用單因素方差分析,組間對(duì)比采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

生理鹽水與不同濃度天花粉多糖水溶液灌胃后大鼠HWL的變化百分比如表1至表3所示。由表1可知,與灌胃生理鹽水組相比,灌胃5 mg/mL天花粉多糖水溶液對(duì)正常大鼠的右爪的熱刺激HWL有差異(P<0.05),對(duì)左爪和右爪的機(jī)械刺激HWL均有顯著差異(P<0.05)。

表1 灌胃5 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺激的后爪縮爪反應(yīng)潛伏期變化

表2 灌胃20 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺激的后爪縮爪反應(yīng)潛伏期變化

表3 灌胃80 mg/mL天花粉多糖水溶液后大鼠對(duì)熱刺激和機(jī)械刺激的后爪縮爪反應(yīng)潛伏期變化

由表2可知,與灌胃生理鹽水組相比,灌胃20 mg/mL天花粉多糖水溶液對(duì)正常大鼠的左爪和右爪的熱刺激HWL有顯著差異(P<0.01),對(duì)左爪和右爪的機(jī)械刺激HWL也有顯著差異(P<0.01)。

由表3可知,與灌胃生理鹽水組相比,灌胃80 mg/mL天花粉多糖水溶液對(duì)正常大鼠左爪的熱刺激HWL有顯著差異(P<0.01),對(duì)右爪的熱刺激有極顯著差異(P<0.001),對(duì)左爪和右爪的機(jī)械刺激HWL均有極顯著差異(P<0.001)。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,與灌胃生理鹽水作對(duì)照,天花粉多糖水溶液具有鎮(zhèn)痛效果,且濃度越大,鎮(zhèn)痛效果越明顯,在30 min時(shí)鎮(zhèn)痛效果最佳,鎮(zhèn)痛效果會(huì)持續(xù)一定的時(shí)間。多數(shù)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),中藥成分中提取的多糖常為鎮(zhèn)痛作用的有效成分。例如伸筋草多糖在外周與中樞神經(jīng)上都能夠發(fā)揮止痛作用[6];甘青青蘭多糖能夠消炎止痛[7];枸杞多糖[8]與刺五加多糖[9]也能夠抗炎止痛等。且相關(guān)研究表明,多糖能通過(guò)抑制趨化因子與黏附因子表達(dá)和抑制酶活性從而進(jìn)行抗炎鎮(zhèn)痛[10-12];或者能夠降低炎癥初期毛細(xì)血管的通透性,抑制炎癥介質(zhì)部分滲出而減輕疼痛[13]。但對(duì)于天花粉多糖的鎮(zhèn)痛途徑還有待進(jìn)一步研究。